小RNA组成的指纹图谱在人胃肠道间质瘤中的应用制造技术

本发明专利技术涉及小RNA组成的指纹图谱在人胃肠道间质诊断和治疗中的应用，由数个microRNA组成的指纹图谱可非常有效地区分良性胃肠道间质组织和恶性胃肠道间质组织，灵敏度高，特异性强，可有效用于胃肠道间质瘤诊断、肿瘤分级和预后评价。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种小RNA(miRNA;microRNA)指纹图谱在人的胃肠道间质瘤诊断 中的用途，属于生物医学、生物工程和检测

技术介绍
胃肠道间质瘤（gastrointestinalstromaltumor,GIST)是最常见的胃肠道间 叶性肿瘤，近年来才逐渐引起医师的重视。此病的特点是免疫组织化学CD117(KIT)染色阳 性。GIST起源于胃肠道固有肌层，具有腔外生长的倾向，易发生出血、坏死和囊变。 胃肠道间质瘤一词最早出现于半个世纪W前的病理学文献，是指一组不同于典 型平滑肌性肿瘤和神经源性肿瘤的独立的胃肠道间叶性肿瘤，其组织起源一直存在争议。 70%的GIST表达CD34,后者是一种造血祖细胞抗原，见于正常或肿瘤性内皮细胞，也可见 于部分成纤维细胞及相关肿瘤，据此有研究者提出胃肠道间叶性肿瘤可分为真正的平滑 肌瘤、许旺细胞瘤和GISTΗ类，而GIST是一种表达CD34的原始间叶细胞性肿瘤。CD117 即KIT，是一种具有酪氨酸激酶成分的干细胞生长因子跨膜受体，正常情况下见于造血干 细胞、生殖细胞、肥大细胞和黑色素细胞等，也可见于正常成人胃肠道的肠肌神经丛化jal 间质细胞（interstitialcellofCajal,ICC)。1998 年Sarlomoliikala等提出CD117 对 GIST的诊断更具特异性，几乎所有的GIST均为CD117阳性（95%)，而不论胃肠道还是其 他部位的平滑肌瘤或许旺细胞瘤均不表达CD117,送一发现不仅有助于GIST的明确诊断， 同时对研究其组织起源和发病机制也是至关重要的。 另外，根据影像学资料的统计，GIST最常见于胃，占60%~70%，W下依次是小肠 (20%~30%)和直肠肛口（10%W下），其他部位者较少见。但小肠病变所占比例有逐年 上升的趋势，甚至与胃部病变比例接近。 10%~30%的GIST为恶性病变，主要表现为局部侵袭和远处转移，近半数恶性病 人诊断时即可见腹腔播散和肝转移。区分肿瘤良恶性和评价预后的3个关键指标是有丝分 裂率、肿瘤大小和部位。肿瘤大小是预测病变行为的最有价值的单一指标，〉5cm的病变一般 具有恶性临床行为，而<2cm者一般为良性。胃部的良性病变比恶性者多3倍，一般认为胃 部病变如果最大径巧cm且有丝分裂《5/50HPF，则发生转移的危险性较低，病变可能为良 性；而如果病变大于10cm或有丝分裂巧/50HPF则为恶性；介于两者之间的病变为中间型， 具有中等程度的转移和复发危险性；部分病变有丝分裂巧0/50HPF，送种分裂明显的病变 为高度恶性，临床行为极具侵袭性。与同样大小的胃部病变相比，小肠GIST的侵袭性更强， 因此确定小肠病变复发和转移危险性的阔值应小于胃部病变者，如果病变最大径小于2cm 且有丝分裂《5/50HPF可能为良性，而如果病变大于5cm或有丝分裂巧/50HPF则为恶性， 介于两者之间的病变不能确定其恶性潜能。肿瘤大小虽然是判断肿瘤良恶性的重要指标， 但许多小型病变也可表现为恶性生物学行为，部分GIST虽然在组织学上表现为良性，但也 可出现复发和转移。因此临床上迫切需要为胃肠道间质瘤（GIST)开发新的生物标示物，W 进行准确的诊断和/或祀向治疗。miRNA现已成为研究RNA的一大热点，其表达水平和肿瘤细胞的分化程度密切相 关。其在转录后水平调控祀基因表达，具有广泛的基因调节功能，可调苄基因活动各个层 面，如生长、分化、调亡等。最近，有文献报道和GIST有关的miRNAs包括有miR-494，miR-17， miR-20a和miR-222 等。 尽管大量关于胃肠道间质治疗的研究，胃肠道间质瘤仍难于诊断和有效治疗，患 者中观测到的死亡率表明疾病的诊断、治疗和预防需要改进。
技术实现思路
