一种提取蚯蚓的多种酶及蛋白的方法技术

一种提取蚯蚓的多种酶及蛋白的方法，将处理干净的鲜蚯蚓搅碎得浆料，再将浆料离心取上清液；将上清液进行膜过柱后的截留液冷冻干燥得蚓激酶和超氧化物歧化酶；将滤过液再进行膜过柱，截留液冷冻干燥得蚯蚓蛋白；再将滤过液进行膜过柱，截留液进行喷雾干燥，得蚯蚓多肽。本发明专利技术提取方法一次性顺次操作，即可分别得到蚓激酶、超氧化物歧化酶、蚯蚓蛋白和蚯蚓多肽，提取方法简单，易操作。提取过程不采用有机溶剂，节省大量成本投入，而且提取的有机化合物质量好，适用于工业化生产。蚓激酶可用来制作溶栓及厂家制药；蚯蚓SOD可应用于各种生化试剂、美容保健；蚯蚓蛋白应用于各种食品，化妆品，以及饲料；蚯蚓多肽应用于人体保健及各种饮料制品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及生物
，尤其是设及一种祇蝴的提取方法。
技术介绍
祇蝴又名地龙，祇蝴干蛋白质含量达到70%，是制备药品、化妆品、保健食品等的 原料，具有很大的经济价值。祇蝴的化学成分种类繁多，结构复杂，大多为高分子有机化合 物，目前被人们研究最多的是祇蝴多肤，然而其他的有机化合物就被忽略而浪费了，祇蝴的 经济价值没有被最大化的挖掘出来。因此，亟需提供一种提取方法，能将祇蝴的多种有用的 有机化合物提取出来，使祇蝴的经济价值最大化。
技术实现思路
针对现有技术的上述缺陷和问题，本专利技术的目的是提供一种祇蝴的提取方法，提 取方法简单，易操作，能同时分别将蝴激酶、超氧化物歧化酶、祇蝴蛋白和祇蝴多肤提取出 来，充分利用了祇蝴，使祇蝴的经济价值最大化。 为了达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案： 一种提取祇蝴的多种酶及蛋白的方法，包括W下步骤： 步骤一、将鲜祇蝴处理干净后，加入水中，揽碎得浆料，再将浆料离屯、取上清液； 步骤二、将步骤一得到的上清液进行膜过柱操作，采用截留分子量为1万至5万道 尔顿的超滤膜进行超滤，得截留液I和滤过液I，将截留液I分为两份，分别提纯后冷冻干 燥，得蝴激酶和超氧化物歧化酶；[000引步骤=、将滤过液I再进行膜过柱操作，采用截留分子量大于5万道尔顿的超滤 膜进行超滤，得截留液II和滤过液II，将截留液II冷冻干燥，得祇蝴蛋白； 步骤四、将滤过液II进行膜过柱操作，采用截留分子量小于5万道尔顿的超滤膜 进行超滤，得截留液III，将截留液III进行喷雾干燥，得祇蝴多肤； 完成祇蝴的提取。 进一步地，步骤一中，将鲜祇蝴处理干净的具体操作如下：将鲜祇蝴清洗后，置于 水中浸泡24小时，待鲜祇蝴吐泥完全后，再清洗干净即可。 进一步地，步骤一中，所述的离屯、的条件为；采用管式分离机，W1200化pm(转/分 钟）的转速，离屯、。 进一步地，所述管式分离机采用中空纤维分离膜巧。 具体地，所述管式分离机采用分离型管式离屯、机。具体如型号为GF105的管式分 离机。 本专利技术的一种提取祇蝴的多种酶及蛋白的方法，一次性顺次操作，即可分别得到 蝴激酶、超氧化物歧化酶、祇蝴蛋白和祇蝴多肤，提取方法简单，易操作。而且，本专利技术的提 取方法中不采用有机溶剂，节省大量成本投入，而且提取的有机化合物质量好，适用于工业 化生产。 本专利技术提取得到蝴激酶具有溶解血凝块的功效，且其比活力可达到30000单位， 可W用来制作溶栓及厂家制药。祇蝴SOD的酶活力可W达到26.OU/mU因此可W应用于各 种生化试剂、美容保健。祇蝴蛋白提取物中蛋白含量达到6%，可W补充人体蛋白的缺乏，应 用于各种食品，化妆品，化及饲料等。祇蝴多肤提取物中多肤的含量达到381113/111以用于应用 于人体保健及各种饮料制品。【具体实施方式】 下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然， 所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施 例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于 本专利技术保护的范围。 本专利技术的【具体实施方式】的一种祇蝴的提取方法，包括W下步骤： 步骤一、将鲜祇蝴清洗后，置于水中浸泡24小时，待鲜祇蝴吐泥完全后，再清 洗2-4遍，将鲜祇蝴处理干净；然后将处理干净的鲜祇蝴加入水中，揽碎得浆料；再将浆 料采用分离型中空纤维分离膜巧的管式分离机（例如，型号为GF105的管式分离机），W 12000巧m(转/分钟）的转速，进行离屯、，取上清液。 