一种大麦籽粒中冰结构蛋白的快速特异性纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种大麦籽粒中冰结构蛋白的快速特异性纯化方法。其特征包括以下步骤：(1)溶液除杂及蛋白浓度调节，(2)冻结曲线测定，(3)程序降温，(4)晶核的引入，(5)亲和吸附，(6)分离，(7)冷冻干燥。本发明专利技术利用大麦籽粒冰结构蛋白能够特异性亲和到冰晶上的特点，在溶液过冷阶段引入晶核使溶液产生大量小冰晶，达到特异性纯化冰结构蛋白的目的，具有用时短，效率高的特点，建立了一种新的特异性纯化大麦籽粒中冰结构蛋白的方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种大麦籽粒中冰结构蛋白的快速特异性纯化方法，其特征包括以下步骤：(1)粗提液除杂及蛋白浓度调节：采用0.22μm的微孔滤膜，除去粗提液中的颗粒性杂质，并调节蛋白浓度为0.1～1.0mg/mL；(2)冻结曲线测定：利用热电偶，测定并记录(1)中溶液的冻结曲线，确定冰点温度与过冷温度，降温速率为0.5～3℃/min；(3)程序降温：采用低温制冷循环系统对(1)中溶液进行程序降温，降温速率为0.5‑3℃/min，降温终点温度为‑10～0℃；(4)晶核引入：以微晶玻璃作为晶核，采用直投方式加入溶液，也可通过震荡、点触方式诱发产生晶核，使冰晶大量形成；(5)亲和吸附：将(4)中形成的冰水悬浮液在恒温下以10～100r/min的转速搅拌1～5min；(6)分离：低温下，使用预冷的砂芯漏斗将(5)中得到的悬浮液进行固液分离，真空抽滤除去冰渣中夹带的溶液，将获得的冰渣置于50mM的磷酸盐缓冲液中，使其融化；(7)冷冻干燥：将(6)中获得的溶液冷冻干燥即得到冰亲和纯化后的大麦籽粒冰结构蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张晖，丁向丽，齐希光，王立，钱海峰，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32