一种利用啤酒废液生产酵母发酵态锰饲料添加剂的方法，其步骤包括培养基制备以及微生物培养、制备基础液体培养基与锰梯度培养基、微生物梯度培养、制备种子培养基、制备发酵种子、制备发酵液、微生物发酵、制作酵母发酵态锰饲料添加剂与包装。本发明专利技术提供了一种利用啤酒生产过程中糖化废水和发酵废水生产酵母发酵态锰饲料添加剂的处理方法，方法简单，容易操作，效果理想，既提高了资源利用效率，降低了生产成本，又可以对啤酒生产中的废水进行生物处理，减少了环境污染，所制备的酵母发酵态锰饲料添加剂生物有效性高，对动物的添加量低，并能提高动物的生产性能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于饲料添加剂及生物
，尤其是一种利用啤酒废液生产酵母发酵 态锰饲料添加剂的方法。
技术介绍
锰是动物体必需的微量矿物元素之一，其在动物体内的含量约0. 2~0. 3mg/kg。锰 主要营养作用是在碳水化合物、脂类、蛋白质和胆固醇代谢中作为酶活化因子或组成部分。 缺锰可导致动物采食量下降、生长减慢、饲料利用率降低、骨异常、共济失调和繁殖功能异 常等。日粮添加一定量锰是满足动物体锰需要的重要措施。目前，锰主要以无机锰盐的形 式添加，其吸收率一般为5°/p10%，大量的锰随粪便排出污染环境。 我国是啤酒生产消费大国，在其生产过程中会产生20-30倍的废水，其中糖化 废水和发酵废水中有机养分含量丰富。研究表明，糖化和发酵后排放的废水COD浓度在 2000~4000mg/L，并且以可溶态的糖类、氨基酸、醇类、维生素等为主。因此，通过对其营养成 分调控后，能够作为微生物的营养基质来生产一系列微生物发酵类产品。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，将 啤酒生产过程中的废液(糖化废液和发酵废液）经过适当理化性质调控后作为发酵液，以酵 母菌作为发酵菌种，对无机锰盐进行发酵处理，研制酵母发酵态的锰饲料添加剂，从而提高 锰的吸收利用率，降低粪便锰排出对环境的污染。 为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种利用啤酒废液生产酵 母发酵态锰饲料添加剂的方法，所用的发酵菌种为啤酒酵母和产朊假丝酵母，所用的锰为 可溶解在稀酸溶液中的无机锰化合物，具体制备步骤如下： (1) 培养基制备以及微生物培养 取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、琼脂20g，用蒸馏水溶解、定容至1000mL，用高 压锅在121°C灭菌20min-30min，调pH至5. 0~5. 5,制得培养基，然后将啤酒酵母和产朊假 丝酵母从冰箱取出复苏，培养于该培养基上24h，以获得复活的啤酒酵母和产朊假丝酵母； (2) 基础液体培养基与锰梯度培养基制备 基础液体培养基的制法为：依次向1000 ml蒸馏水中加入葡萄糖20g、蛋白胨20g以及 酵母浸膏l〇g，并搅拌混匀，调整PH至5. 0~5. 2,备用； 锰梯度培养基的制法为：在上述基础液体培养基中加入可溶解在稀酸溶液中的无机 锰化合物，得到锰含量分别为 50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L 和 1000mg/L的培养基，并与锰含量为0mg/L的基础液体培养基构成锰梯度培养基，备用； (3) 微生物梯度培养 将步骤（1)处理所获得的啤酒酵母和产朊假丝酵母分别依次培养于步骤（2)所制得锰 梯度培养基中，培养时间为24h，培养温度为30. 5 °C ; (4) 种子培养基的制备 获取啤酒生产过程中新鲜的糖化废液，在4000r/min转速下离心5~10min，然后按照 重量比添加3. 5%的蔗糖、0. 3%的尿素、0. 25%的食盐、0. 02%的硫化钠，混匀后121°C灭菌 15~20min，并调pH至5. 0~5. 5,即制成种子培养基，并将其平均分做两份，备用； (5) 发酵种子的制备 将经过步骤（3)处理的啤酒酵母和产朊假丝酵母按照10%的接种比例分别接种于步骤 (4 )所制备的两份种子培养基中，一份种子培养基接种一种酵母菌，然后将接种后的培养基 放置于30. 