在步骤S101中，将含有血浆的样品和凝固活化剂以凝固活化剂定位在前、在流路的延伸方向上依次排列的部分彼此接触地流动的状态引入流路中。在步骤S102中，在凝固活化剂、凝固活化剂和样品之间的接触区域以及样品以这样的顺序通过沿流路在中途设置的测定部的过程中，以按时间顺序的方式测定凝固活化剂和接触区域的折射率。在步骤S103中，通过比较第一折射率与第二折射率测定样品的血液凝固能力，所述第一折射率是凝固活化剂的折射率，所述第二折射率是接触区域的最小折射率。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术设及测定血液或血浆凝固能力的。
技术介绍
血液凝固活性是用于得到指标的重要项目，所述指标用于筛选外源性凝血因子不 足或监测肝功能的异常和口服给药的抗凝血剂治疗。 运种血液凝固检测主要使用PT(凝血酶原时间）测定法、APTT(活化部分促凝血 酶原激酶时间）测定法、血纤蛋白原检测等。通过使用医院里的大型分析设备进行运些测 定和检测。当使用运些方法中的PT测定法和APTT测定进行检测时，将蛋白（血栓调节蛋 白或较花酸）和凝固血液的巧离子大体上混合作为血浆中的凝固反应触发物，测定从混合 开始到凝固完成的时间（凝固点），并通过比较测得时间与标准血浆结果估测滞后时间。 运种测定内源性/外源性血液凝固途径的血液凝固活性的PT法目前在国际上已 经标准化（PT-INR)并且被认为是高重复性和高可靠性的检测项目。例如，首先，揽拌阻力 方案作为物理的实施PT法的方法是可行的。揽拌阻力方案是运样的方法：将样品（标本） 与活化剂一起引入，并从用叶片揽拌样品和活化剂时揽拌阻力的上升测定血液凝固时间。 此外，作为实施PT测定法的方法，光散射法是可行的（参见专利文献1、2和3)。 光散射法是运样的方法：在测定容器中将作为祀标的血浆与含有用于促进凝固活化的成分 的试剂混合，使光进入容器，并通过测定入射光的散射光的量的改变测定血液凝固时间。从 散射光的量得到血液凝固时间的方法包括直接使用散射光的量的方法，使用散射光的量的 导数值的方法和得到直到散射光的量达到预定值的时间的方法（参见专利文献1)。 W上揽拌阻力方案和光散射法目前在许多情况下常用于血液凝固的检测。除它们 之外，已经开发了热传导方案、晶体振荡器方案、使用磁珠的聚集测定法（参见专利文献4) 等。 此外，本专利技术的专利技术人已提出一种通过使用SPR(表面等离子体共振）测定法测定 流速来检测凝固活性方法，所述测定法使用具有微流路的忍片。在该检测中，首先，在即将 测定之前制备通过与凝固活化剂（较花酸和氯化巧）混合而完全活化的血浆样品。然后， 将血浆样品引入预先用缓冲溶液填充的流路W将血浆在流路中流动的流速转化为凝固时 间（参见专利文献5)。使用运样的微流路的流速测定具有可W使用少量样品快速测定凝固 活性的优点。 相关技术文献 [000引专利文献 专利文献1 :日本专利公开号06-027115 专利文献2 :日本专利公开号2009-506332 专利文献3 :日本专利公开号09-266798 专利文献4 :日本专利公开号09-502800 专利文献5 :日本专利公开号2011-232137 专利文献6:日本专利公开号2010-133727 非专利文献 非专利文献1:MasayukiNAYA等，"使用单片棱镜尖的高敏感度SPR传感器"， 即JIFILMRESEARCH&DEVELOPMENT,NO. 50,PP.51-54,2005
技术实现思路
[001引本专利技术要解决的问题 然而，W上基于流速的血液凝固检测不能进行精确的检测。在血液凝固检测中，在 通过使用凝固活化剂在血浆中产生凝固活性物质后，测定归因于粘度增加的流速变化，所 述粘度增加由主要从血纤蛋白形成的凝固物质引起。出于运一原因，不溶性蛋白非特异性 吸附于用于测定的测定容器而污染其表面。特别是，血纤蛋白是具有分子量大到允许多个 蛋白残基之间同时相互作用的蛋白，因此具有比其他蛋白更高的非特异性吸附能力。 如上描述的，在血液凝固检测中，由于用于检测的流路内部被污染，该污染将改变 流速。由污染所致的流速改变造成大的测定误差，导致不能得到精确的测定值。为了解决 运一问题，例如，可W清洗流路内部W总是保持流路内部一致清洁。运样的清洗技术包括， 例如，用蛋白移除溶液例如碱性清洗溶液填充流路内部或浸溃每个微流路忍片的方法，W 及作为物理技术的使用清洗溶液喷射、超声清洗等的组合的方法（参见专利文献6)。[002。 