免疫调节剂制造技术

本发明专利技术提供了特异性结合PD-L1的抗体和包含利用IL15受体结合结构域构建的PD-L1结合蛋白的融合分子、编码所述抗体或融合分子的核酸分子以及其治疗性组合物。所述试剂抑制PD-L1介导的免疫抑制并且增强细胞和细胞因子介导的免疫，以用于治疗肿瘤性和感染性疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术提供特异性结合PD-L1的单克隆抗体和包含利用IL15和IL15受体αsushi结构域构建的PD-L1结合蛋白的双特异性融合分子、编码所述抗体和融合分子的核酸分子及其治疗性组合物。所述试剂增强T细胞和NK细胞的功能，以增强细胞和细胞因子介导的免疫以用于治疗各种免疫功能障碍相关病症，包括癌症和感染性疾病。相关申请的交叉引用本申请要求2014年1月15日提交的美国临时申请号61/927,907的优先权，所述美国临时申请的内容通过引用以其整体并入本文。专利技术背景程序化死亡1(PD-1)为CD28受体家族(包括CD28、CTLA-4、PD-1、ICOS和BTLA)的成员(Freeman等人(2000)JExpMed192：1027-34；Latchman等人(2001)NatImmunol2：261-8)。PD-1是在免疫病理病况的进展过程中主要在活化T细胞和B细胞上被上调的诱导型免疫抑制受体。通过基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)的固有PD-1介导的负信号转导，PD-1与其配体PD-L1的相互作用导致TCR和BCR介导的增殖和细胞因子产生的抑制以及抗原特异性T细胞的细胞凋亡的诱导(Agata等人(1996)Int.Immunol.8：765，Unkeless和Jin.(1997)Curr.Opin.Immunol.9：338-343，Okzaki等人(2001)PNAS98：13866-71，Dong等人(2002)Nat.Med.8：793-800)。PD-L1是细胞表面糖蛋白和PD-1的主要配体。PD-L1在细胞活化后在淋巴样组织和非淋巴样外周组织上也是可诱导的。PD-L1在多种受累细胞类型(除了免疫细胞以外，还包括癌症和基质细胞)中被上调，并且在疾病恶化过程中在免疫抑制中起着活性作用(Iwai等人(2002)PNAS99：12293-7，Ohigashi等人(2005)ClinCancerRes11：2947-53)。PD-L1的上调已与多种癌症和病毒感染的不良临床结果相关联(Hofmeyer等人(2011)J.BioMed.Biotech.2011：1-9，McDermott和Atkins.(2013)CancerMed.2：662-73)。抗体对PD-1或PD-L1的阻断在临床前和临床背景中促进CD8T细胞浸润、CTL活性和增加的Th1细胞因子IFN-γ的存在(Zhou等人(2010)J.Immunol.185：5082-92，Nomi等人(2007)ClinCancerRes.13：2152-7，Flies等人(2011)YaleJ.Bio.Med.48：409-21，Zitvogel和Kroemer.(2012)OncoImmunol.1：1223-25)。当作为单一疗法使用或与其它免疫抑制分子的抗体组合使用时，PD-L1抗体作为免疫调节剂已被证明是有效的。然而，针对免疫抑制因子的免疫调节干预仅部分解决了与癌症、感染和其它疾病中的受损免疫力相关的问题。仍然高度期望利用生物治疗剂来直接刺激和扩增效应子免疫细胞以提升减弱的先天和适应性免疫应答至更有效的水平，以控制肿瘤和感染。使用细胞因子(包括白细胞介素，即IL-2，IL-12，IL15，IL-21和TNFα，GM-CSF等)的免疫疗法已被证明在癌症和感染的治疗中在某种程度上是有效的，但临床结果往往受到与获得功效所需的细胞因子的高血浓度相关的全身性毒性以及在受累细胞和组织中靶的特异性的缺乏限制。在被评估的细胞因子中，IL15被公认为专注于刺激效应及中央记忆CD8T细胞(由一个亚组的抗原特异性CD8细胞组成)以发挥抗肿瘤免疫，而不调节对其它T细胞群的作用。此外，与激活Treg的IL-2不同，IL15经显示除了其激活天然杀伤(NK)细胞以及效应和记忆CD8T细胞的能力以外还具有从由Treg和其它免疫抑制细胞诱导的细胞凋亡拯救T细胞的能力(VanBelle等人(2012)PLoSOne7：e45299，Obar和Lefrancois.(2010)J.Immunol.185：263-72，Pelletier和Girard.(2006)JImmunol177：100-108，Elpek等人(2010)PNAS107：21647-21652)。基于其刺激鼠T细胞系CTLL-2的增殖的能力，IL15在1994年被鉴定为γc细胞因子(Grabstein等人(1994)Science264：965-8，Bamford等人(1996)PNAS93：2897-902)。人IL15分别与猿猴和食蟹猴IL15共有约97％和96％的氨基酸序列同一性。人与小鼠IL15具有73％的同源性，并且对小鼠细胞的活性相当。IL15为由DC、巨噬细胞和颗粒细胞以14-15kDa的糖蛋白形式分泌的12.5KD的蛋白(114个氨基酸)，并且也是四种含α-螺旋束的细胞因子的成员(Andderson等人(1995)JBiolChem.270：29862-9，Steel等人(2012)TrendsPharmacol.Sci.33：35-41)。