K2组合物及其制备方法与应用技术

一种提供具增量K2的茯苓萃取物的方法，其包含如下步骤：（a）将茯苓与一溶剂混合，以提供一第一混合物；（b）碱化该第一混合物，以获得一第二混合物；（c）酸化该第二混合物，以获得一第三混合物；（d）碱化该第三混合物，以获得一pH值大于7的第四混合物；以及（e）中和该第四混合物，其中，K2为土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C、及3-表-去氢土莫酸的至少一种。

【技术实现步骤摘要】
K2组合物及其制备方法与应用
本专利技术是关于一种方法，可将原料中的茯苓酸及/或去氢茯苓酸有效转化为土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C及/或3-表-去氢土莫酸，从而提供实质上不含茯苓酸及去氢茯苓酸的产物，该产物可进一步处理，以提供具增量土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C及/或3-表-去氢土莫酸的K2组合物。前述产物及K2组合物均可用以治疗癌症，尤其是治疗肺癌。
技术介绍
经研究证实，茯苓酸(pachymicacid)及去氢茯苓酸(dehydropachymicacid)、土莫酸(tumulosicacid)、去氢土莫酸(dehydrotumulosicacid)、猪苓酸C(polyporenicacidC)、以及3-表-去氢土莫酸(3-epi-dehydrotumulosicacid)等三萜类化合物(triterpenoids)，具有利尿、抗氧化、抗癌症、抗发炎、抗高血糖、调节免疫等功效。仅管该等三萜类化合物于疾病治疗具优异功效与潜力，但目前仍无法、且甚难通过人工方法合成上述该等三萜类化合物，故目前业界所使用的该等茯苓三萜类化合物主要取自茯苓及/或其代谢产物的萃取物(FU-LING(Poriacocos))，较难自其他植物或真菌及其发酵产物中取得。经研究证实，茯苓萃取物中的茯苓酸及去氢茯苓酸相对于其他茯苓三萜成分的水溶性较不佳，对于疾病治疗的应用造成极大的不便。举例来说，在将含茯苓酸及╱或去氢茯苓酸的药物或茯苓萃取物投予至一个体后，由于茯苓酸及去氢茯苓酸的水溶性不佳，不利于相关疾病的治疗与控制，乃本领域亟待解决的一大课题。相关说明，可参见例如，AbsorptionandtransportofpachymicacidinthehumanintestinalcelllineCaco-2monolayers.JournalofChineseintegrativemedicine6:704-710(2008)，该文献的全文并于此处以供参考。另，不同产地或批次的茯苓药材会因生长环境、气候、土壤等种植条件不同，导致其中的茯苓酸、去氢茯苓酸、土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C、以及3-表-去氢土莫酸的含量不稳定或比例均不相同，故无法使用于医疗用途。因此，在使用上述三萜类化合物于疾病治疗的应用层面上，如何使一个体在投药后获得一稳定量的有效成分，乃本领域亟待解决的另一大课题。再，在制备上述三萜类化合物仅含土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C、以及3-表-去氢土莫酸的药物时，为符合成分一致性、再现性、定量、以及品质管制(QualityControl)的制药要求，如使茯苓酸及去氢茯苓酸转化成土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C、以及3-表-去氢土莫酸，可达到成分一致性(经多次预实验发现各成分的比例可达到一致)，但是否仍能维持其疗效，为本专利所探究课题之一。在专利技术人为许津教授的专利(中国专利申请号00119304.X)中，其表示将茯苓经有机萃取、碱化后可得到一含量大于70％三萜类萃取物；但，因本案专利技术人重复该专利中的实验后，发现其中三萜类的实际含量至多仅约40％，因许津教授专利中的三萜类含量分析是使用齐墩果酸(oleanolicacid)颜色反应方法、导致分析结果错误；而本案专利技术人是使用茯苓三萜类标准品检测方法，且上述萃取及碱化处理无法使其中三萜类含量达到大于50％，因为茯苓含有磷脂成分缘故，故本案专利技术人于有机萃取后，再进行皂化处理，以去除磷脂，使三萜类含量达到大于50％，可使用于医疗目的。本专利技术即针对上述需求的研发成果。本案专利技术人研究发现一种方法，从而提供实质上不含K1的产物，该产物可进一步处理，以提供具增量K2的组合物，同时达到增量K2、符合成分一致性、再现性、定量、以及品质管制等制药要求的目的，借以有效解决前述的课题。其中，K1为茯苓酸及去氢茯苓酸的至少一种，K2为土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C及3-表-去氢土莫酸的至少一种。
技术实现思路
