将细胞原位电泳与流式分析术结合的细胞固定方法技术

本发明专利技术公开了一种将细胞原位电泳与流式分析术结合的细胞固定方法，取待检测的细胞团加入4％的多聚甲醛预固定1-6秒钟，终止固定；将预固定后的细胞团中加入0.2％Triton X-100 200μl进行细胞打孔5-15分钟；将打孔后的细胞用PBS冲洗后，将冲洗后的细胞中加入电泳缓冲液制成细胞悬液；恒压条件下进行电泳，电泳完成后收集电泳缓冲液，将收集到的电泳缓冲液用70％的乙醇固定，固定22-26h。本发明专利技术采用了二次固定的方法，第一次固定时使用4％的多聚甲醛预固定1-6秒钟，使细胞膜的表面蛋白质变性，利于后续的打孔，保证细胞在打孔的过程中不破裂；若不进行第二次固定，细胞在进行后续的检测过程中会出现破裂，保证检测结果的准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及固定细胞的方法，具体地涉及一种。
技术介绍
细胞是生命体结构和生命活动的基本单元，研究细胞内分子间相互结合的作用对揭示生命规律，尤其是疾病的发生机制，具有十分重要的意义。细胞原位电泳(cell in situ electrophoresis),是将待检细胞制备成单细胞悬液，使其单个游离的细胞分散于等渗即应力平衡的介质中，在电场作用下，将细胞中的物质从细胞中分离出来的一种电泳方式。流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的细胞进行计数和分析。将细胞原位电泳与流式细胞分析术结合使用可以实现对细胞内蛋白质与核酸等物质结合状态的定量分析与分选。但目前尚未有一种能够适用于细胞原位电泳与流式细胞分析术结合配套的细胞固定方法，既可保持细胞的应力平衡、耐受细胞原位电泳过程，又可保证流式细胞术的样品处理与检测过程得以完成。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种。为实现上述目的，本专利技术通过以下技术方案实现:一种，包括以下步骤:(1)取待检测的细胞团加入4%的多聚甲醛预固定1-6 (优选3)秒钟，终止固定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种将细胞原位电泳与流式分析术结合的细胞固定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待检测的细胞团加入4％的多聚甲醛预固定1‑6秒钟，终止固定；(2)将预固定后的细胞团中加入0.2％Triton X‑100 200μl进行细胞打孔5‑15分钟；(3)将打孔后的细胞用PBS冲洗后，将冲洗后的细胞中加入电泳缓冲液制成细胞悬液；(4)恒压条件下进行电泳，电泳完成后收集电泳缓冲液，将收集到的电泳缓冲液用70％的乙醇固定，固定22‑26h。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：国前，于金明，廖湘鲁，
申请(专利权)人：山东省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：山东;37