抗S‑腺苷同型半胱氨酸单克隆抗体301、其杂交瘤、组合物、胶体金试纸、试剂盒及用途制造技术

本发明专利技术提供了一种特异性结合S‑腺苷同型半胱氨酸的单克隆抗体301或者其抗原结合部分、产生其的杂交瘤、包含该单克隆抗体301或者其抗原结合部分的组合物或试剂盒，试纸条。与此同时，本发明专利技术还提供了使用上述单克隆抗体301或者其抗原结合部分、其组合物或试剂盒来检测S‑腺苷同型半胱氨酸在样品中的存在或者其水平的非治疗或诊断目的的方法和其用途。该细胞株及其产品第一次使得免疫方法检测生命代谢活动过程中甲基化指数(即S‑腺苷蛋氨酸和S‑腺苷同型半胱氨酸的比值)成为可能。本发明专利技术中获得的抗S‑腺苷同型半胱氨酸单克隆抗体细胞株将有很大的实用性和应用前景。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种特异性结合S-腺苷同型半胱氨酸的单克隆抗体301或者其抗原结合部分、产生其的杂交瘤、包含该单克隆抗体301或者其抗原结合部分的组合物或试剂盒，试纸条。与此同时，本专利技术还提供了使用上述单克隆抗体301或者其抗原结合部分、其组合物或试剂盒来检测S-腺苷同型半胱氨酸在样品中的存在或者其水平的非治疗或诊断目的的方法和其用途。该细胞株及其产品第一次使得免疫方法检测生命代谢活动过程中甲基化指数(即S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸的比值)成为可能。本专利技术中获得的抗S-腺苷同型半胱氨酸单克隆抗体细胞株将有很大的实用性和应用前景。CCTCC C201417820140915【专利说明】抗S-腺苷同型半胱氨酸单克隆抗体301、其杂交瘤、组合 物、胶体金试纸、试剂盒及用途
本专利技术涉及免疫学领域。具体地，本专利技术主要涉及可特异性识别和结合S-腺苷同 型半胱氨酸的单克隆抗体或其功能性片段、其杂交瘤、组合物、试剂盒及用途。
技术介绍
LS-腺苷同型半胱氨酸 蛋氨酸分子含有硫⑶甲基，在与ATP作用生成-腺苷蛋氨酸 (S-AdenosyI-Lnethionine，SAM)后，可通过各种转甲基作用为体内已知的约50多 种具有重要生理活性的物质（DNA，RNA，蛋白，磷脂，激素，神经递质等等）提供甲 基。SAM是这些生命活动中重要生理活性物质甲基化调控中唯一的甲基提供者。S腺 苷蛋氨酸在甲基转移酶作用下将甲基转移至另一物质后，生成S-腺苷同型半胱氨酸 (S-Adenosyl-L-homocysteine, SAH)，后者进一步脱去腺苷，生成同型半胱氨酸（Hcy)。而同 型半胱氨酸则可通过N5甲基四氢叶酸转甲基酶（EC1. I. 1. 68)及其辅酶维生素 B12的催化 作用，接受N5甲基四氢叶酸提供的甲基，重新生成蛋氨酸。而此过程又是已知的体内能利 用N5甲基四氢叶酸的唯一反应。另外，同型半胱氨酸在胱硫醚-β-合成酶（EC4. 2. 1.22) 催化下也可与丝氨酸缩合生成胱硫醚，后者近一步生成半胱氨酸和α酮丁酸。 2.生物体的甲基化指数 生物体中甲基化指数被定义为SAM和SAH的比值。甲基化指数是一个能够客观地 反应人体甲基化程度的指标。从以上可以看出SAH和Hcy是连接提供甲基给生命活性物质 和从甲基四氢叶酸回收甲基给活性甲基供体的SAM之间的重要桥梁。他们含量的高低将 会直接决定或反映一碳代谢和蛋氨酸循环过程正常与否的重要指标。因此，找到准确定量 SAH和Hcy的方法，甚至定量所有参与一碳代谢和蛋氨酸循环的物质的含量，将具有很大的 实际意义。研究表明，SAH升高能导致血管内皮细胞的损伤，且这种作用与整体基因组甲基 化水平有关，SAH可能是动脉粥样硬化形成过程中的潜在生物标志分子。 目前S-腺苷同型半胱氨酸主要的检测方法是高效液相（HPLC)方法，荧光偏振免 疫检测（FPLA)方法以及LC-MS/MS。研发SAH特异性的单克隆抗体从而使免疫检测成为可 能，为测量生物体内的甲基化指数开辟了实际而可行的途径，已有研究表明，甲基化指数能 够比较准确地反映人体内甲基化状态（与生命过程中重要的过程直接相关，涉及到出生， 衰老，癌变，退化等等），而且它与疾病和健康又很大的相关性。因而，本专利技术具有较大的实 用意义。 3.现有技术中的SAH单克隆抗体 在勾宏霞等人发表于2005年的论文（中华检验医学杂志，2005年1月，第28卷 第1期，第92-95页）中指出，通过制备SAH-BSA偶联物和SAH单克隆抗体，建立了同型半 胱氨酸（Hcy)的免疫学测定方法。其中制备的SAH-BSA偶联物的克分子比为3?5,结果显 示SAH单克隆与腺苷、半胱氨酸、蛋氨酸等无交叉反应，但是与S-腺苷蛋氨酸（SAM)存在交 叉反应。据此作者认为其制得了 SAH的单克隆抗体，但是作者也指出该单抗对SAM表现出 一定的交叉反应。该文实际上不是定量SAH，而是定量Hcy的含量。