一种促进肺癌细胞凋亡的药物组合物以及检测方法技术

本发明专利技术提供一种促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，包括水飞蓟宾、替加氟和铂类药物；所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549。本发明专利技术属于医药技术领域，本发明专利技术提供的药物组合物具有良好的肺癌细胞抑制效果，且可显著促进肺癌细胞的凋亡。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，涉及一种促进肺癌细胞凋亡的药物组合物以及肺癌细 胞凋亡的检测方法。
技术介绍
肺癌是一种常见的肺部恶性肿瘤，近年来的发病率和死亡率增长最快，对人类健 康安全的威胁也越来越大。恶性肿瘤是危害人类生命健康的细胞性疾病，肿瘤细胞从生物 体内正常细胞转化为恶性细胞，其形态、功能、代谢和增殖等都会发生变化，可以看作是细 胞的异常分化导致其具有永生性。 水飞蓟宾（Silybin)是从菊科药用植物水飞蓟种子的种皮中提取所得的一种天 然黄酮木脂素类化合物。水飞蓟宾呈黄色粉末，味苦，可溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇， 微溶于氯仿，几乎不溶于水。其分子式为C 25H22Oltl，摩尔质量为482. 12。水飞蓟宾临床上主 要用于治疗中毒性及酒精相关性肝病的治疗，还可作为抗氧化食品添加剂。药理学研宄表 明，水飞蓟宾能够清除机体内自由基，延缓衰老，对抗脂质过氧化，抑制一氧化氮的产生，减 轻对组织细胞的毒素，保护肝细胞膜、改善肝功能，降血脂和保护心肌等作用。孙羿等在《水 飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制》一文中指出水飞蓟宾可抑制人 膀胱癌细胞株5637的增殖，并能降低凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。中国专利申请 201010238453. X公开了水飞蓟宾在治疗神经受损方面的用途。 替加氟是氟尿嘧啶的衍生物，在体内经肝脏活化转变为氟尿嘧啶而起抗肿瘤作 用，能干扰和阻断DNA、RNA及蛋白质合成，主要作用于S期，是抗嘧啶类的细胞周期特异性 药物。药理学研宄表明，替加氟对胃癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、乳腺癌和肝癌具有一定的 疗效。 自从顺铂被发现具有抗癌活性以来，铂类抗癌药物的应用和研宄得到了迅速发 展，临床上常用的铂类抗癌药物有顺铂、卡铂和奥沙利铂等。奥沙利铂为第三代铂类抗癌药 物，是第一个显现对结肠癌有效的络铂类烷化剂及在体内外均有广谱抗肿瘤活性的铂类抗 癌药。奥利沙铂对大肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌及乳腺癌等多种肿瘤细胞株，包括对顺铂 和卡铂耐药株均有显著的抑制作用。 目前，市场上仍缺少可以显著促进肺癌细胞凋亡的药物组合物。
技术实现思路
为解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种促进肺癌细胞凋亡的药物组合 物，并提供了相应的肺癌细胞凋亡的检测方法。 一种促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，包括水飞蓟宾、替加氟和铂类药物；所述肺 癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549。 专利技术人对现有的具有抗癌效果的药物进行了大量筛选和复配，预料不到地发现： 通过水飞蓟宾、替加氟和铂类药物以一定重量比组合得到的药物组合物具有良好的肺癌细 胞抑制效果，且可显著促进肺癌细胞的凋亡。 通常情况下，水飞蓟宾主要用于肝脏疾病的治疗，替加氟主要用于治疗消化系癌。 铂类药物虽然具有较广泛的抗癌作用，但尚无文献报道铂类药物可与水飞蓟宾、替加氟联 合作为组合物联合使用。替加氟即1_(四氢-2-呋喃基）-5-氟-2, 4 (1H，3H)-嘧啶二酮。 优选地，所述药物组合物中，水飞蓟宾、替加氟和铂类药物的质量比为（1~2): (1~2) ： (0. 5~1) 〇 优选地，所述药物组合物中，水飞蓟宾、替加氟和铂类药物的质量比为2 :2 :1。 优选地，所述铂类药物选自卡铂或奥沙利铂。 优选地，所述药物组合物由水飞蓟宾、替加氟、铂类药物和药学上可接受的载体制 得。 优选地，所述药物组合物为注射剂。 