本发明专利技术涉及一种海藻酸钠免疫磁珠及其制备方法和应用，免疫磁珠为核壳型结构，内核为磁性材料Fe3O4，中间层为脂质体和海藻酸钠的混合材料，最外层为包被在中间层上的抗体。免疫磁珠各层的组成比例为：海藻酸钠：质量含量为0.0%-50.0%；脂质体：质量含量为0.0%-50.0%；磁性材料：质量含量为0.0%-50.0%；抗体：质量含量为0.0%-30.0%。本发明专利技术海藻酸钠免疫磁珠具有很好的生物相容性，通过与生物活性物质中的配基偶联，能够识别并结合相应的抗原、抗体或核酸等，在外加磁场中分离富集迅速，可用于生物材料检测和分离纯化，在细胞分离、固定化酶、靶向药物和免疫检测等生物学领域有着广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于纳米磁性材料领域和生物学领域，涉及一种纳米磁性颗粒，具体为。
技术介绍
免疫微球技术(Immunomicrospheres)是以免疫学为基础利用包被有免疫活性物质的各种微球进行免疫学或其他生物学分析分离等方面应用的一项技术。自1956年Singer将人IgG吸附存聚苯乙烯胶乳颗粒上，首次建立检测类风湿因子的胶乳凝集试验以来，免疫微球技术就以其简便，高效，实用的特点，在免疫学，微生物学，生物化学，分子遗传学及分子生物学等各个领域崭露头角。免疫磁性微球(Immunomagnetic Microspheres, IMMS)或叫做免疫磁性微珠简称免疫磁珠，作为新型的功能材料近年来已被广泛研宄，其在生物医学及临床诊断等领域的应用引起了各国研宄者的高度重视。免疫磁性微球是免疫微球的一种，是指连有抗体或抗原的磁性微球，它通过表面的抗体或抗原特异地与靶物质结合，从而赋予其磁响应性，在特定磁场的作用下，通过免疫磁性微球可以发生定向移动，从而实现其免疫学检测，分离纯化，药物导向等方面的目的。理想的免疫磁性微球应具有灵敏性高，特异性强，重复性好以及分离检测速度快等优点。免疫磁性微球是磁性微球与抗体或抗原结合的产物。磁性微球的范围广泛，包括常用的磁性高分子微球、磁性脂质体、磁性胶束等；而磁性脂质微球是通过适当的方法使脂质体与无机物结合起来形成具有一定磁性及特殊结构的微球，其表面可比较容易的赋予多种反应性功能基团，如-0H，-COOH和-順2等，使其具有良好的生物相容性，通过与生物活性物质中的配基偶联，能够识别并结合相应的抗原、抗体或核酸等，然后可在外加磁场中进行分离富集。因此，磁性脂质微球(刘信等，磁性脂质体的制备及应用)在细胞分离、固定化酶、靶向药物和免疫检测等生物学领域有着广泛的应用前景。但是，目前存在的免疫磁性海藻酸钠微球还存在许多问题。首先，免疫磁性海藻酸钠微球中抗体接枝率较低、活性较难维持。主要原因为，利用磁性海藻酸钠微球表面存在的活性基团进行改性，温度较高，时间较长，容易降低抗体的活性。再次，所制备的免疫磁性海藻酸钠微球普遍稳定性不足，容易发生团聚；样品存放半年后，均容易发生结块。如，博士论文(华中科技大学，李青，2007年)中的免疫磁性海藻酸钠微球使用的是反相微乳-包埋的方法，所用的材料包含磁粉，海藻酸钠和表面活性剂琥铂酸二异辛脂磺酸钠。本专利技术中免疫磁性海藻酸钠微球与现有技术具有本质的区别，具体如下: (1)成分不同，本专利技术免疫磁性微球含有Fe3O4超顺磁性纳米颗粒，海藻酸钠，脂质体成分(卵磷脂、胆固醇、羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐、DSPE-PEG-抗体)； (2)制备方法不同，本专利技术主要采用脂质体的薄膜分散法制备；(2)免疫微球的种类不同，本专利技术的免疫微球属于脂质体类的纳米微球，海藻酸钠和羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐的加入可提高脂质体微球的稳定性。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了。