本发明专利技术公开了Terreumol A在制备神经保护药物中的应用，属于药物领域。研究发现应用20μmol/LAβ25-35能有效建立体外培养的大鼠嗜铬瘤细胞株PC12凋亡模型；Terreumol A能部分对抗Aβ25-35诱导的PC12凋亡，可以进一步研究开发成制备神经保护的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物TerreumolA的新用途，具体涉及TerreumolA在制备神经保 护药物中的应用。
技术介绍
XiaYin等人首次分离纯化出化合物TerreumolA，并将成果发表在著名天 然产物杂志JournalofNaturalProduct上（HighlyOxygenatedMeroterpenoids fromFruitingBodiesoftheMushroomTricholomaterreum，J.Nat.Prod.，2013,76， 1365-1368)。目前尚未有该化合物的活性报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种TerreumolA的医药用途。 上述目的是通过如下技术方案实现的：TerreumolA在制备神经保护药物中的应用，所述TerreumolA化学结构式如下， 【附图说明】 图I:MTT代谢率检测A0 25 35对PC12细胞的毒性作用； 图2:AP25 35对PC12细胞LDH释放率的影响； 图3:A0 25 35和/或TerreumolA对PC12细胞LDH释放率的影响。【具体实施方式】 下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容。 实施例I:TerreumolA的分离制备及结构确证TerreumolA的制备方法同文献报道的制备方法（HighlyOxygenated MeroterpenoidsfromFruitingBodiesoftheMushroomTricholomaterreum，J.Nat.Prod.，2013, 76,1365-1368)。结构确证：黄色晶体，分子式为C25H34O8，不饱和度为8。IR数据显示化合物含有 羟基基团（3440cm1)，化合物在372和291nm有紫外吸收表明其含有共辄结构部分。核 磁共振氢谱数据SH(ppm，DMS0-d6,600MHz) :H-2(6. 52,s)，H-5(3. 44,d，J= 15. 1)， H-5 (2. 77,d，J= 15.I)，H-7 (2. 85,dd，J= 9. 8, 3. 8)，H-8 (2. 27,m)，H-8 (I. 45,m)， H-9(2. 33,dd，J= 12. 7,7. 3)，H-9(l. 43,m)，89,m)，H-15(l. 33,s)，H-16(l. 38， s)，1-0H(11. 97,s)，4-0H(7. 85,s)，3-0CH3(3. 96,s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMS0-d6， 600Hz) : 159. 2 (C，1-C)，99. 7 (CH，2-C)，155. 0 (C，3-C)，139. 7 (C，4-C)，29. 8 (CH2, 5-C)， 60. 4 (C，6-C)，66.I(CH，7-C)，25. 5 (CH2, 8-C)，34. 9 (CH2, 9-C)，64. 7 (C，10-C)，64. 4 (CH， 11-C), 199. 6 (C, 12-C), 115. 2 (C, 13-C), 123. 6 (C, 14-C), 21. 5 (CH3,15-C), 16. 4 (CH3,16-C), 56. 6 (CH3, 3-0CH3)。结构确证数据与文献报道一致，因此可以确定本化合物即为文献报道的 TerreumolA0 实施例2:TerreumolA的药理作用试验 -、材料和仪器A0 25 35购于美国sigma公司。TerreumolA自制，HPLC归一化纯度大于98%。 MTT(四唑氮蓝）购于美国Amresco公司。LDH测定试剂盒购于南京建成生物有限公司。吖 啶橙（AO)购于美国sigma公司。溴化乙啶（EB)购于美国sigma公司。RNase酶购于美国 sigma公司。蛋白酶K购于美国sigmaAnnexin公司。V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购于南 京凯基生物科技发展有限公司。D-MEM/F12培养基干粉购于美国GibcoL公司。马血清购于 美国hycLon公司。胎牛血清购于杭州四季青生物工程有限公司。多聚赖氨酸（PLL)购于 美国sigma公司。低温高速离心机（美国Heraeus)，二氧化碳培养箱（美国SHELL/JB)，超净工作 台（苏州净化设备厂），雷勃MK3酶标仪（芬兰Thermolabsystems)，焚光显微镜（德国 Leica)，流式细胞仪EpicsXL(美国CouLter公司），电泳系统（北京六一仪器厂），雷勃MK3 酶标仪（芬兰Thermolabsystems)，焚光显微镜（德国Leica)，流式细胞仪EpicsXL(美国 CouLter公司），电泳系统（北京六一仪器厂）。 二、试验方法 1、细胞培养 ?(：12细胞生长于含10%马血清、5%胎牛血清的0-1^11作12培养液（37°(：，体积分 数为〇. 05的CO2，饱和湿度），常规传代。实验时培养器皿用0. 005%PLL溶液（分子量为 150,000-300,000)包被，增加PC12细胞对培养器皿黏附力。 2、AP25 35凝聚态处理 A02535溶于无菌双蒸水，终浓度为2.Ommol/L，分装，_20°C保存，临用前，37°C孵育 4-7d〇 3、药物对PC12细胞的处理 对数生长期的PC12细胞按一定的密度分别接种于培养板中，待其生长稳定后，将 细胞分组，即对照组4 0 25 35诱导凋亡组以及！'6^611111〇14干涉4|3 25 35诱导凋亡组。其中 AP25 35诱导凋亡组，以培养液加入凝聚态的AP25 35储存液，配制一定浓度的工作液，分别 加入细胞培养板，每孔再分别加入细胞悬液，CO2培养箱培养。每小组均设3个平行孔；其 次依据20ymol/LAP25 35，设定TerreumolA干涉凋亡组，细胞以不同浓度TerreumolA预 处理lh，再分别予终浓度20ymol/LAP25 35培养。 4、MTT法测定细胞存活率 取对数生长期的细胞以2-5XIO5AiL的初始浓度分别接种于96孔培养板中每孔 160yL，待其生长稳定后，加入不同浓度的AP25 35，细胞对照组只加等量培养液，每组设三 个平行孔。培养96小时，每孔加5mg/mL的MTT溶液（PBS配制）20yL，混匀后继续培养4h， 弃上清，每孔加DMSO0. 2mL，振荡lOmin，以空白对照孔调零，在490nm波长下测定各孔光密 度值。5、LDH释放量的测定 接种于24孔细胞培养板的细胞，经药物处理48h后，吸出各组上清液备用，各组细 胞加入0. 1 %NP-401mL作用lOmin，收集上清液备用。按照LDH测定试剂盒说明，分别检测 各组上清液和〇? 1 %NP-40的LDH活性，LDH释放率=OD上清AOD上清+0D。. 1%NP4。）X100 %。6、流式细胞分析细胞凋亡 按AnnexinVFITC试剂盒说明操作： (1)细胞处理一定时间后，2000rpm/min离心5min，细胞数1~5XIO5; (2)用PBS清洗细胞二次，2000rpm离心5min; (3)加入 500yLBindingbufTer悬浮细胞；(4)加入2yLAnnexinV-FITC混勾后，加入 5yLPropidiumIodide(PI)，混勾，室 本文档来自技高网...
【技术保护点】
Terreumol A在制备神经保护中的应用，所述Terreumol A化学结构式如下，
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林天样，
申请(专利权)人：林天样，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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