因此，本专利技术的一目的，在于提供实质上不含K1的方法，其包含：(a)将一含K1的原料与一溶剂混合，以提供一第一混合物；(b)碱化该第一混合物，以获得一第二混合物；以及(c)酸化该第二混合物，以获得一第三混合物，其中，K1为茯苓酸及去氢茯苓酸的至少一种，K2为土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C、及3-表-去氢土莫酸的至少一种。视需要地，该方法更包含于进行步骤(c)之后，对该第三混合物进行一固液分离操作(例如：离心、倾析)，以移除液体，留下不溶物。本专利技术的另一目的，在于提供一种具增量K2的茯苓萃取物的方法，其包含：(a)将茯苓与一溶剂混合，以提供一第一混合物；(b)碱化该第一混合物，以获得一第二混合物；(c)酸化该第二混合物，以获得一第三混合物；(d)碱化该第三混合物，以获得一pH值大于7的第四混合物；以及(e)中和该第四混合物，其中，K2为土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C、及3-表-去氢土莫酸的至少一种。视需要地，该方法更包含于进行步骤(c)之后，对该第三混合物进行一固液分离操作(例如：离心、倾析)，以移除液体，且使用所留下的不溶物来进行步骤(d)。本专利技术的又一目的，在于提供一种以上述方法所获得的产物，较佳地，该产物实质上不含茯苓酸及去氢茯苓酸。本专利技术的再一目的，在于提供一种实质上不含茯苓酸及去氢茯苓酸的茯苓萃取物。本专利技术的再一目的，在于提供一种使用上述产物或茯苓萃取物于制造一治疗癌症的药剂的用途。较佳地，该药剂用于治疗肺癌。本专利技术的再一目的，在于提供一种治疗癌症的方法，其是对一有需要的个体投予一有效量的上述药剂。该方法尤其是用于治疗肺癌。附图说明图1A所示为以液相层析/紫外光/质谱仪(LC/UV/MS)，于243纳米波长下，检测一使用于根据本专利技术转化方法的一具体实施态样的原料的成分分析图谱；图1B所示为以液相层析/紫外光/质谱仪(LC/UV/MS)，于210纳米波长下，检测一使用于根据本专利技术转化方法的一具体实施态样的原料的成分分析图谱；图2A所示为以液相层析/紫外光/质谱仪(LC/UV/MS)，于243纳米波长下，检测由根据本专利技术转化方法的一具体实施态样所获得产物的成分分析图谱；图2B所示为以液相层析/紫外光/质谱仪(LC/UV/MS)，于210纳米波长下，检测由根据本专利技术转化方法的一具体实施态样所获得产物的成分分析图谱；图3A所示为A549细胞经以本专利技术转化方法所获得的产物处理48小时后的细胞存活率的直条图，纵轴代表各实验组相对于控制组的细胞存活率(百分比)，横轴代表所实验的不同组别，包括仅以F12K细胞培养液处理的A549细胞(控制组)、以及使用不同浓度的以本专利技术转化方法所提供产物(0.5、1、5、或10微克/毫升)处理的A549细胞(实验组)；以及图3B所示为A549细胞经本专利技术具增量K2的茯苓萃取物处理48小时后的细胞存活率的曲线图，纵轴代表A549细胞的细胞存活率(百分比)，横轴代表本专利技术具增量K2的茯苓萃取物的浓度(微克/毫升)。具体实施方式以下将描述根据本专利技术的部分具体实施态样；惟，在不背离本专利技术精神下，本专利技术尚可以多种不同形式的态样来实践，不应将本专利技术保护范围解释为限于说明书所陈述的。此外，除非文中有另外说明，于本说明书中(尤其是在所附权利要求中)所使用的「一」、「该」及类似用语应理解为包含单数及复数形式。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提供具增量K2的茯苓萃取物的方法，其包含如下步骤：将茯苓与一溶剂混合，以提供一第一混合物；碱化该第一混合物，以获得一第二混合物；酸化该第二混合物，以获得一第三混合物；碱化该第三混合物，以获得一pH值大于7的第四混合物；以及中和该第四混合物，其中，K2为土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C、及3‑表‑去氢土莫酸的至少一种。

【技术特征摘要】
2014.05.21 US 62/001,328;2014.05.22 US 62/001,7371.一种提供具增量K2的茯苓萃取物的方法，其包含如下步骤：步骤（a）将茯苓与一溶剂混合，以提供一第一混合物；步骤（b）在不小于60oC的温度下碱化该第一混合物，以获得一第二混合物；步骤（c）酸化该第二混合物，以获得一第三混合物，所述第三混合物中K1的含量以K1及K2的总重量计不超过0.5重量%；步骤（d）碱化该第三混合物，以获得一pH值大于7的第四混合物；以及步骤（e）中和该第四混合物，其中，K1为茯苓酸及去氢茯苓酸中的至少一种，且K2为土莫酸、去氢土莫酸、猪苓酸C、及3-表-去氢土莫酸的至少一种。2.如权利要求1的方法，其中于步骤（b）提升该第一混合物的pH值至不小于8。3.如权利要求1的方法，其中于步骤（c）降低该第...

【专利技术属性】
技术研发人员：林汉钦，黄信文，卢世敏，
申请(专利权)人：杏辉天力杭州药业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33