本专利技术的技术方案如下: 一种海藻酸钠免疫磁珠，核壳型结构，内核为磁性材料Fe3O4，中间层为脂质体和海藻酸钠的混合材料，最外层为包被在中间层上的抗体。海藻酸钠免疫磁珠各层的组成比例如下: 海藻酸钠:质量含量为0.0%-50.0% ； 脂质体:质量含量为0.0%-50.0% ； 磁性材料:质量含量为0.0%-50.0% ； 抗体:质量含量为0.0%-30.0%。所述磁珠的粒径为10nm-10000nm。所述抗体为单克隆抗体。所述海藻酸钠免疫磁珠的成分包括海藻酸钠、卵磷脂、胆固醇和磁性纳米颗粒；其中，海藻酸钠的质量含量为10.0%-60.0%，卵磷脂的质量含量为10.0%-30.0%，胆固醇的质量含量为5.0%-30.0%，磁性纳米颗粒为5.0%-30.0%。本专利技术海藻酸钠免疫磁珠的制备方法，包括以下步骤: (I)使用海藻酸钠与抗体反应制备抗体前体物海藻酸钠-抗体。(2)用薄膜分散法制备海藻酸钠磁性脂质体:具体为将卵磷脂、胆固醇和油溶性磁性纳米颗粒混合溶于油相氯仿中，孵育20-60分钟，放入茄形瓶中，旋转蒸发成脂质膜； (3)将形成的脂质膜与含有海藻酸钠和抗体前体物海藻酸钠-抗体的水溶液混合水化，并超声，即可得海藻酸钠免疫磁珠。上述步骤(I)中将含有海藻酸钠的水溶液与单克隆抗体混合，加入缩合剂反应0.5至48小时，透析除去未反应的缩合剂；所述海藻酸钠与缩合剂的质量比为1-5:1-20 ；所述的海藻酸钠与抗体混合的质量比为100:1-20;所述缩合剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N, N’-羰基二咪唑、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶、N-羟基琥珀酰亚胺中的一种或两种。本专利技术将磁性脂质体与海藻酸钠复合制备免疫磁珠的中间层，海藻酸钠的加入可提高磁性脂质体的稳定性，同时可提供反应的官能团羧基；在海藻酸钠免疫磁珠免疫磁珠的抗体修饰过程中，采用先制备抗体前体物海藻酸钠一抗体，再与脂质成分复合的方法，前体物的使用可较高的维持抗体的活性。本专利技术与现有技术相比具有以下有益效果:本专利技术海藻酸钠免疫磁珠具有很好的生物相容性，通过与生物活性物质中的配基偶联，能够识别并结合相应的抗原、抗体或核酸等，在外加磁场中分离富集迅速，可用于生物材料检测和分离纯化，在细胞分离、固定化酶、靶向药物和免疫检测等生物学领域有着广泛的应用前景。如制备的抗-EpCAM抗体修饰的海藻酸钠免疫磁珠可进行外周血中肿瘤(乳腺癌)细胞的抓捕和富集，然后将富集的肿瘤细胞进行免疫染色分析计数，就可以指导临床进行个体化用药方案的评估。【具体实施方式】下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1制备海藻酸钠免疫磁珠 (I)将5.0mg海藻酸钠与1.0mg抗-EpCAM单克隆抗体混合，加入浓度为2.0mg/mL的缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐5.0mL中反应24小时，8000-10000分子量透析袋透析除去未反应的缩合剂；冻干后得抗当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种海藻酸钠免疫磁珠，其特征在于，所述海藻酸钠免疫磁珠为核壳型结构，内核为磁性材料Fe3O4，中间层为脂质体和海藻酸钠的混合材料，最外层为包被在中间层上的抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，梁晓飞，
申请(专利权)人：上海裕隆医学检验所股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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