5°C的恒温培养箱内培养24h，即获得啤酒酵母发酵种子和产朊假丝酵母发酵种 子； (6) 发酵液的制备 发酵液是利用啤酒生产过程中的糖化废液或发酵废液制成的，具体制备方法如下： a、 利用糖化废液制作发酵液：取啤酒生产过程中新鲜的糖化废液，在3500~4000r/min 转速下离心5~10min，然后按照重量比依次加入1. 0%的蔗糖、20%的玉米面、0. 3%的尿素、 0. 25%的食盐以及0. 02%的硫化钠，并于121°C灭菌15~20min，调整pH至5. 0~5. 5,即可制 成发酵液； b、 利用发酵废液制作发酵液：取啤酒生产过程中新鲜的发酵废液，在3500~4000r/min 转速下离心5~10min，再在60~65°C水浴锅内水浴加热30~40min，加热期间不断用灭菌的玻 璃棒搅拌，使发酵废液中残留的乙醇挥发，同时达到灭菌效果，然后按照重量比，向灭菌后 的发酵废液中加入2. 0%的蔗糖、20%的玉米面、0. 5%的尿素、0. 25%的食盐以及0. 02%的硫 化钠，并调整PH至5. 0~5. 5,即可制成发酵液； (7) 微生物发酵 将待发酵的无机锰化合物重量的20%混合在步骤（6)所制得发酵液中，置于发酵容器 内，并按照10%的接种比例向发酵容器内的发酵液中接种步骤（5)所制得的啤酒酵母发酵 种子和产朊假丝酵母发酵种子，然后调节温度至30. 5°C进行发酵，2h后，向发酵容器内再 次加入20%待发酵的无机锰化合物，并搅拌均匀，再继续发酵至6h后，再次加入20%待发酵 的无机锰化合物，搅拌均匀，使发酵液中锰含量达到1200mg/L，继续发酵至12h后，加入剩 余的40%的待发酵无机锰化合物，搅拌均匀，继续发酵24h后，完成发酵过程； (8) 酵母发酵态锰饲料添加剂的制作 将步骤（7)所得的发酵产物进行过滤，收取固体物，所得滤液在3500~4000r/min条件 下离心10min，获得固体沉淀物，然后将过滤所得的固体物和离心所得的固体沉淀物混合均 匀，置于65°C电热恒温干燥箱内进行干燥处理，干燥后用粉碎机将其粉碎并过60目筛，从 而获得酵母发酵态锰饲料添加剂； (9) 包装 以1000 g为单位，将步骤（8)所获得的酵母发酵态锰饲料添加剂用复合薄膜进行真空 包装，真空度为0. 085~0. 095Mpa。 本专利技术的有益效果是： 第一，本专利技术提供了一种利用啤酒生产过程中糖化废水和发酵废水生产酵母发酵态锰 饲料添加剂的处理方法，方法简单，容易操作，效果理想，既提高了资源利用效率，降低了生 产成本，又可以对啤酒生产中的废水进行生物处理，减少了环境污染； 第二、本专利技术提供的酵母发酵态锰饲料添加剂生物有效性高，采用Caco-2细胞模型分 析表明，本专利技术提供的酵母发酵态锰生物有效性为33. 10%，五水硫酸锰中的生物有效性仅 为6. 13%，酵母发酵态锰生物有效性较五水硫酸锰高26. 97% ; 第三、本专利技术提供的酵母发酵态锰饲料添加剂对动物添加量低，采用蛋鸡饲养试验表 明，当其添加量仅为五水硫酸锰的2/3 (以锰计）时，蛋鸡产蛋率不但未降低，且较硫酸锰组 提尚了 〇. 04% ; 第四，本专利技术采用啤酒酵母与产朊假丝酵母联合发酵锰的方法，并提供了一种少量多 次加入无机锰盐的发酵方法，而非一次性加入待发酵的锰盐，因而避免了大量无机锰盐对 微生物的毒性，提高了发酵效率。【具体实施方式】 下面通过【具体实施方式】对本专利技术作进一步的说明。 实施例1 : ，酵母菌选择 市售的啤酒酵母和产朊假丝酵母，所添加的锰源选择五水硫酸锰，具体制备步骤如下： (1) 培养基制备以及微生物培养 取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、琼脂20g，用蒸馏水溶解、定容至1000mL，用高 压锅在121°C灭菌20min，调pH至5. 