冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法技术

本发明专利技术涉及一种乳粉样品中有害物质的前处理方法，特别涉及一种冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法，主要用于对婴幼儿配方乳粉中氯霉素药物残留量进行测定，属于食品加工检测领域。该方法包括如下步骤：(1)称取固体乳粉样品，加超纯水,或者称取乳液样品,和有机提取试剂混合，先提取，再振荡，得处理液；(2)将处理液倒入高压冷冻萃取釜，注入乙酸乙酯；(3)将高压冷冻萃取釜放入冰箱冷冻，或放入冰浴；(4)取出高压冷冻萃取釜，吸取上层有机相，过滤，得滤液。本发明专利技术所提供的冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法不仅萃取效率高，能够减小甚至消除干扰组分，而且操作简单方便，有助于乳样品中有害物质的有效检测。

【技术实现步骤摘要】
冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法
本专利技术涉及一种乳粉样品中有害物质的前处理方法，特别涉及一种冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法，主要用于对婴幼儿配方乳粉中氯霉素药物残留量进行测定，属于食品加工检测领域。
技术介绍
氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一种高效广谱抗生素，常用于动物各种传染性疾病的治疗，对多种病原菌有较强的抑制作用。由于氯霉素价格低廉，抗病性强，给奶牛非法服用氯霉素的情况时有发生，以致乳粉中会存在氯霉素残留，从而给婴幼儿的健康带来潜在的危害。目前欧盟、美国已将氯霉素列为法定禁用兽药。欧盟确定最低限量为0.1μg/kg，我国也规定动物性“不得检出”。样品前处理是检测乳粉中氯霉素残留量的关键步骤，直接影响检测的结果。乳粉中样品前处理是建立快速、准确的分析方法的前提。对于不同基质的样品，以及为了不同的分析目的，目前，多种高效的样品预处理技术，如：液-液萃取、相萃取、基质固相分散萃取、固相微萃取、搅拌棒吸附萃取、膜萃取、液相微萃取、超临界流体萃取、加速溶剂萃取、分子印迹、微波辅助萃取等技术已经被广泛应用于食品中农、兽药残留、有毒有害物质残留及食品添加剂等残留检测的前处理。然而，这些前处理方式往往需要消耗大量的有机溶剂、相应的萃取材料以及相应的前处理仪器，不仅增加分析成本，而且会造成二次污染。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法，本专利技术所提供的冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法不仅萃取效率高，能够减小甚至消除干扰组分，而且操作简单方便，有助于乳样品中有害物质的有效检测。本专利技术技术方案如下：一种冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法，该方法所用到的原料包括：浓度为100mg/l的氘代氯霉素内标-d5标准品，纯度为色谱纯的饱和乙酸乙酯，超纯水，乳样品，所述乳样品为固体乳粉样品或者乳液样品；该方法所用到的设备包括100mL高压冷冻萃取釜，冰柜，数显精密温度计；该方法包括如下依次进行的步骤：(1)称取固体乳粉样品5～10g，将固体乳粉样品加超纯水50～80mL，和用于提取乳样品中有害物质的有机提取试剂20～50mL混合，先涡旋提取1～5min，再中速振荡2～5min，得到处理液；或者称取乳液样品50～80mL，和饱用于提取乳样品中有害物质的有机提取试剂20～50mL混合，先涡旋提取1～5min，再中速振荡2～5min，得到处理液；(2)将步骤(1)所得的处理液倒入高压冷冻萃取釜中，盖紧釜盖，并拧紧釜体釜盖，之后打开釜盖上的密封螺栓，用注射器通过釜盖中的小孔向高压冷冻萃取釜中再注入适量饱和乙酸乙酯，将高压冷冻萃取釜中残留的气泡排出；(3)将釜盖上的密封螺栓旋入釜盖，并用力拧紧，将高压冷冻萃取釜放入-18～-22℃的冰箱中冷冻1.8-2.2h，或放入冰浴中25-35min；(4)取出高压冷冻萃取釜，先之后打开釜盖上的密封螺栓，再打开釜盖，用吸管吸取5～20ml上层有机相，采用0.20-0.24μm滤膜过滤，获得用于检测的滤液。进一步的，所述用于提取乳样品中有害物质的有机提取试剂为饱和乙酸乙酯。更进一步的，如需浓缩，该方法的步骤(4)中所述有机相在过滤前先移取至离心管中，在45-55℃下氮气吹干，接着用0.8-1.2mL流动相溶解后再过滤。本专利技术的专利技术原理如下：对于含有目标溶质的水溶液，当温度降低到其冰点时，水开始结冰析出固相。溶质在冰相和水相中的溶解度不同，依化学势或平衡常数的限制维持其在不同相中的浓度。其基本原理参见图1所示。溶质在水相中的浓度为CL，在冰中的浓度为CS。在温度和压力保持不变的情况下，其在固液两相平衡时分配系数k恒定不变：当随着水逐渐结成冰，尽管可以认为水溶液中的溶质浓度各处相等，但是冰中的溶质浓度并非均一。当有dVs的液体冷冻变成固体，而其中溶质的量为dnsmol时，则在这一小块固体中溶质的浓度为：结合式(1)-(2)，整理得：其中，VL、nL分别为液相体积及其中溶质的浓度。