经鼻给药的流感疫苗免疫制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种经鼻给药的流感疫苗免疫制剂及其制备方法，经鼻给药的流感疫苗免疫制剂，含有如下配比的组分：以HA计，各价灭活流感疫苗50～150mg，免疫增强剂1～50g，渗透压调节剂0～9g，pH调节剂0～30g，水1000mL，所述的免疫增强剂选自烷基糖苷、壳聚糖、低酰基结冷胶或脂质体。本发明专利技术的优点在于：研制的流感疫苗经鼻免疫组合物，不需要注射给药，产生的免疫效果与肌肉注射效果相当。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及人用流感疫苗制剂及其制备方法。
技术介绍
流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒容易变异、传染性强、传播 速度快。流感流行给人类带来深重灾难，而且严重影响养禽事业的发展。流感病毒呈多形 性，有球状体和丝状体，为单股负链RNA病毒。球形病毒颗粒内，螺旋状的核壳体为病毒内 核，由核蛋白（nucleoprotein，N巧和多聚酶蛋白（RNA多聚酶成分：PB1、PB2、PA)组成核 衣壳蛋白（ribonucleop;rotein，RNP)，与RNA连接。中层为蛋白壳，含有基质蛋白（matrix， Ml)和膜蛋白（membraneprotein,M2)。外层来自宿主细胞的双层类脂囊膜，囊膜上有血凝 素化emagglutinin，HA)、神经氨酸酶（neuraminidase,NA)和M2蛋白构成的突起。M2是跨 膜离子通道蛋白，一部分在病毒中层，一部分在病毒外层。病毒表面钉状物是棒状=聚体的 HA和磨茹形的四聚体的NA,与黏多糖和糖蛋白具有亲和力，与细胞表面含唾液酸的受体具 有更强亲和力。甲型和乙型流感病毒基因组有8个基因片段，分别编码10种蛋白，其中8种 是病毒颗粒的组成成分（HA、NA、NP、Ml、M2、PBl、PB2和PA)，另两段RNA基因片段编码非结 构蛋白一NSl和NS2。运10种蛋白区分为表面蛋白、内部蛋白和非结构蛋白。HA、NA和M2 是表面蛋白；内部蛋白包括PB1、PB2、PA、由PBl基因编码的PB1-F2、NP、Ml和NS2 ;NS1产 生于感染细胞，不包装在病毒颗粒内。根据核蛋白和膜蛋白抗原的差异，流感病毒分为甲、 乙、丙=型。甲型流感病毒由于血凝素和神经氨酸酶抗原的不同，又分为不同亚型。血凝素 有16个亚型，神经氨酸酶有9个亚型。任何一种HA和任何一种NA都构成一种血清型。 裂解型流感灭活疫苗，是建立在流感全病毒灭活疫苗的基础上，通过选择适当的 裂解剂和裂解条件裂解流感病毒，去除病毒核酸和大分子蛋白，保留抗原有效成分HA和NA W及部分M蛋白和NP蛋白，经过不同的生产工艺去除裂解剂和纯化有效抗原成分制备而 成。1968年流感裂解疫苗（inactivatedsplitvirusvaccines)开始大规模生产，疫苗除 含有表面抗原HA和NA外，还含有病毒核壳体和基质蛋白。免疫原性良好，不良反应轻，因 此，裂解疫苗成为目前流感疫苗主流产品。 目前用于免疫人群的疫苗主要是针对甲（A)型流感病毒化Nl亚型、册N2亚型W 及乙度）型流感病毒的=联灭活疫苗。 流感病毒同许多病原体一样，侵染黏膜表面，首先是上呼吸道黏膜表面。黏膜免疫 构成了宿主的第一道防线，是鼻道和下呼吸道免疫反应的主要组成部分。尽管目前使用的 注射流感疫苗在大部分健康个体中刺激血清HA-特异性IgG,但仅有小部分接种者HA-特异 性IgA抗体出现显著上升。免疫原性和临床效力更佳的改进流感疫苗必须W能激发局部抗 体反应和系统抗体反应运两者为目标。 黏膜免疫提供了替代传统免疫的新途径。黏膜免疫可W从病原入侵人体开始发挥 作用并且感染不易扩散。此外，黏膜免疫还具有W下优点：免疫方便、可降低成本大面积人 群免疫、无需专业人员、避免无菌针头和卫生不足引起交叉感染。 第一个经鼻黏膜免疫的流感疫苗2001年欧洲上市，后因潜在毒性问题撤市。第二 个产品是医学免疫（MedImmune)公司的鼻腔喷雾给药流感病毒活疫苗（InfluenzaVirus VaccineLive,商品名：FluMist)，用于2-49岁人群预防流感A型或B型病毒。