一种shRNA-Ago2共表达慢病毒RNAi载体、重组质粒及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种shRNA-Ago2共表达慢病毒RNAi载体、重组质粒及其构建方法，所述shRNA-Ago2共表达慢病毒RNAi载体，包含shRNA表达框和Ago2蛋白表达框，所述的shRNA表达框包含启动子U6、H1或7SK，以及ccdB致死基因；所述Ago2蛋白表达框包含CMV强启动子、Ago2蛋白表达基因、内部核糖体进入位点DNA序列和ZsGreen1绿色荧光蛋白表达基因。该载体引入细胞后可同时表达干扰目的基因的shRNA和增强因子Ago2及ZsGreen1绿色荧光蛋白报告基因。本发明专利技术通过共表达Ago2显著增强shRNA的沉默作用，操作简单、快速，显著提高了RNAi干扰基因的效果和持续时间，可应用在肿瘤等重大疾病的治疗等方面。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于功能基因组学研究领域，涉及一种慢病毒RNAi载体、重组质粒及其构 建方法。
技术介绍
RNA干扰（RNA interference, RNAi)是一种在进化过程中高度保守的，由双链 RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发同源mRNA高效特异性降解的基因转录后沉默现象 (Fire A. , Nature, 1998. 391 (6669) :p. 806-11.)。RNAi 技术不仅揭示了细胞内基因沉默机 制，是继酵母杂交系、DNA芯片、基因敲除、反义RNA等技术后的又一解读基因功能的有效研 究手段，极大地促进了人类揭示生命奥秘的进程。RNA干扰在细胞中的作用机制分为三个 阶段：第一个是起始阶段，外源性或内源性双链RNA分子被细胞内的Dicer酶加工剪切成 21-25个核苷酸长度的小分子双链（small-interfering RNAs，siRNA);第二个是RISC的组 装阶段，产生的siRNA中其中一条链与Argonaute (Ago)及其相关蛋白组装形成具有活性 的沉默复合体RISC (RNA-induced silencin本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种shRNA‑Ago2共表达慢病毒RNAi载体，其特征在于，所述RNAi载体包含shRNA表达框和Ago2蛋白表达框；所述shRNA表达框包含启动子hU6、H1或7SK，以及ccdB致死基因；所述Ago2蛋白表达框包含CMV启动子、Ago2蛋白表达基因、内部核糖体进入位点DNA序列和ZsGreen1绿色荧光蛋白表达基因。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苟德明，康康，何洁凝，李洁璇，田生礼，
申请(专利权)人：苟德明，康康，
类型：发明
国别省市：广东;44