开始没有结冰时水溶液中溶质的浓度为C0；体积为V0；两相密度比为a，那么VS+aVS＝V0(4)ns+nL＝c0V0(5)将式(4)和式(5)代入式(3)中，积分可得：式(6)反映了采用区域熔炼进行水溶液中的样品预处理过程中，水相中溶质浓度的变化。显然，溶质在水相中的浓度与其在两相间的平衡常数及其冰的体积分数有关。本专利技术所提供的冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法是利用水在密闭容器中结冰体积膨胀产生高压的原理,结合冷冻区域熔炼及液液萃取技术，所发展的一种高压冷冻液液萃取技术.通过高压冷冻液液萃取,可以减小甚至消除某些干扰组分,而对某些特征组分可以显著提高富集效果,以及某些在常温及冷冻液液萃取中不能检测到的痕量组分,在高压冷冻液液萃取中得到明显富集，因此可以作为一种新型的样品前处理技术在食品检测领域得到广泛应用。对比现有技术，本专利技术有如下优点：1)萃取效率高。2)能够减小甚至消除干扰组分。3)操作简单方便。4)现有技术中大多数成分复杂的婴幼儿乳粉用乙腈和甲醇和水互溶，高压冷冻后无法很好分层，导致提取效率低，而饱和乙酸乙酯可以和水分层，高压冷冻后水相凝固，氯霉素溶于饱和乙酸乙酯，提取效率高。附图说明图1为本专利技术冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法的基本原理图。具体实施方式下面结合具体实施方式和具体实施例来对本专利技术进行详细的说明。具体实施方式如下：(1)称取固体乳粉样品5～10g，将固体乳粉样品加超纯水50～80mL，和饱和乙酸乙酯20～50mL混合，先涡旋提取1～5min，再中速振荡2～5min，得到处理液；或者称取乳液样品50～80mL和饱和乙酸乙酯20～50mL混合，先涡旋提取1～5min，再中速振荡2～5min，得到处理液；(2)将步骤(1)所得的处理液倒入高压冷冻萃取釜中，盖紧釜盖，并拧紧釜体釜盖，之后打开釜盖上的密封螺栓，用注射器通过釜盖中的小孔向高压冷冻萃取釜中再注入适量饱和乙酸乙酯，将高压冷冻萃取釜中残留的气泡排出；(3)将釜盖上的密封螺栓旋入釜盖，并用力拧紧，将高压冷冻萃取釜放入-18～-22℃的冰箱中冷冻1.8-2.2h，或放入冰浴中25-35min；(4)取出高压冷冻萃取釜，先之后打开釜盖上的密封螺栓，再打开釜盖，用吸管吸取5～20ml上层有机相，采用0.20-0.24μm滤膜过滤，获得用于检测的滤液。步骤(4)中所述有机相如要浓缩，可在过滤前移取至离心管中并在45-55℃下氮气吹干，用0.8-1.2mL流动相溶解再过滤。(二)实施例如下：下面通过实施例进一步说明本专利技术：实施例组一(固体乳粉样品，无需浓缩)实施例1-1(1)称取固体乳粉样品8g，将固体乳粉样品加超纯水65mL，和饱和乙酸乙酯35mL混合，先涡旋提取3min，再中速振荡3min，得到处理液；(2)将步骤(1)所得的处理液倒入高压冷冻萃取釜中，盖紧釜盖，并拧紧釜体釜盖，之后打开釜盖上的密封螺栓，用注射器通过釜盖中的小孔向高压冷冻萃取釜中再注入适量饱和乙酸乙酯，将高压冷冻萃取釜中残留的气泡排出；(3)将釜盖上的密封螺栓旋入釜盖，并拧紧，将高压冷冻萃取釜放入-20℃的冰箱中冷冻2h，或放入冰浴中30min；(4)取出高压本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法，其特征在于：该方法包括如下依次进行的步骤：(1)称取固体乳粉样品5～10g，将固体乳粉样品加超纯水50～80mL，和用于提取乳样品中有害物质的有机提取试剂20～50mL混合，先涡旋提取1～5min，再中速振荡2～5min，得到处理液；或者称取乳液样品50～80mL，和饱用于提取乳样品中有害物质的有机提取试剂20～50mL混合，先涡旋提取1～5min，再中速振荡2～5min，得到处理液；(2)将步骤(1)所得的处理液倒入高压冷冻萃取釜中，盖紧釜盖，并拧紧釜体釜盖，之后打开釜盖上的密封螺栓，用注射器通过釜盖中的小孔向高压冷冻萃取釜中再注入适量饱和乙酸乙酯，将高压冷冻萃取釜中残留的气泡排出；(3)将釜盖上的密封螺栓旋入釜盖，并用力拧紧，将高压冷冻萃取釜放入‑18～‑22℃的冰箱中冷冻1.8‑2.2h，或放入冰浴中25‑35min；(4)取出高压冷冻萃取釜，先之后打开釜盖上的密封螺栓，再打开釜盖，用吸管吸取5～20ml上层有机相，采用0.20‑0.24μm滤膜过滤，获得用于检测的滤液。

【技术特征摘要】
1.一种冷冻区域熔炼萃取乳样品中有害物质的前处理方法，其特征在于：该方法包括如下依次进行的步骤：(1)称取固体乳粉样品5～10g，将固体乳粉样品加超纯水50～80mL，和用于提取乳样品中有害物质的有机提取试剂20～50mL混合，先涡旋提取1～5min，再中速振荡2～5min，得到处理液；或者称取乳液样品50～80mL，和用于提取乳样品中有害物质的有机提取试剂20～50mL混合，先涡旋提取1～5min，再中速振荡2～5min，得到处理液；(2)将步骤(1)所得的处理液倒入高压冷冻萃取釜中，盖紧釜盖，并拧紧釜体釜盖，之后打开釜盖上的密封螺栓，用注射器通过釜盖中的小孔向高压冷冻萃取釜中再注入适量饱和乙酸乙酯，将高压冷冻萃取釜中残留的气泡排出；(...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈光耀，林玉宙，池松炎，
申请(专利权)人：明一国际营养品集团有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35