用于治疗淀粉状蛋白沉积的方法和组合物技术

本公开内容提供将保护性ApoE同种型递送到哺乳动物的中枢神经系统中的方法，所述方法包括以有效感染非啮齿类哺乳动物的室管膜细胞的方式，将包含AAV衣壳蛋白和含编码保护性ApoE同种型的核酸的载体的rAAV颗粒给予哺乳动物的脑脊液(CSF)，使得室管膜细胞分泌ApoE进入哺乳动物的CSF中，所述核酸插入一对AAV反向末端重复之间。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于治疗淀粉状蛋白沉积的方法和组合物 相关申请 本专利申请要求2012年5月18日提交的美国申请顺序号61/648,801的优先权的权 益，所述申请通过引用结合到本文中。 联邦咨助支持 本专利技术在美国国立卫生研究院（National Institutes of Health)授予的资助号 RC1AG036265的政府支持下完成。政府在本专利技术中享有一定权利。 序列表 本申请含以ASCII格式通过EFS-Web提交的序列表，并通过引用以其整体结合到本文 中。2013年3月12日创建的所述ASCII副本被命名为17023. 122W01.txt，大小为20, 234 字节。 专利技术背景 基因转移目前被广泛公认为用于在细胞和分子水平两者上分析生物学事件和疾病过 程的强大工具。最近，用于遗传性（例如ADA缺乏症）或获得性（例如癌症或感染性疾病） 人类疾病治疗的基因疗法的应用，已受到相当多的关注。随着改进的基因转移技术的出现 和缺陷性基因相关疾病不断扩大的文库的鉴定，基因疗法已从治疗理论快速发展成实用的 事实。 传统上，基因疗法被定义为这样一种方法，其中将外源基因导入患者的细胞中以 纠正先天遗传错误。最近，基因疗法在广义上被定义为通过将新的遗传信息导入受影响的 生物体中来纠正疾病表型。在体内基因疗法中，转移的基因被原位导入接受生物体的细胞 中，即在接受者内。已在动物模型中检验了体内基因疗法。已报道了原位直接基因转移到 器官和组织（例如肌肉、造血干细胞、动脉壁、神经系统和肺）的可行性。还报告了 DNA直 接注射入骨骼肌、心肌和DNA-脂质复合物注射入血管系统以产生体内可检测表达水平的 插入的基因产物。 中枢神经系统（CNS)疾病（例如脑部遗传疾病例如阿尔茨海默病（Alzheimer' S disease))的治疗，仍然是难解决的问题。治疗脑部疾病的一个主要问题是治疗性蛋白质在 静脉内递送时，无法跨越血脑屏障，或当直接递送到脑时，不会广泛分布。因此，需要开发用 于治疗阿尔茨海默病的疗法。 专利技术概沭 在某些实施方案中，本专利技术提供治疗哺乳动物的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括 以有效感染非啮齿类哺乳动物的室管膜细胞的方式，将包含AAV衣壳蛋白和含编码保护性 ApoE同种型蛋白的核酸的载体的rAAV颗粒给予哺乳动物的脑脊液（CSF)，所述核酸插入一 对AAV反向末端重复之间，其中室管膜细胞分泌ApoE以治疗所述疾病。本文所用术语"保 护性ApoE同种型"用来区分降低阿尔茨海默病的风险达至少5%，例如10%、20%、30%、40%、 50%、60%、70%、80%、90%、100% 或更高的 ApoE 同种型。 在某些实施方案中，本专利技术提供将保护性ApoE同种型递送至非啮齿类哺乳动物 的中枢神经系统的方法，所述方法包括以有效感染非啮齿类哺乳动物的室管膜细胞的方 式，将包含AAV衣壳蛋白和包含编码保护性ApoE同种型的核酸的载体的rAAV颗粒给予非 啮齿类哺乳动物的脑脊液（CSF)，使得室管膜细胞分泌ApoE进入哺乳动物CSF，所述核酸插 入一对AAV反向末端重复之间。在某些实施方案中，rAAV颗粒是以超过AAV4的感染率20% 的感染率，例如以超过AAV4的感染率的50%或100%、1000%或2000%的感染率，感染非啮齿 类动物室管膜细胞的rAAV2颗粒。 在某些实施方案中，本专利技术提供治疗非啮齿类哺乳动物的疾病的方法，所述方法 将包含AAV衣壳蛋白和含编码保护性ApoE同种型蛋白的插入一对AAV反向末端重复之间 的核酸的载体的rAAV颗粒给予哺乳动物的室管膜细胞，从而将核酸递送至室管膜细胞中， 其中室管膜细胞分泌ApoE蛋白以治疗所述疾病。