mo-miR-211在制备肾毒性生物标志物中的用途制造技术

技术编号:12330652 阅读:149 留言:0更新日期:2015-11-16 01:24
本发明专利技术公开了一种mo-miR-211在制备肾毒性生物标志物中的用途及试剂盒和引物。mo-miR-211可以作为唯一的肾毒性生物标志物单独使用,也可以与常规的肾毒性生物标志物联合使用,并在检测外源性化合物引起的肾损伤中发挥作用。所述的试剂盒能够特异性强、可行性高地检测肾毒性生物标志物,从而检测外源性化合物引起的肾损伤。所述的引物能够特异性强地扩增mo-miR-211,并应用于所述的试剂盒中检测外源性化合物引起的肾损伤。

【技术实现步骤摘要】
本申请要求申请日为2014年7月10日,申请号为201410328045.1,发明名称为“一种肾毒性生物标志物及其用途”的中国专利申请的优先权。本申请引用该中国专利申请的全文。
本专利技术属于生物
,具体涉及一种mo-miR-211在制备肾毒性生物标志物中的用途及试剂盒和引物。
技术介绍
肾脏是体内最重要的排泄器官,也是外源性毒物在体内的主要靶器官之一。很多化合物(药物)进入体内可引起肾脏毒性损伤,据调查,急性肾功能衰竭中有32.4%是由于药物肾毒性引起的。因此急需建立发现和确证新的肾毒性生物标志物,能够早期发现肾损伤,并可以反映出肾脏损伤的改善或加重,甚至能反映损伤的机制。当前常规的肾毒性评价方法,非临床药物安全性评价和临床上常用的肾损伤指标为血清肌酐(CRE)和尿素氮(BUN),再进行病理组织学检查。CRE易受年龄、性别、种族、饮食和机体内环境的影响,并且无法预测早期病变,不能反映肾小管的损伤和坏死;BUN不仅受肾功能的影响,还受肾外因素如高蛋白饮食、消化道出血等的影响。而且两者需要病人发生急性肾损伤(AKI)几天后才有限制升高,会延误肾毒性早期发现、诊断和治疗。随着肾毒性研究的深入,发现了一些新的肾脏毒性损伤的检测指标,如尿总蛋白(uTP)、血清胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)作为药物肾小球损伤的生物标记物;丛生蛋白、肾损伤分子(KIM-1)、三叶因子-3(TFF-3)可作为肾小管损伤的生物标志物,但是存在敏感性、特异性及检测方法的问题,难以取代传统的肾毒性检测。因此,寻找及时、可靠、可行性强的肾毒性的生物标记物十分有意义。miRNA是一类内源性、非编码、单链小RNA。它们可以和靶基因mRNA-3’端非翻译区(3’-UTR)部分或全部互补结合,在翻译后水平调节基因表达,导致靶基因出现翻译抑制或mRNA降解。成熟miRNA大小约18到25个核苷酸。它们首先在细胞核内转录形成初级miRNA(pri-miRNA),然后在由RNAaseIII、Dicer和Drosha形成的蛋白复合体以及RNA聚合酶II的作用下形成前体miRNA(pre-miRNA)。pre-miRNA从细胞核进入细胞浆内,被Dicer酶切为约22个核苷酸的双链miRNA。随后双链被切断,形成一条成熟的单链miRNA。单链miRNA和RNA诱导的沉默复合体结合并选择性作用靶基因mRNA的反义互补序列,最终调控靶基因的表达。
技术实现思路
因此,本专利技术要解决的技术问题是针对现有的肾毒性生物标记物不够特异、不能早期发现检测、检测方法过于复杂等的问题,提供一种mo-miR-211在制备肾毒性生物标志物中的用途及试剂盒和引物。所述的用途能够将mo-miR-211应用于肾毒性生物标志物的制备从而检测外源性化合物引起的肾损伤;所述的试剂盒能够特异性检测外源性化合物引起的肾损伤;所述的引物能够特异性扩增用以制备肾毒性生物标志物的mo-miR-211。本专利技术提供rno-miR-211作为肾毒性生物标志物的用途。本专利技术中,所述的rno-miR-211是一种miRNA。本专利技术中,大鼠的rno-miR-211,具有序列表中SEQIDNo.1所述的碱基序列。本专利技术中所述的肾毒性较佳地来源于外源性化合物引起的肾损伤。所述的rno-miR-211作为肾毒性生物标志物可以用于检测外源性化合物引起的肾损伤。本专利技术所述的外源性化合物为本领域常规,较佳的是庆大霉素(GM)、顺铂、N-苯基邻氨基苯甲酸或阿霉素,更佳的是庆大霉素。