相应地，本专利技术还提供一种肺癌细胞凋亡的检测方法，包括如下步骤： A) 培养A549肺癌细胞，收集对数生长期细胞，调整细胞浓度，接种于6孔板中培养； B) 采用所述的药物组合物对所述肺癌细胞进行处理； C) 采用不含EDTA的胰酶消化所述肺癌细胞，并采用含有胎牛血清的培养基终止对肺 癌细胞的消化，将终止消化后的肺癌细胞进行离心，弃除上清液，采用预冷的PBS缓冲液重 悬细胞并转入无菌的离心管中，离心收集细胞； D) 加入Binding Buffer重悬，加入Annexin V-FITC后轻轻混匀，避光孵育，再加入PI， 轻轻混匀，进行流式细胞仪检测。 细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制的控制自动结束 生命的过程。细胞凋亡的过程大致可分为四个阶段：（1)凋亡信号转导；（2)凋亡基因激活； (3)凋亡的执行；（4)凋亡细胞的清除。将Annexin V进行绿色荧光FITC (异硫氰酸荧光 素）标记，以标记了的Annexin V作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡 的发生。碘化丙啶（PI)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它不能透过正常细胞或早 期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜在嵌 入细胞核的双链DNA后释放红色荧光。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不 同凋亡时期的细胞区分开来。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供药物组合物包括水飞蓟宾、替 加氟和铂类药物，具有良好的肺癌细胞抑制效果，且可显著促进肺癌细胞的凋亡，对肺癌细 胞的增殖能力有显著的协同抑制作用，尤其对非小细胞肺癌细胞株A549具有非常好的抑 制效果。【附图说明】 图1为效果实施例二中的对照组流式细胞仪检测图。 图2为效果实施例二中的实施例一组流式细胞仪检测图。 图3为效果实施例二中的对比例一组流式细胞仪检测图。【具体实施方式】 下面通过具体实施例对本专利技术作进一步详细的说明。 本专利技术中，肺癌细胞株A549细胞株购自武汉大学中国典型培养物保藏中心，SPF 级BALB/c-nu小鼠购自广东省医学实验动物中心，所使用的试剂均为常规市售试剂。 实施例一促进肺癌细胞凋亡的药物组合物【主权项】1. 一种促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，其特征在于：包括水飞蓟宾、替加氟和铂类 药物；所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549。2. 根据权利要求1所述的促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，其特征在于：所述药物组 合物中，水飞蓟宾、替加氟和铂类药物的质量比为（1~2) :(1~2) :(0. 5~1)。3. 根据权利要求2所述的促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，其特征在于：所述药物组 合物中，水飞蓟宾、替加氟和铂类药物的质量比为2 :2 :1。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，其特征在于： 所述铂类药物选自卡铂或奥沙利铂。5. 根据权利要求1至3中任一项所述的促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，其特征在于： 由水飞蓟宾、替加氟、铂类药物和药学上可接受的载体制得。6. 根据权利要求1至3中任一项所述的促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，其特征在于： 所述药物组合物为注射剂。7. -种肺癌细胞凋亡的检测方法，其特征在于：包括如下步骤： A) 培养A549肺癌细胞，收集对数生长期细胞，调整细胞浓度，接种于6孔板中培养； B) 采用权利要求1至6中任一项所述的药物组合物对所述肺癌细胞进行处理； C) 采用不含EDTA的胰酶消化所述肺癌细胞，并采用含有胎牛血清的培养基终止对肺 癌细胞的消化，将终止消化后的肺癌细胞进行离心，弃除上清液，采用预冷的PBS缓冲液重 悬细胞并转入无菌的离心管中，离心收集细胞； D) 加入BindingBuffer重悬，加入An本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促进肺癌细胞凋亡的药物组合物，其特征在于：包括水飞蓟宾、替加氟和铂类药物；所述肺癌细胞选自非小细胞肺癌细胞株A549。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：燕启江，
申请(专利权)人：广州金域医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44