本申请描述了抗体捕获方法，包括(i)获得包含抗体的生物样品，(ii)使所述生物样品与重组pIgR或dIgA-结合变体接触，其中所述pIgR或变体结合dIgA并形成pIgR-dIgA复合物。所述方法还可包括(iii)直接地或间接地评估所述pIgR-dIgA复合物的水平或pIgR-dIgA与感兴趣的抗原之间的复合物的水平。还有一种确定测试受试者的肠壁完整性的抗体捕获方法，其中将所述SIgA与dIgA的水平或比值与来自对照受试者的相应的水平或比值进行比较。当用于捕获或检测dIgA和/或IgM或供捕获或检测dIgA和/或IgM使用时，本申请提供了体现所述方法和重组pIgR的试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 优先权要求 本申请要求2012年11月8日提交的澳大利亚临时专利申请第2012904887号的 优先权，其公开内容通过引用包括在本文中。
本说明书一般涉及与免疫激活，特别是黏膜免疫激活相关联的传染原或其它病症 的诊断，预后和治疗方案领域。更具体而言，本说明书涉及作为生物标记的抗体在免疫激活 和/或与免疫激活相关联的病患的诊断、预后和治疗中的用途。提出的本方案正准备引进 到实验室和床边自测模式中以满足全世界的目标人群。
技术介绍
本说明书中提及的参考书目细节列在说明书的最后。 提到的任何现有技术不是且不应被视为承认或任何形式的启示该现有技术组成 任何国家中的公知常识的一部分。 特异性抗体（免疫球蛋白（Ig))类的检测被认为是人类和动物疾病的诊断和研宄 方法的重要步骤。例如，抗原-特异性IgM类抗体的检测广泛地用作感染有病毒如甲型肝 炎病毒、戊型肝炎病毒、西尼罗病毒、登革病毒、麻瘆病毒；和感染有细菌如梅毒（梅毒螺旋 体）的诊断测试，因为IgM类抗体通常在感染的急性期期间产生于受感染的宿主体内，并仅 在几个月是可检测的。 相反地，IgG类抗体通常终身存留并可以指示特定病原体的现症或既往感染。存 在于人体中，用特异性药物可表明当前或过去的感染情况。对于如人类免疫缺陷病毒（HIV) 的慢性感染而言，患者不能自发地清除病毒，IgG类抗体的检测用于感染的诊断，而对于如 丙型肝炎病毒（HCV)等其它的感染，一部分患者可以自发地或在治疗后清除病毒，抗原-特 异性IgG的检测不用于当前或持续感染的诊断。IgG类抗体还主要负责机体血浆部分抗 体-介导的免疫。IgA类抗体也已经被用于帮助感染的诊断，包括戊型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、和 登革病毒，以及感染的疫苗和免疫的研宄。IgA用于诊断目的是有吸引力的，因为它在急性 感染期期间显著地产生，需要或不需要IgM的同时检测，高水平的抗原-特异性IgA可以提 供当前感染的标记。另外，因为IgA是分泌在黏膜上皮表面的主要抗体种类，它的存在被认 为是黏膜免疫的标记。作为感染的生物标记的不同IgA结构形式的作用未被理解，如特别 是dlgA。SIgA在感染中的作用和使SIgA产生应答的抗原尚未被研宄，设计为用于快速地 且便捷地评估患者血清中的这些应答的诊断和预后的方案也未被开发。 大多数动物中，IgA几乎完全以二聚体或更高多聚体的形式合成，本文将其统 一描述为dlgA，其能够与多聚Ig受体（plgR)相互作用。这种相互作用导致大量分泌型 IgA(SIgA)分泌进入上皮组织的内腔（参见图1和2)。然而，在人类和高等灵长类中，dlgA 仅仅是总IgA的很少部分，单体IgA(mlgA)代表约90 %的总IgA，且二聚体或较高聚合体形 式的IgA代表约10%的总IgA。 IgA、IgM、IgG和其它抗体种类或同种型的检测通常使用其它物种中制备的抗体试 剂来进行，比如对人类IgM特异的兔抗体，或对人类IgA特异的小鼠单克隆抗体，或对各个 抗体亚类如IgAl、IgA2或]^61、]^623、]^6213、]^63、]^64特异的单克隆抗体。基于抗体的 捕获测定与通过最优化方案最小化的非特异性结合的水平有关。 需要改善用于监测与受试者的黏膜表面和黏膜免疫反应有关的感染的血清学手 段，以及需要可以用于评估二聚或多聚抗体的产生和/或用于二聚或多聚抗体纯化的试 剂。 实施方案概述 因此一个实施方案中，本说明书提供了抗体捕获方法，其包括（i)获得包含抗体 的生物样品，（ii)使生物样品与重组plgR或dlgA-结合变体接触，其中所述plgR或变体 结合dlgA并形成plgR-dlgA复合物。