因此，按照此方法，无法 得到生物体的甲基化指数。 除此之外，美国abeam公司有兔抗S-腺苷同型半胱氨酸单克隆抗体出售。该抗体 与类似物（S-腺苷蛋氨酸，腺苷，同型半胱氨酸，半胱氨酸，谷胱甘肽，胱硫醚）的交叉反应 较小。但是该兔抗SAH单抗的检测下限高于260nM，这一检测下限较高，限制了需要高灵敏 高的检测情况。该抗体无法用于测定血浆样品，在竞争性酶联免疫吸附试验中，我们观察到 了非特异性抑制反应，使得该株抗体无法用于EDTA抗凝的血浆样品。因此，这种市售单克 隆抗体由于灵敏度较低的限制和不适用于血浆样品，也不适合用于测量甲基化指数。 4.单克隆抗体技术 动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，选择性表达出不同基因的B淋巴细胞 合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个表达不同 基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量 的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种 专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克 隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。 单克隆抗体技术自从上世纪70年代专利技术以来，技术已经非常成熟。应用于许多领 域，作为有用的检测或治疗工具。用于检测小分子的单克隆抗体，由于小分子的特性不同， 抗体制备有一定的技术难点和特殊性。一般而言，小分子的抗原需要耦联合适的大分子载 体，作为免疫原，才能在动物体内引起足够强的免疫反应，从而产生抗体。 克隆化的细胞可以在体外进行大量培养，收集上清液而获得大量的单一的克隆化 抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培 养液。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的 肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小鼠（无胸腺 的裸鼠），杂交瘤细胞就开始无限地繁殖，直至宿主死亡。产生肿瘤细胞的小鼠腹水和血清 中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，这种抗体的效价往往高于培养细胞上清液的 100 到 1000 倍。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是提供一种特异性更高、灵敏度也更高的单克隆抗体，从而为 SAH的检测提供更好的工具。 在本专利技术中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术 人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织 培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常 规步骤。同时，为了更好地理解本专利技术，下面提供相关术语的定义和解释。 如本文中所使用的，术语"抗体"是指通常由两对相同的多肽链（每对具有一条 "轻"（L)链和一条"重"（H)链）组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为K和λ轻 链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、 IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的"J"区连接， 重链还包含大约3个或更多个氨基酸的"D"区。本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合S‑腺苷同型半胱氨酸的单克隆抗体301或者其抗原结合部分，所述单克隆抗体由杂交瘤细胞株301产生；并且所述的杂交瘤细胞株301产生保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC C2014178，保藏日期为2014年9月15日。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郝秀娟，任会明，肖平，李惠军，甘鸿杰，周雅娴，夏嘉志，郝广钧，
申请(专利权)人：湖南天合生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43