然而，由于在清洗期间不能进行检测，当例如连续进行多个检测时，检测通过量大 幅下降。此外，通过测定流速来进行血液凝固检测的技术被设计为测定依赖于粘度的流速。 出于运一原因，当测定具有相同凝固能力但具有不同粘度的样品时，不可能正确区分运些 凝固能力。 如上所述，使用微流路的血液凝固检测具有可W通过使用少量样品快速测定凝固 活性的优点。然而，使用流速将产生不能进行精确检测的问题。 为了解决上述问题做出本专利技术，并且其目的是通过使用微流路的血液凝固检测更 精确地检测血液凝固能力。 解决问题的手段根据本专利技术的包括：第一步骤，将含有血浆的样品和凝固活化 剂W所述凝固活化剂定位在前、在流路的延伸方向上依次排列的部分彼此接触地流动的状 态引入所述流路中；第二步骤，在所述凝固活化剂、所述凝固活化剂和所述样品之间的接触 区域和所述样品W运样的顺序通过沿所述流路在中途设置的测定部的过程中，W按时间顺 序的方式测定所述凝固活化剂和所述接触区域的折射率；和第=步骤，通过比较第一折射 率值与第二折射率值测定所述样品的血液凝固能力，所述第一折射率值是所述凝固活化剂 的测得折射率，所述第二折射率值是所述接触区域的测得最小折射率。注意：优选将在测定 部通过表面等离子体共振测定测得的表面等离子体共振角用作折射率值。[002引专利技术效果 如上描述，根据本专利技术，可W得到W下优异的效果：能够通过使用微流路的血液凝 固检测更精确地检测血液凝固能力。【附图说明】 图1是用于说明根据本专利技术的一个实施方案的的流程图； 图2是用于说明凝固活化剂211和样品212如何在基板201和流路基板203之间 形成的微流路204中流动的图； 图3是显示在不发生凝固反应的时候，当凝固活化剂211和样品212在微流路204 中流动时测得的折射率的变化的图； 图4是显示在发生凝固反应的时候，当凝固活化剂211和样品212在微流路204 中流动时测得的折射率的变化的图；[003引图5是显示测定忍片400和SPR设备500的布置的透视图；[003引图6图示了显示测定忍片400的布置的剖面图（a)和化）和平面图（C); 图7图示了显示在接触区域413通过测定区域431的过程中测得的SPR角度变化 的图； 图8是用于说明相对于折射率已经下降的接触区域设置的宽度和深度的参数的 图；图10是显示使用标准样品（活性度：86% )和75%PT凝固活化剂的实验中重复 测定的结果作为深度（第二折射率值和第一折射率值）的图；和[003引图11是显示在用稀释剂稀释标准样品（活性度：86%)而制备具有不同活性度 (64%、43%和22%)的样品后，由根据W上实施方案的测定测得的结果（深度）产生的校 准曲线的图。【具体实施方式】 W下将描述本专利技术的一个实施方案。图1是用于说明根据本专利技术的一个实施方案 的的流程图。首先，在步骤S101中，将含有血浆的样品和凝固活化剂W 凝固活化剂定位在前、在流路的延伸方向上依次排列的部分彼此接触地流动的状态引入流 路中（第一步）。所述流路是例如形成在当附到表面等离子体共振测定设备时使用的测定 忍片中的微流路。 在步骤S102中，在凝固活化剂，凝固活化剂和样品之间的接触区域，和样品W运 样的顺序通过沿流路在中途设置的测定部的过程中，W按时间顺序的方式测定凝固活化剂 和接触本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血液凝固检测方法，其包括：第一步骤，将含有血浆的样品和凝固活化剂以所述凝固活化剂定位在前、在所述流路的延伸方向上依次排列的部分彼此接触地流动的状态引入流路中；第二步骤，在所述凝固活化剂、所述凝固活化剂和所述样品之间的接触区域和所述样品以这样的顺序通过沿所述流路在中途设置的测定部的过程中，以按时间顺序的方式测定所述凝固活化剂和所述接触区域的折射率；和第三步骤，通过比较第一折射率值与第二折射率值测定所述样品的血液凝固能力，所述第一折射率值是所述凝固活化剂的测得折射率，所述第二折射率值是所述接触区域的测得最小折射率。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：井上铃代，林胜义，岩崎弦，堀内勉，松浦伸昭，为近惠美，
申请(专利权)人：日本电信电话株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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