本专利技术中,较佳地,rno-miR-211作为唯一的肾毒性生物标志物单独使用,或者和常规的肾毒性生物标志物联合使用。优选的,所述的常规肾毒性生物标志物是血清肌酐、尿素氮、尿总蛋白和丛生蛋白。本专利技术rno-miR-211作为肾毒性生物标志物用于检测外源性化合物引起的肾损伤的方法,可以包括以下步骤,检测肾组织中rno-miR-211的含量。本专利技术还提供一种检测外源性化合物引起的肾损伤的试剂盒,其包括特异性检测mo-miR-211的引物,所述的引物为核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.2所示的DNA片段。较佳地,所述的试剂盒还包括RNA抽提试剂、反转录试剂和/或qPCR试剂。所述的RNA抽提试剂为本领域常规的RNA抽提试剂,较佳地为TRIZOL。所述的反转录试剂为本领域常规的反转录试剂,较佳地为RNA逆转录酶。所述的qPCR试剂为本领域常规的所述的qPCR试剂,较佳地为DNA聚合酶。本专利技术还提供一种特异性检测mo-miR-211的引物,其是核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.2所示的DNA片段。本专利技术人发现,rno-miR-211在外源性化合物引起的肾损伤的大鼠血液白细胞中高表达。所述的血液白细胞可以来源于各个组织的血液,较佳的,后腹主动脉。本专利技术寻找肾毒性生物标志物的方法,包括对miRNA芯片表达谱的分析,比较雌雄大鼠分别经外源性化合物处理的不同时间和不做任何处理的对照组的表达谱,然后根据已知的功能预测可能的肾毒性生物标志物。在符合本领域常识的基础上,上述各优选条件,可任意组合,即得本发明各较佳实例。本专利技术所用试剂和原料均市售可得。本专利技术的积极进步效果在于:本专利技术的专利技术人发现mo-miR-211是外源性化合物引起的肾损伤的特异性的生物标志物,在外源性化合物引起的肾损伤的血液白细胞中高表达,能够发挥在制备肾毒性生物标志物中用途,从而可以检测外源性化合物引起的肾损伤。本专利技术提供的试剂盒能够特异性强、可行性高地检测肾毒性生物标志物,从而检测外源性化合物引起的肾损伤。本专利技术提供的引物能够特异性强地扩增mo-miR-211,并应用于所述的试剂盒中检测外源性化合物引起的肾损伤。附图说明图1为大鼠连续肌肉注射庆大霉素后肾脏组织病理学改变(阴性对照组D2)。图2为大鼠连续肌肉注射庆大霉素后肾脏组织病理学改变(80mg/kg组D4)。图3为大鼠连续肌肉注射庆大霉素后肾脏组织病理学改变(80mg/kg组D8)。具体实施方式本专利技术人以rno-miR-211为例,通过miRNA表达谱芯片数据分析,发现rno-miR-211是外源性化合物引起的肾损伤的肾毒性生物标志物。检测发现rno-miR-211在外源性化合物引起的肾损伤的肾组织中高表达。应用rno-miR-211为肾毒性生物标志物,可以检测外源性化合物引起的肾损伤。下面通本文档来自技高网
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mo-miR-211在制备肾毒性生物标志物中的用途

【技术保护点】
rno‑miR‑211在制备肾毒性生物标志物中的用途。

【技术特征摘要】
2014.07.10 CN 20141032804511.rno-miR-211在制备肾毒性生物标志物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的肾毒性来源于外源
性化合物引起的肾损伤。
3.如权利要求1所述的用途,其特征在于,rno-miR-211作为唯一的肾
毒性生物标志物单独使用或者和常规的肾毒性生物标志物联合使用。
4.如权利要求3所述的用途,其特征在于,所述的常规的肾毒性生物
标志物是血清肌酐、尿素氮、尿总蛋白和/或丛生蛋白。
5.一种检测外源性化合物引起的肾损伤的试剂盒,其特征在于,其包
括特异性检测mo...

【专利技术属性】
技术研发人员:邱云良马璟洪敏富欣汤纳平李华
申请(专利权)人:上海益诺思生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:上海;31

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