【技术实现步骤摘要】
一种组织工程表皮及其制备方法
本专利技术属于组织细胞学和组织工程学领域,特别涉及一种带有真皮细胞的组织工程表皮及其制备方法。
技术介绍
皮肤是人体面积最大的器官,承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力等功能,使体内各组织和器官免受物理性、机械性、化学性和病原微生物的侵袭。遗传疾病、烧烫伤、慢性皮肤创伤(如糖尿病)、白癜风、白化病等很多原因会对皮肤造成损害,影响皮肤美观、使皮肤留下疤痕甚至失去生理功能。当皮肤受到严重损害,如深度的大面积烧烫伤时,皮肤不能再进行自我恢复,会失去对细菌的抵御作用,导致大量细菌通过皮肤侵入人体,极易引发全身感染而导致死亡。目前,最普遍的治疗皮肤烧烫伤的方法是采用手术移植人体自身其他部位没有损伤的皮肤至烧烫伤处,但是这种方法有很大局限性,具体体现在:首先,当皮肤大面积烧伤时,人体自身的正常皮肤来源有限;其次,移植后的皮肤存活率低,这也是临床上皮肤移植面临的重大挑战。因此,利用体外培养技术来扩增皮肤细胞,在体外构建出组织工程皮肤,并通过组织工程皮肤移植来治疗皮肤创伤具有重要的意义。长期以来,皮肤学专家和皮肤科医生一直致力于具有生理功能的人类皮肤的再生研究。组织工程表皮早在20多年前就用于大面积烧伤的治疗,对提高烧伤病人的成活率起着重要作用,但普通的组织工程表皮产品移植到人体后有很多局限性,如表皮易起水泡不平整、表皮容易过度增生,而且因为没有真皮细胞通常会造成疤痕的收缩,不能形成真正具有完整生理功能的皮肤。因此,目前人工组织表皮除了用于临时覆盖伤口降低死亡率之外,在临床上的应用还比较少。近几年组织工程全程皮(包含表皮和真皮),即在体外用培 ...
【技术保护点】
一种带有真皮细胞的组织工程表皮的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1:获得表皮细胞;步骤2:接种所述表皮细胞,用表皮培养基培养至密度达到80%‑100%,之后,更换为混合培养基,培养16h‑24h,收集表皮细胞层,得组织工程表皮片;所述混合培养基包含胎牛血清、DMEM培养基和F12培养基;步骤3:转移所述组织工程表皮片至半渗透性聚合物、或硅胶模底物、或凡士林纱布上,得带有表皮细胞层的膜;其中,所述表皮细胞层的分化细胞层与所述半渗透性聚合物、或硅胶模底物、或凡士林纱布接触;步骤4:培养真皮细胞,将所得真皮细胞铺在所述带有表皮细胞层的膜的表皮细胞层之上,培养1h‑2h,即得;所述真皮细胞为从皮肤真皮中分离的真皮细胞或所述从皮肤真皮中分离的真皮细胞和黑色素细胞的混合物。
【技术特征摘要】
1.一种带有真皮细胞的组织工程表皮的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1:获得表皮细胞;步骤2:接种所述表皮细胞,用表皮培养基培养至密度达到80%-100%,之后,更换为混合培养基,培养16h-24h,收集表皮细胞层,得组织工程表皮片;所述混合培养基包含胎牛血清、DMEM培养基和F12培养基;步骤3:转移所述组织工程表皮片至半渗透性聚合物、或硅胶模底物、或凡士林纱布上,得带有表皮细胞层的膜;其中,所述表皮细胞层的分化细胞层与所述半渗透性聚合物、或硅胶模底物、或凡士林纱布接触;步骤4:培养真皮细胞,将所得真皮细胞铺在所述带有表皮细胞层的膜的表皮细胞层之上,培养1h-2h,即得;所述真皮细胞为从皮肤真皮中分离的真皮细胞或所述从皮肤真皮中分离的真皮细胞和黑色素细胞的混合物。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1中所述表皮细胞的制备方法为:取皮肤组织,用中性蛋白酶孵育12h-20h,之后分离表皮,得表皮;取所述表皮,切碎后,用胰酶酶解,收集,即得表皮细胞。3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤2中所述接种之前,还包括表皮细胞的传代培养;所述接种所用的表皮细胞为P1代表皮细胞、P2代表皮细胞或P3代表皮细胞。4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,其包括如下步骤:步骤(1):表皮细胞分离:(1-a)采集含有表皮的皮肤组织;(1-b)将所述皮肤组织消毒后用含双抗的磷酸盐缓冲液冲洗;(1-c)将所述冲洗后的皮肤组织切成长条状,浸没于中性蛋白酶酶液中,0℃-4℃消化孵育12h-20h;(1-d)分离所述消化孵育后的长条状皮肤组织,收集表皮部分,得表皮,切碎成粘稠状,制得表皮匀浆;(1-e)将所述表皮匀浆置于含胰酶的磷酸盐缓冲液中在37℃下消化25分钟-35分钟,制得表皮细胞悬液;(1-f)向所述表皮细胞悬液中加入含胎牛血清的DMEM培养基,中和表皮细胞悬液;(1-g)过滤中和后的表皮细胞悬液,离心、收集沉淀,得表皮细胞;步骤(2):所述表皮细胞的传代培养:将所述表皮细胞作为初始细胞,接种,培养至密度达80%-100%,进行传代;所述传代操作具体包括:(2-a)将培养至密度达80%-100%的表皮细胞用磷酸盐缓冲液洗去残留的血清后,浸没于含乙二胺四乙酸的胰酶酶液中,在37℃下消化5分钟-15分钟;(2-b)在显微镜下观察,当表皮细胞从培养板中脱落后,向其酶液中加入含胎牛血清的DMEM培养基中和后,离心,收集沉淀;向所述沉淀中加入含双抗的F12培养基重悬细胞后,离心分离,收集沉淀,得原代表皮细胞;(2-c)将所述原代表皮细胞按1:2-3的比例传代,所述传代次数为1代-5代...
【专利技术属性】
技术研发人员:吴训伟,邢志青,王景昆,
申请(专利权)人:苏州磐升生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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