一种单组份TMB显色液的终止液及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括硫酸和二乙二醇；所述硫酸的浓度为0.3-0.5mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为3-5％。本发明专利技术相比现有技术具有如下优势：本发明专利技术单组份TMB显色液的终止液是专门针对单组份TMB底物液设计的，终止后不产生沉淀，1小时内读数仍稳定；本发明专利技术单组份TMB显色液的终止液采用的是低浓度的硫酸，可以减少对操作者的伤害，并且可以降低对环境的危害；本发明专利技术单组份TMB显色液的终止液具有防冻设计，通过其含有的特有防冻成分与低浓度的硫酸以一定比例组合使用，作用高效，且在冬季低温环境使用而不冻结，更加稳定和可靠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物体外诊断试剂，特别是涉及一种单组份TMB显色液的终止液及其 制备方法。
技术介绍
体外诊断试剂领域的酶联免疫法（ELISA)检测技术中，常使用TMB(3, 3'，5, 5'-四 甲基联苯胺）作为HRP (辣根过氧化物酶）显色底物。相对其它显色底物而言，TMB以显色 高效、无毒、不致癌、稳定性好等特点成为ELISA检测的主流显色剂。在ELISA检测时，HRP 酶催化过氧化物释放出氧使TMB被氧化成蓝色的产物，加入酸性的终止液终止反应后，蓝 色溶液变成橙黄色，在450nm波长有最大吸收峰。终止的原理：以硫酸为主要成分的终止液 为例，加入终止液后，一方面，硫酸破坏了 HRP酶的活性，使酶的催化功能丧失；另一方面， 由于pH降低，可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌，联苯醌在波长450nm处有最大消 光系数。如不及时终止反应，本底会同时加深，进而影响结果的正确判断，故终止对ELISA 具有重要意义。 目前ELISA试剂盒中，TMB的终止液主要有酸和碱两类：酸类主要为盐酸及硫酸， 而碱类则为NaOH及SDS (十二烷基硫酸钠）。NaOH由于易与空气中的二氧化碳反应产生 变质，而较少应用；至于1% SDS (十二烷基硫酸钠）虽有论文进行过研究，但由于其终止后 有较强的褪色作用，结果不稳定，基本仅停留于实验室使用。对于酸类中的盐酸，浓度多为 1%或2M(即mol/1，下同），终止效果尚可，但由于盐酸易挥发，多次开盖会使溶质减少，进 而影响终止液的终止效果及检测精密度，故商品化应用不多。 硫酸作为终止液的主要成分，由于稳定、易获取、廉价等优点逐渐成为主流。其所 配制的硫酸浓度各异，包括最高达2M，最低为0. 2M。而终止液的具体加量：一般双组份TMB 底物液各加 A与B液50 μ 1后，再加2M的终止液50 μ 1 ;而对于单组份TMB底物液，则多采 用0. 2-0. 8Μ的更低浓度硫酸作为终止液，而与TMB加量相同，例如100 μ 1的TMB底物液， 加入100 μ 1的终止液。 对于传统的2mol/l的硫酸终止液，多用于双组份ΤΜΒ，较少应用于单组份TMB中。 原因有：（1)单组份TMB中的TMB含量较双组份中的低，故不需高达2M的硫酸来终止，过量 的硫酸反而会使本底加深，导致阴阳性对比度较差，最终读数不稳定。（2)2M的硫酸有较强 的腐蚀性，对操作者易造成伤害。（3)使用剩余的终止液对环境产生了危害。故现在更多是 使用低浓度的硫酸作为终止液，如〇. 2-0. 8M。 基于低浓度的硫酸即稀硫酸在常温条件下可稳定保存，故其可直接保存于常温， 在冬季时，特别是广东、海南及台湾省以外的省份，冬季实验室保存或运输时多在〇°C以下， 易使室温保存的终止液产生冻结；此外，在控温不稳的冰箱冷藏层，终止液也可能出现冻 结。冻结的终止液有以下缺点：解冻需要耗费时间；如未完全融化、不均匀会导致硫酸的 浓度产生变化，影响实验精密度。 单组份TMB显色液日趋成为商品化ELISA试剂盒主流，目前很少有专门针对单组 份TMB显色液的终止液。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种专门针对单组份TMB显色液的终止液，其作 用高效且可稳定的保存于四季室温。 