0,制得培养基，然后将啤酒酵母本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用啤酒废液生产酵母发酵态锰饲料添加剂的方法，所用的发酵菌种为啤酒酵母和产朊假丝酵母，所用的锰为可溶解在稀酸溶液中的无机锰化合物，其特征在于：包括如下步骤：（1）培养基制备以及微生物培养取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、琼脂20g，用蒸馏水溶解、定容至1000mL，用高压锅在121℃灭菌20min‑30min，调整pH至5.0~5.5，制得培养基，然后将啤酒酵母和产朊假丝酵母从冰箱中取出复苏，在该培养基上培养24h，以获得复活的啤酒酵母和产朊假丝酵母；（2）基础液体培养基与锰梯度培养基制备基础液体培养基的制法为：依次向1000ml蒸馏水中加入葡萄糖20g、蛋白胨20g以及酵母浸膏10g，并搅拌混匀，调整pH至5.0~5.2，备用；锰梯度培养基的制法为：在上述基础液体培养基中加入可溶解在稀酸溶液中的无机锰化合物，得到锰含量分别为50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L和1000mg/L的培养基，并与锰含量为0mg/L的基础液体培养基构成锰梯度培养基，备用；（3）微生物梯度培养将经步骤（1）处理所获得的啤酒酵母和产朊假丝酵母分别依次培养于步骤（2）所制得的锰梯度培养基中，培养时间为24h，培养温度为30.5℃；（4）种子培养基的制备获取啤酒生产过程中新鲜的糖化废液，在4000r/min转速下离心5~10min，然后按照重量比添加3.5%的蔗糖、0.3%的尿素、0.25%的食盐、0.02%的硫化钠，混匀后121℃灭菌15~20min，并调整pH至5.0~5.5，即制成种子培养基，然后将其平均分做两份，备用；（5）发酵种子的制备将经过步骤（3）处理的啤酒酵母和产朊假丝酵母按照10%的接种比例分别接种于步骤（4）所制备的两份种子培养基中，一份种子培养基接种一种酵母菌，然后将接种后的培养基放置于30.5℃的恒温培养箱内培养24h，即获得啤酒酵母发酵种子和产朊假丝酵母发酵种子；（6）发酵液的制备发酵液是利用啤酒生产过程中的糖化废液或发酵废液制成的，具体制备方法如下：a、利用糖化废液制作发酵液：取啤酒生产过程中新鲜的糖化废液，在3500~4000r/min转速下离心5~10min，然后按照重量比依次加入1.0%的蔗糖、20%的玉米面、0.3%的尿素、0.25%的食盐以及0.02%的硫化钠，并于121℃灭菌15~20min，调整pH至5.0~5.5，即可制成发酵液；b、利用发酵废液制作发酵液：取啤酒生产过程中新鲜的发酵废液，在3500~4000r/min转速下离心5~10min，再在60~65℃水浴锅内水浴加热30~40min，加热期间不断用灭菌的玻璃棒搅拌，使发酵废液中残留的乙醇挥发，同时达到灭菌效果，然后按照重量比，向灭菌后的发酵废液中加入 2.0%的蔗糖、20%的玉米面、0.5%的尿素、0.25%的食盐以及0.02%的硫化钠，并调整pH至5.0~5.5，即可制成发酵液；（7）微生物发酵将待发酵的无机锰化合物按照重量取其中的20%混合在步骤（6）所制得发酵液中，置于发酵容器内，并按照10%的接种比例向发酵容器内的发酵液中接种步骤（5）所制得的啤酒酵母发酵种子和产朊假丝酵母发酵种子，然后调节温度至30.5℃进行发酵，2h后，向发酵容器内再次加入20%的待发酵的无机锰化合物，并搅拌均匀，再继续发酵至6h后，再次加入20%的待发酵的无机锰化合物，搅拌均匀，使发酵培养基中锰含量达到1200mg/L，继续发酵至12h后，加入剩余的40%的待发酵的无机锰化合物，搅拌均匀，继续发酵24h后，完成发酵过程；（8）酵母发酵态锰饲料添加剂的制作将步骤（7）所得的发酵产物进行过滤，收取固体物，所得滤液在3500~4000r/min条件下离心10min，获得固体沉淀物，然后将过滤所得的固体物和离心所得的固体沉淀物混合均匀，置于65℃电热恒温干燥箱内进行干燥处理，干燥后用粉碎机将其粉碎并过60目筛，从而获得酵母发酵态锰饲料添加剂；（9）包装以1000g为单位，将步骤（8）所获得的酵母发酵态锰饲料添加剂用复合薄膜进行真空包装，真空度为0.085~0.095Mpa。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何万领，李晓丽，李远方，
申请(专利权)人：河南艾格多科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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