一种用于测定miRNA的DNA纳米机器及其建立和测定方法技术

本发明专利技术一种用于测定miRNA的DNA纳米机器及其建立和测定方法，结合链置换技术和滚环扩增放大技术，以miRNA作为“燃料”，构建DNA纳米机器，利用荧光放大的方法检测miRNA；miRNA催化DNA行走链沿着特定的DNA分子轨道有序行走，逐步改变其位置，并引发下一步的反应，通过滚环扩增反应和限制性内切酶酶切反应的双扩增技术，可以产生明显的荧光放大信号；本发明专利技术纳米机器采用miRNA作为动力，利用滚环扩增和限制性内切酶剪切的双扩增技术，可很好地用于miRNA的检测，特异性好、灵敏度高；同时，操作容易、选择性高，并在一定范围内呈现出线性关系，本发明专利技术有助于DNA纳米机器在生物分析、临床分析、环境分析等领域的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，特别涉及一种用于测定miRNA的DNA纳米机器及其建立和测定方法。
技术介绍
核酸，作为由许多核苷酸组成的生物大分子化合物，是生命的最基本物质之一。它们广泛存在于所有动植物，微生物等生物体当中，其主要功能是遗传信息的存储和转移。DNA分子不仅可以作为遗传信息载体，同时也是一种结构精巧的天然生物材料。DNA作为这种生物纳米材料，可塑性强、稳定性高，在生物分析、临床分析、环境分析等领域的应用方面具有很大的潜力。根据碱基互补配对原则，腺嘌呤(Adenine)与胸腺嘧啶(Thymine)，或在RNA中与尿嘧啶(Uracil)配对，鸟嘌呤(Guanine)与胞嘧啶(Cytosine)配对，从而形成DNA双螺旋结构。DNA链置换反应是利用不同的单链DNA之间形成双螺旋结构的结合力不同，利用不同核酸序列对互补链的竞争，得到热力学稳定性高的双链DNA。链置换反应关键在于通过互补的单链区域(toehold)引发，该区域通常由多个碱基序列组成，然后通过分支迁移本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于测定miRNA的DNA纳米机器，包括DNA分子轨道和DNA行走链，其特征在于，在DNA纳米机器中注入miRNA，以miRNA为动力驱动DNA行走链在DNA分子轨道上向前移动。

【技术特征摘要】
1.一种用于测定miRNA的DNA纳米机器，包括DNA分子轨道和DNA
行走链，其特征在于，在DNA纳米机器中注入miRNA，以miRNA为动力
驱动DNA行走链在DNA分子轨道上向前移动。
2.权利要求1所述用于测定miRNA的DNA纳米机器的建立方法，其
特征在于，将构成DNA纳米机器的所有DNA链在缓冲溶液中按照如下程序
降温：90摄氏度，3分钟；65摄氏度，30分钟；45摄氏度，30分钟；37摄
氏度，30分钟；25摄氏度，过夜；加入了DNA链之后的反应液总体积为20
微升，DNA链的浓度为100纳摩尔每升，其中缓冲溶液的溶剂为去离子水，
组份以及含量为：
三羟甲基氨基甲烷，33毫摩尔每升；
醋酸镁，10毫摩尔每升；
醋酸钾，66毫摩尔每升；
吐温20，体积浓度0.1％；
以及，二硫苏糖醇，1毫摩尔每升；
经过退火反应后，得到组装好的DNA纳米机器；
在组装好的DNA纳米机器中注入miRNA，于25摄氏度反应2h，miRNA
的加入作为“燃料”引发一系列链置换反应，驱动DNA行走链沿着DNA分
子轨道向前运动，形成锁式探针(padlock probes)DNA；
然后加入60unit T4DNA连接酶，将3微升的10×T4...

【专利技术属性】
技术研发人员：李景虹，王丽达，刘洋，王晶，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11