本专利技术提供将核酸递送至哺乳动物的室 管膜细胞中的方法，所述方法包括将包含插入一对AAV反向末端重复之间的核酸的AAV颗 粒给予哺乳动物，从而将核酸递送至哺乳动物的室管膜细胞中。 在某些实施方案中，本专利技术提供将编码保护性ApoE同种型的核酸递送至哺乳动 物的室管膜细胞中的方法，所述方法包括将包含AAV衣壳蛋白和含插入一对AAV反向末端 重复之间的核酸的载体的rAAV颗粒给予室管膜细胞，从而将核酸递送至室管膜细胞中。 在某些实施方案中，本专利技术提供将编码保护性ApoE同种型的核酸递送至哺乳动 物的方法，所述方法包括将包含AAV衣壳蛋白和含插入一对AAV反向末端重复之间的核酸 的载体的rAAV颗粒给予哺乳动物的室管膜细胞，并将室管膜细胞输回给哺乳动物，从而将 所述核酸递送给哺乳动物。 在某些实施方案中，本专利技术提供将编码保护性ApoE同种型的核酸递送到哺乳动 物的室管膜细胞中的方法，所述方法包括将包含AAV衣壳蛋白和含插入一对AAV反向末端 重复之间的核酸的载体的rAAV颗粒给予哺乳动物，从而将核酸递送至哺乳动物的室管膜 细胞中。 在某些实施方案中，本专利技术提供转染哺乳动物脑的室管膜细胞的方法，所述方法 包括以有效感染哺乳动物的室管膜细胞的方式，将包含AAV衣壳蛋白和含编码保护性ApoE 同种型的核酸的载体的rAAV颗粒给予哺乳动物的脑脊液（CSF)，使得室管膜细胞分泌作用 剂进入哺乳动物的CSF中，所述核酸插入一对AAV反向末端重复之间。 在某些实施方案中，哺乳动物是非啮齿类哺乳动物。在某些实施方案中，非啮齿类 哺乳动物是灵长类动物、马、绵羊、山羊、猪或狗。在某些实施方案中，灵长类动物是人。 在某些实施方案中，保护性ApoE同种型与ApoE e 2具有至少约80%同源性。在 某些实施方案中，保护性ApoE同种型与ApoE e 2具有100%同源性。 在某些实施方案中，AAV颗粒是rAAV4颗粒。在某些实施方案中，AAV颗粒是rAAV2 颗粒。在某些实施方案中，rAAV2衣壳与AAV2衣壳蛋白VP1、VP2和/或VP3具有至少80% 同源性。在某些实施方案中，rAAV2衣壳与AAV2衣壳VP1、VP2和/或VP3具有100%同源 性。 在某些实施方案中，本专利技术提供用于转染哺乳动物的室管膜细胞以产生治疗结果 的含有编码保护性ApoE同种型的插入一对AAV反向末端重复之间的核酸的载体的rAAV颗 粒。 在某些实施方案中，本专利技术提供含有包含编码保护性ApoE同种型的插入一对AAV 反向末端重复之间的核酸的载体的rAAV颗粒在制备用于治疗或预防动物（例如人）的阿 尔茨海默病的药物中的用途。 本专利技术提供上述用于医学治疗或诊断的细胞。 本专利技术提供上述细胞在制备用于治疗哺乳动物的阿尔茨海默病的药物中的用途。 在某些实施方案中，本专利技术提供药盒，所述药盒包含含有具有编码保护性ApoE同 种型的插入一对AAV反向末端重复之间的核酸的载体的rAAV颗粒的化合物、容器和说明将 AAV颗粒给予CSF以治疗动物的阿尔茨海默病的包装说明书或标签。 附图简沭 图1A-1B.脑室内注射AAV4-ApoE导致huAPOE的稳定表达和脑中重组huApoE蛋白的 持续检测。 图2. ApoE各同种型的过量表达差异性地影响淀粉样变的进程。 图3.淀粉状蛋白斑的大小随各ApoE同种型而变化。 图4A-4B.淀粉状蛋白负荷的死后评价证实Ap〇E2和Ap〇E4对淀粉状蛋白沉积的 作用。 图5A-5D.各ApoE同种型差本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗哺乳动物的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括以有效感染哺乳动物的室管膜细胞的方式，将包含AAV衣壳蛋白和含编码保护性ApoE同种型蛋白的核酸的载体的rAAV颗粒给予哺乳动物的脑脊液(CSF)，所述核酸插入一对AAV反向末端重复之间，其中所述室管膜细胞分泌ApoE以治疗所述疾病。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：BL戴维森，BT海曼，
申请(专利权)人：衣阿华大学研究基金会，综合医院公司，
类型：发明
国别省市：美国;US