步骤二、将步骤一得到的上清液进行膜过柱操作，采用截留分子量为1万至5万道 尔顿的超滤膜进行超滤，得截留液I和滤过液I，将截留液I分为两份，分别提纯后冷冻干 燥，得蝴激酶和超氧化物歧化酶。 步骤=、将滤过液I再进行膜过柱操作，采用截留分子量大于5万道尔顿的超滤 膜进行超滤，得截留液II和滤过液II，将截留液II冷冻干燥，得祇蝴蛋白。 步骤四、将滤过液II进行膜过柱操作，采用截留分子量小于5万道尔顿的超滤膜 进行超滤，得截留液III，将截留液III进行喷雾干燥，得祇蝴多肤。 完成祇蝴的提取方法。 本专利技术的【具体实施方式】中，对提取得到的蝴激酶、超氧化物歧化酶、虫丘蝴蛋白和虫丘 蝴多肤分别进行鉴定测试，W及相关性能测试。具体如下：[002引 1、蝴激酶 (1)鉴定；取步骤二中所提取得到的蝴激酶适量，加水制成每ImL中含0. 5mg的溶 液，按分光光度法（中国药典2000年版附录IVA)测定，在278nm的波长处有最大吸收。证 明提取物中含有蝴激酶。 似取本品适量，加0. 9%氯化钢溶液制成每1血中含lOmg的溶液，作为供试品溶 液；用6号针头取动物血1滴于试管底部，30分钟后，加供试品溶液ImL置试管中，轻轻摇 动，血凝块在60分钟内溶解。W0. 9%氯化钢溶液ImL为空白，同法操作，血凝块不溶解。 具有溶栓功效。提取得到蝴激酶可W用来溶栓及厂家制药。[00測 做比活力测定A、效价测定 ①试剂[003U 0.Olmol/L磯酸盐缓冲液（pH7. 8);取磯酸氨二钢3. 58g，加水使溶解并稀释至 1000血为A液；取磯酸二氨钢（N址2P04 .2肥0) 0. 78g，加水使溶解并稀释至500血为B液； 将A、B两液混合至抑值为7. 8。 工作溶液：取0.Olmol/L磯酸盐缓冲液（pH7. 8)与0. 9%氯化钢溶液W体积比为 1:17混合[003引1. 5%琼脂糖溶液；取琼脂糖1. 5g，加工作溶液100血加热溶解。 纤维蛋白原溶液；取纤维蛋白原适量，加工作溶液制成每ImL中含1. 5mg的可凝蛋 白溶液。 凝血酶溶液；取凝血酶，加0. 9%氯化钢溶液制成每ImL中含IBP单位的溶液。 标准品溶液的制备；取蝴激酶标准品，用0. 9%氯化钢溶液制成浓度分别为每1ml 中含10000,8000,6000,4000, 2000蝴激酶单位的溶液。 供试品溶液的制备；取本品适量，加0. 9%氯化钢溶液使溶解并稀释成标准曲线 范围内的浓度。[003引②测定法取纤维蛋白原溶液3911心置烧杯中，边揽拌边加入55°C琼脂糖溶液 39ml、凝血酶溶液3. 0ml，立即混匀，快速倒入直径14cm塑料培养皿中，室温水平放置1小 时，打孔。精密量取不同浓度的蝴激酶标准品溶液及供试品溶液各10y以分别点在同一平 皿中，加盖，置37°C恒温箱中反应18小时。取出后用卡尺测量溶圈垂直两直径，W蝴激酶标 准品单位数的对数为横坐标，垂直两直径乘积的对数为纵坐标，计算回归方程，将供试品垂 直两直径乘积的对数代入回归方程，计算供试品效价单位数。 计算得到，本专利技术【具体实施方式】的步骤二中提取得到的蝴激酶的效价达到18000 单位。B、蛋白含量测定[004U取本品约20mg，精密称定，照氮测定法（中国药典2000年版二部附录VIID第二 法）测定，将结果乘W6. 25,即为供试品中蛋白含量，并计算每Img供试品中的蛋白毫克数。 得到步骤二中提取得到的每Img蝴激酶的蛋白含量为0. 6mg。 比活力按下式计算比活力；【主权项】1. ，其特征在于：包括以下步骤： 步骤一、将鲜蚯蚓处理干净后，加入水中，搅碎得浆料，再将浆料离心取上清液； 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取蚯蚓的多种酶及蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、将鲜蚯蚓处理干净后，加入水中，搅碎得浆料，再将浆料离心取上清液；步骤二、将步骤一得到的上清液进行膜过柱操作，采用截留分子量为1万至5万道尔顿的超滤膜进行超滤，得截留液Ⅰ和滤过液Ⅰ，将截留液Ⅰ分为两份，分别提纯后冷冻干燥，得蚓激酶和超氧化物歧化酶；步骤三、将滤过液Ⅰ再进行膜过柱操作，采用截留分子量大于5万道尔顿的超滤膜进行超滤，得截留液Ⅱ和滤过液Ⅱ，将截留液Ⅱ冷冻干燥，得蚯蚓蛋白；步骤四、将滤过液Ⅱ进行膜过柱操作，采用截留分子量小于5万道尔顿的超滤膜进行超滤，得截留液Ⅲ，将截留液Ⅲ进行喷雾干燥，得蚯蚓多肽；完成蚯蚓的提取。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李大冶，
申请(专利权)人：沈阳尊龙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21