IL15在结合于T细胞和NK细胞上的功能性IL15受体β和γ单位之前通常与在APC上表达的IL15受体α形成复合物。IL15可通过表达其本身结合于受体α链的膜形式的细胞因子的细胞被反式呈递至表达CD122和CD132的应答细胞(Dubois等人(2002)Immunity17：537-47)。IL15受体αsushi结构域(大小为29.5KD)是在与受体β和γ正确接合(engagement)之前与IL15形成复合物的至关重要的组分(Wei等人(2001)J.Immunol.167：277-82)。IL15与IL15Rα的复合物和IL15/IL15Rαsushi结合域融合蛋白据报导相较于单独的IL15在体外和体内高效地刺激CD8T细胞和NK细胞(Mortier等人(2005)JBiolChem.281：1612-19，Stoklasek等人(2006)J.Immunol.177：6072-80)。IL15还诱导被刺激的人B细胞的增殖和分化(Armitage等人(1995)JImmunol.154：483-90)。有人提出IL15通过用于延长T淋巴细胞的存活来主要对抗活化诱导的细胞死亡(AICD)(Marks-Konczalik等人(2000)PNAS97：11445-50)。IL15具有支持NK细胞以及记忆表型和抗原特异性记忆C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合PD‑L1的抗体或其片段，其包含具有序列X1YX2MX3(SEQ ID NO：328)的重链CDR‑1H，其中X1为A、G、M、Q、S、Y或W，X2为A、L、M、Q、R、S、V、W或Y，并且X3为A、F、L、M、S、T、V或Y；具有SEQ ID NO：243的重链CDR‑2H；以及具有SEQ ID NO：245的序列的重链CDR‑3H。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.15 US 61/9279071.一种结合PD-L1的抗体或其片段，其包含具有序列
X1YX2MX3(SEQIDNO：328)的重链CDR-1H，其中X1为A、G、M、
Q、S、Y或W，X2为A、L、M、Q、R、S、V、W或Y，并且X3为A、F、L、M、S、T、V或Y；具有SEQIDNO：243的重链CDR-2H；
以及具有SEQIDNO：245的序列的重链CDR-3H。
2.根据权利要求1所述的抗体或片段，其中所述重链CDR-1H
具有选自以下的序列：SEQIDNO：241、SEQIDNO：264、SEQID
NO：266、SEQIDNO：268、SEQIDNO：270、SEQIDNO：272、
SEQIDNO：274、SEQIDNO：276、SEQIDNO：278、SEQIDNO：
280、SEQIDNO：282、SEQIDNO：284、SEQIDNO：286、SEQID
NO：288、SEQIDNO：290、SEQIDNO：292、SEQIDNO：294、
SEQIDNO：296、SEQIDNO：298、SEQIDNO：300、SEQIDNO：
302、SEQIDNO：304、SEQIDNO：306、SEQIDNO：308、SEQID
NO：310和SEQIDNO：312。
3.根据权利要求1所述的抗体或片段，其中所述重链CDR-1H
具有SEQIDNO：266的序列。
4.根据权利要求1所述的抗体或片段，其中所述重链CDR-1H
具有SEQIDNO：290的序列，。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或片段，其中所述
重链可变结构域与SEQIDNO：246具有至少85％的同一性。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或片段，其中所述
轻链包含具有SEQIDNO：247的CDR-1L、具有SEQIDNO：248
的CDR-2L和具有SEQIDNO：249的CDR-3L。
7.根据权利要求6所述的抗体或片段，其中所述轻链可变结构
域与SEQIDNO：250具有至少85％的同一性。
8.一种结合PD-L1的抗体或其片段，其中所述轻链包含具有
SEQIDNO：247的CDR-1L、具有SEQIDNO：248的CDR-2L和
具有SEQIDNO：249的CDR-3L。
9.根据权利要求8所述的抗体或片段，其中所述轻链可变结构
域与SEQIDNO：250具有至少85％的同一性。
10.一种结合PD-L1的抗体或其片段，其包含具有如表1中所示
的CDR-1H、CDR-2H和CDR-3H的重链可变结构域。
11.一种结合PD-L1的抗体或其片段，其包含具有如表1中所示
的CDR-1L、CDR-2L和CDR-3L的轻链可变结构域。
12.根据权利要求10所述的抗体或片段，其包含具有如表1中
所示的CDR-1L、CDR-2L和CDR-3L的轻链可变结构域。
13.一种结合PD-L1的抗体或其片段，其包含表1中所示的重链
可变结构域序列，或具有保守取代以便其与表1中所示的所述重链可
变结构域序列具有至少95％的同一性的...

【专利技术属性】
技术研发人员：SD瓦克萨尔，Z朱，Y吴，SA马托莫，Z钟，D卢，
申请(专利权)人：卡德门企业有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US