2003年被 美国FDA批准后，成为美国首个用于健康成人的鼻腔喷雾给药流感疫苗。FIuMist与传统的 流感疫苗相比有两个特点：一是含弱活流感病毒而不是死病毒，它们能在鼻和咽部生长，但 在溫度较高的下呼吸道不能生长；二是经鼻腔喷雾免疫而不需注射接种。 对于经鼻给予灭活流感疫苗而言，因为较活病毒免疫原性低，不易产生免疫应答。 相关研究虽然很多，但均没有达到国际通行的有效免疫标准，或者给予次数和抗原量在商 业上不可行。迄今为止，灭活流感疫苗的经鼻免疫制剂尚未见临床应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种经鼻给药的灭活流感疫苗免疫制剂及其制备方法，W满 足临床应用的需要。 所述的经鼻给药的流感疫苗免疫制剂，含有如下配比的组分： WHA汗，各价灭活流感疫苗 50~KOmg 免疫增强剂 1-5婚 渗透压调节剂 0~9g P扫调节剂 0~30g 水 1000 mL 所述的灭活流感疫苗为甲型流感病毒化Nl亚型、册N2亚型W及乙型流感病毒的 单价、二价或=联灭活疫苗，也可W是其他亚型的流感疫苗； 所述的免疫增强剂选自烷基糖巧、壳聚糖、低酷基结冷胶或脂质体； 所述的抑调节剂选自憐酸盐缓冲液（抑=6~8)、冰醋酸-醋酸钢缓冲液（pH4~ 5)或其他缓冲盐。 所述的渗透压调节剂选自氯化钢、氯化钟、葡萄糖等。 术语"HA"，指的是流感病毒包膜表面柱状抗原，能与人、鸡、豚鼠等多种红细胞受 体结合引起红细胞凝集，具有免疫原性。为保护型抗原，其诱导的抗体为血凝抑制抗体，能 抑制血凝现象。功能：凝集红细胞，吸附宿主细胞，具抗原性，不稳定性，是划分亚型的依据。 在国际病毒学杂志2010年8月第17卷第四期《流感疫苗的现状与未来》中，对其有明确的 定义，可W用于计量灭活流感疫苗的用量； 所述的烷基糖巧优选烷基部分由6-20个碳的烷基糖巧，糖巧为麦芽糖巧、薦糖巧 或葡萄糖巧；最优选十二/十四烷基-葡萄糖糖巧；[001引所述的壳聚糖的脱乙酷度85%W上，分子量为5~100万； 所述的低酷基结冷胶为结冷胶中的一种，所述的结冷胶又称凯可胶，是一种高分 子线性多糖，由4个单糖分子组成的基本单元重复聚合而成.其基本单元是由1，3-和1， 4-连接的2个葡萄糖残基，1，3-连接的1个葡萄糖醒酸残基，和1，4一连接的1个鼠李糖 残基组成。其中葡萄糖醒酸可被钟、钢、巧、儀中和成混合盐。并且天然结冷胶含有0-酷基 (甘油酷基和乙酷基）。天然或称高酷基结冷胶可形成高弹性低硬度凝胶。乙酷化结冷胶 通过碱处理除去O-酷基后生成低酷基结冷胶，再经过滤可得到纯化低酷基结冷胶，即商品 结冷胶，其相对分子质量约为50万。结冷胶在阳离子存在时，在加热后冷却时生成坚硬脆 性凝胶。其硬度与结冷胶浓度成正比，并且在较低的二价阳离子浓度时产生最大凝胶硬度。 所述的脂质体由卵憐脂或憐脂衍生物与胆固醇组成，也可含有其他成分如十八胺 等，制备方法可参见《径基喜树碱脂质体的制备与性质研究》、《脂质体作为干扰素-a载体 的研究》等文献 本专利技术的制备方法之一，包括如下步骤： 将烷基糖巧加入所述的憐酸盐缓冲盐溶解，获得烷基糖巧溶液； 将所述的灭活流感疫苗与所述的烷基糖巧溶液混合，获得所述的经鼻给药的流感 疫苗免疫制剂； 本专利技术的制备方法之二，包括如下步骤：将壳聚糖加入所述的冰醋酸-醋酸钢缓冲液溶解，然后与所述的灭活流感疫苗混 合，获得所述的经鼻给药的流感疫苗免疫制剂； 本专利技术的制备方法之S，包括如下步骤： 将低酷结冷胶加入水溶解，然后与所述的灭活流感疫苗混合，获得所述的经鼻给 药的流感疫苗免疫制剂； 本专利技术的制备方法之四，包括如下步骤： (1)将处方量卵本文档来自技高网...

【技术保护点】
经鼻给药的流感疫苗免疫制剂，其特征在于，含有如下配比的组分：所述的免疫增强剂选自烷基糖苷、壳聚糖、低酰基结冷胶或脂质体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴闻哲，侯惠民，吴慧，张琪，
申请(专利权)人：上海现代药物制剂工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31