一旦所述复合物形成，所述复合物可被定量。一些实 施方案中，dlgA可以从所述plgR中释放并进一步加工。一个实施方案中，采用所述方法用 于dlgA抗体的纯化，作为采用木菠萝素（jacalin)琼脂糖的现有方法的替代方案。复合物 的检测使用本领域的常规方法和已知的试剂，如ELISA或其它基于免疫测定的方法。 -个实施方案中，所述方法还包括（iii)直接地或间接地评估所述plgR-sIgA复 合物的水平或plgR-sIgA和感兴趣的抗原间形成的复合物的水平。 -个实施方案中，所述plgR或dlgA-结合变体结合dlgA并且基本上不结合IgM， 或其中所述plgR或变体结合dlgA和IgM。用于检测抗原特异性IgM和dlgA的方法可与用 于总IgA、IgG和其它个别同种型、亚型和结构形式以及它们中两种或更多种的组合的测试 联用。 一个实施方案中，生物样品为血液或血清样品。可选择的生物样品包括包含表达 dlgA的细胞的样品。因此，一些实施方案中，所述方法可用来在永生化B细胞的筛选或分离 中检测表达dlgA的个别B-细胞。 另一个实施方案中，生物样品从受试者中获得。在一些实施方案中，受试者为人类 或灵长类，以及在另一个实施方案中，受试者为除灵长类或人类物种外的哺乳动物或禽类 动物物种。基于感兴趣的靶抗体和抗体来源的物种选择不同形式的重组PlgR。 如在一个实施方案中所阐明的，plgR为重组HpIgA或RpIgR。便利地，在一个实施 方案中，重组plgR或dlgA-结合变体的跨膜结构域和/或胞浆结构域缺失。在其它实施方 案中，重组plgR包含异源检测或结合域。在另一个实施方案中，重组plgR或IgA-结合变 体在多糖缺陷细胞中重组产生，如CH0细胞。 在上述方法的示例性实施方案中，重组plgR结合到固体支持物上。 在一个实施方案中，将生物样品在用于所述方法之前耗尽IgM或dlgA抗体，这就 允许结合IgM和dlgA的plgR在测定中被利用以特异性地检测dlgA。同样地，dlgA的耗竭 (例如使用R/HpIgR)有利于在测定中利用HpIgR以特异性地检测IgM。一些实施方案中， 为了减少与dlgA的竞争，样品使用之前被耗竭IgG。然而，当竞争性抗体在本申请抗体/同 种型捕获模式中被洗掉时，此类竞争的缺乏是上述方法的一个优势。 可采用任何感兴趣的抗原，以及在非限制性实施方案中，所述感兴趣的抗原是传 染原的抗原或与侵袭黏膜表面或相关组织的受试者病症相关的抗原。例如，传染原包括 HIV、麻风病、梅毒、肝炎、登革病毒、麻瘆和风瘆。 在一个实施方案中，上述方法还包括使生物样品与抗-SC结合剂或抗-SC抗体接 触，其中所述抗-SC结合剂或抗-SC抗体结合SIgA并形成SIgA-结合剂/抗体复合物。在 另一个实施方案中，所述方法还包括使包含所述plgR-dlgA复合物的样品与变性溶液接 触，去除来自复合物的任何SIgA并测定生物样品中SIgA和dlgA的比值。 另一方面，本说明书实现了用于确定测试受试者的肠壁完整性的抗体捕获方法， 所述方法包括：（i)获得包含来自测试受试者的抗体的生物样品，（ii)使所述生物样品和 重组plgR或dlgA-结合变体接触，其中所述plgR或变体结合dlgA并形成plgR-dlgA复合 物，和（iii)使所述生物样品与特异性抗-SIgA结合剂或抗-SC结合剂/抗体接触，其中 抗-SIgA结合剂或抗-SC结合剂/抗体结合SIgA并形成SIgA-结合剂/抗体复合物，以及 (iv)测定和比较本文档来自技高网...
【技术保护点】
抗体捕获方法，其包括：(i)获得包含抗体的生物样品，(ii)使所述生物样品与重组pIgR或dIgA‑结合变体相接触，其中所述pIgR或变体结合dIgA并形成pIgR‑dIgA复合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·安德鲁·安德森，玛丽·路易斯·加西亚，纳丁·卡梅尔·巴奈斯，哈瑞雅赫·穆赫德·哈纳菲亚，阿兰·李·兰迪，
申请(专利权)人：马克法兰伯尼特医学研究与公共健康协会有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU
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