本专利技术提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括硫酸和二乙二醇。 所述硫酸的浓度为〇· 3-0. 5mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为3-5%。 所述硫酸的浓度为〇. 4mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为3%。 本专利技术还提供了一种含有硫酸和二乙二醇的组合物的用途，用于单组份TMB显色 液的终止液的制备。 组合物中所述硫酸的浓度为0. 3-0. 5mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为 3-5 % 〇 组合物中所述硫酸的浓度为0. 4mol/L，所述二乙二醇的重量体积比为3%。 本专利技术相比现有技术具有如下优势： (1)本专利技术单组份TMB显色液的终止液是专门针对单组份TMB底物液设计的，终止 后不产生沉淀，1小时内读数仍稳定。 (2)本专利技术单组份TMB显色液的终止液采用的是低浓度的硫酸，可以减少对操作 者的伤害，并且可以降低对环境的危害。 (3)本专利技术单组份TMB显色液的终止液具有防冻设计，通过其含有的特有防冻成 分与低浓度的硫酸以一定比例组合使用，作用高效，且在冬季低温环境使用而不冻结，更加 稳定和可靠。【具体实施方式】 本专利技术提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括如下浓度的各组分： 硫酸 0· 3-0. 5mol/L 二乙二醇 3-5% (w/v) 所述硫酸的浓度为0. 3M及以上，可确保足量的硫酸用于终止，同时也维持一个较 强的酸性环境，抑制微生物的生长。而硫酸的浓度为0. 5M以上时，终止后的稳定性不够，易 引起读数的变化。如高值样本时，可能带来部分沉淀，故选择〇. 3-0. 5M。 所述二乙二醇，也称一缩二乙二醇、二乙二醇醚或二甘醇。能与乙醇、乙醚、丙酮和 乙二醇混溶，不溶于苯和四氯化碳，溶于水。味辛辣并微甜，有吸湿性。由于部分抗冻成分易 造成终止反应的干扰。故在抗冻剂的类型及其浓度上的选择上需要特别慎重，如甘油等物 质量大时粘度增大，不利于终止反应的高效进行。而二乙二醇则不会对ELISA的终止造成 干扰，有与甘油相当的抗冻效果，可满足常见的近零摄氏度的抗冻的情况，如_5°C至0°C ; 同时其安全性较好；其浓度选择为3-5% (w/v)时更有利于终止反应的高效进行。 本专利技术还提供了上述单组份TMB显色液的终止液的制备方法，包括如下步骤： 取16. 0-26. 8ml (即0· 3-0. 5mol)的硫酸，加入800ml的去离子水，再在其中加入 26. 9-44. 8ml (即30-50g)的二乙二醇，用去离子水定容至1L，混合均勾，盛放于塑料试剂瓶 中密封存于室温，即为单组份TMB显色液的终止液。 实施例1 本实施例提供了一种单组份TMB显色液的终止液，包括如下浓度的各组分： 硫酸 0· 4mol/L 二乙二醇 3%(w/v) 本实施例还提供了上述单组份TMB显色液的终止液的制备方法，包括如下步骤： 取21. 4ml (即0. 4mol)的硫酸，加入800ml的去离子水，再在其中加入26. 9ml (即 30g)的二乙二醇，用去离子水定容至1L，混合均匀，盛放于塑料试剂瓶中密封存于室温，即 为单组份TMB显色液的终止液。 其中浓酸和二乙二醇均为国产分析纯试剂，成本较低。 本实施例单组份TMB显色液的终止当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单组份TMB显色液的终止液，其特征在于，包括硫酸和二乙二醇。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴恩应，杨洋，吴灼斌，陈玉琴，林桓旭，刘爱和，郭采平，王锦才，丁玉江，黄伟荣，张信，
申请(专利权)人：深圳市卫光生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44