[000引本专利技术的目的在于提供有效的小RNA指纹图谱，用于胃肠道间质瘤的诊断、肿瘤 分级和预后评价。 本专利技术第一方面，提供了一种miRNA集合或组合，所述的miRNA集合或组合包括： (a)两种或两种W上选自SEQIDNO. :1-17所示的序列；或 化）两种或两种W上选自与SEQIDNO. :1-17所示序列互补的互补序列；或[001引（C)来自（a)或化）的组合，且来自（a)的序列与来自化）的互补序列互相不为互 补。 在另一优选例中，所述的miRNA集合或组合至少含有SEQIDNO. : 1和2所示的序 列。 在另一优选例中，所述的miRNA集合或组合至少含有SEQIDNO. :1、2和3所示的 序列。 在另一优选例中，所述的miRNA集合或组合还含有一种或多种选自SEQID NO. :4-17所示的序列。 在另一优选例中，所述的miRNA集合或组合含有SEQIDNO. : 1-6所示的6种序列。 在另一优选例中，所述的miRNA集合或组合含有SEQIDNO. :1、2、7-15所示的11 种序列。 在另一优选例中，所述的miRNA集合或组合含有沈QIDNO. : 1-4、8-12、16-17所 示的11种序列。 在另一优选例中，所述的miRNA分离自人。 在另一优选例中，所述的序列可通过化学合成或构建真核细胞表达载体进行表达 获得。 在另一优选例中，所述的miRNA集合或组合包括： (i)序列如沈QIDNO: 1、2和3所示的miRNA;或 (U)与沈QIDNO: 1、2和3所示序列互补的miRNA。 本专利技术第二方面，提供了一种分离的或人工构建的前体miRNA,所述的前体miRNA 能在人细胞内剪切并表达成本专利技术第一方面所述miRNA集合或组合中的miRNA。本专利技术还提供一种分离的或人工构建的前体miRNA集合或组合，所述的前体miRNA集合或组合中的前体miRNA能在人细胞内剪切并表达成第二方面所述的miRNA集合 或组合中的miRNA。 本专利技术第Η方面，提供了一种分离的多核巧酸，所述的多核巧酸能被人细胞转录 成前体miRNA,所述的前体miRNA能在人细胞内被剪切且表达成本专利技术第一方面所述miRNA 集合或组合中的miRNA ; 较佳地，所述的多核巧酸具有式I所示的结构：[002引 Seq正向-X-Seq反向 式I，式I中， Seq正向为能在人细胞中表达成所述的miRNA的核巧酸序列， Seq反向为与Seq正向基本上互补或完全互补的核巧酸序列； X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和 Seq反向不互补， 并且式I所示的结构在转入人细胞后，形成式II所示的二级结构：式II，[003引式II中，Seq正向、Seq反向和X的定义如上述，II表示在Seq正向和Seq反向之间形成的碱基互补配对关系。 本专利技术还提供一种分离的多核巧酸集合或组合，所述的多核巧酸集合或组合包括 能被人细胞转录成前体miRNA的多核巧酸，所述的前体miRNA能在人细胞内被剪切且表达 成第二方面所述的miRNA集合或组合。 本专利技术第四方面，提供了一种载体，它含有本专利技术第一方面所述的miRNA集合或 组合，或本专利技术第Η专利技术所述的多核巧酸。 本专利技术第五方面，提供了本专利技术第一方面所述的miRNA集合或组合的用途，用于 制备区分良性胃肠道间质组织和恶性胃肠道间质组织的芯片或试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种miRNA集合或组合，其特征在于，所述的miRNA集合或组合包括：(a)两种或两种以上选自SEQ ID NO.:1‑17所示的序列；或(b)两种或两种以上选自与SEQ ID NO.:1‑17所示序列互补的互补序列；或(c)来自(a)或(b)的组合，且来自(a)的序列与来自(b)的互补序列互相不为互补。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谭若颖，朱苗骏，韩武梅，陆维祺，
申请(专利权)人：上海盛元生物技术有限公司，常州盛达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31