抑制MYD88基因的寡聚核酸及其应用制造技术

本发明专利技术公开了抑制MYD88基因的寡聚核酸，所述寡聚核酸为双链RNA，所述寡聚核酸的碱基组成为：所述寡聚核酸的碱基组成为：包括有(1)含有SEQ.ID NO.12所示的70％以上同源的反义链；(2)含有与(1)所述反义链反向互补配对的寡聚核酸的50％以上序列同源的正义链；且(3)所述正义链和所述反义链经过退火后能形成双链结构。并公开了含有上述寡聚核酸的DNA、载体、组合物及其应用。本发明专利技术提供了一类对MYD88有显著抑制作用的寡聚核酸，该寡聚核酸能在动物实验中实现抑制炎症作用，显著降低多种炎症因子，是一种十分有前景的炎症治疗药物。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了抑制MYD88基因的寡聚核酸，所述寡聚核酸为双链RNA，所述寡聚核酸的碱基组成为：所述寡聚核酸的碱基组成为：包括有(1)含有SEQ.ID NO.12所示的70％以上同源的反义链；(2)含有与(1)所述反义链反向互补配对的寡聚核酸的50％以上序列同源的正义链；且(3)所述正义链和所述反义链经过退火后能形成双链结构。并公开了含有上述寡聚核酸的DNA、载体、组合物及其应用。本专利技术提供了一类对MYD88有显著抑制作用的寡聚核酸，该寡聚核酸能在动物实验中实现抑制炎症作用，显著降低多种炎症因子，是一种十分有前景的炎症治疗药物。【专利说明】抑制MYD88基因的寡聚核酸及其应用
本专利技术属于生物
，具体是涉及一类抑制MYD88基因的寡聚核酸及其应 用。
技术介绍
骨关节炎（OA)是世界上致残的重要原因之一，大约多于10%的老年人有骨关节 炎的症状。风湿性关节炎（RA)是一个慢性炎症疾病，影响着世界上约0.5%到1%的成年 人，通常导致关节损坏并危及生活质量。多种炎性细胞因子如TNF-a、IL-1、IL_6等参与了 RA和OA的发病和进展，其通过激活免疫细胞及诱导金属蛋白酶产生而促进关节破坏、滑膜 炎、血管增生等。 MYD88是一种胞质可溶性蛋白，其由TLRs (TLR3除外）激活，是TLRs信号转导通路 中最主要的接头蛋白。现有研宄显示TLRs在类风湿关节炎发病及进展中发挥重要作用，而 髓样分化因子MYD88作为TLRs通路中的核心蛋白，其在类风湿关节炎发病中的作用也日渐 突出。研宄表明MYD88不但在促进炎性细胞因子过表达中发挥重要作用，也能促进T细胞 增殖和启动先天性免疫应答和适应性免疫应答。 在过去的20多年里，大多数新型治疗方法的研发工作是关于疾病缓解的抗关节 炎药物（DMARDs)和疾病缓解的抗风湿性关节炎的药物（DMOADs)。到目前为止，制药业在研 制有效安全的疾病缓和性药物（DMOADs)上并不成功，致使成千上万的病人仍受到该严重 致残性疾病所带来的痛苦。随着新途径和给药方法的应用，在该治疗领域预期将有更多的 发展，开发出可阻断、逆转疾病过程并缓和疾病的药物。 1998年克雷格?梅洛和安德鲁?法尔发现了基因沉默现象，随后Tuschl和他的同 事在哺乳动物细胞中发现化学合成的19 一 25个碱基的小干扰RNA(siRNA)，可特异高效的 沉默靶mRNA。从此siRNA被广泛用于基因功能研宄，疾病治疗。siRNA可特异的同序列互 补的靶mRNA结合，并使其降解。长片段的双链RNA被Dicer酶切割成21 - 23个碱基长度 短片段RNA。两条链中同靶mRNA结合的链称为反义链，另一条链称为正义链或信使链。体 外化学合成的siRNA进入细胞后同样发挥RNA干扰作用，而且有效降低了长链RNA引起的 免疫反应。但针对同一基因不同片段位置可设计出多种siRNA，沉默效果有明显差异。 在本专利技术中，我们提供一种全新的SiRNA作为关节炎及相关炎症的治疗药物；一 种通过骨关节腔局部注射siRNA及其制剂抑制炎症因子表达的方法，实现了对关节炎及相 关炎症的治疗作用。
技术实现思路
本专利技术目的旨在提供一类抑制MYD88基因表达的寡聚核酸。 实现上述目的的技术方案如下。 一类抑制MYD88基因的寡聚核酸，所述寡聚核酸为双链RNA，所述寡聚核酸的碱基 组成为： 包括有⑴含有SEQ. ID NO. 12组成的70%以上同源的反义链；（2)含有与⑴所 述反义链反向互补配对的寡聚核酸的50%以上序列同源的正义链；且 (3)所述正义链和所述反义链经过退火后能形成双链结构。 在其中一个实施例中，所述寡聚核酸包括有（1)由SEQ. ID NO. 12碱基序列所示的 反义链；（2)含有SEQ. ID NO. 11所示至少50%序列同源构成的正义链；且（3)所述正义链 和所述反义链经过退火后能形成双链结构。 在其中一个实施例中，所述寡聚核酸包括有（1)含有SEQ. ID NO. 12所示至少70% 序列同源构成的反义链；（2)由SEQ. ID NO. 11碱基序列所示的正义链；且（3)所述正义链 和所述反义链经过退火后能形成双链结构。 在其中一个实施例中，所述寡聚核酸包括有（1)含有SEQ. ID NO. 12所示至少70% 序列同源构成的反义链；（2)含有SEQ. ID NO. 11所示至少70%序列同源构成的正义链；且 (3)所述正义链和所述反义链经过退火后能形成双链结构。 在其中一个实施例中，所述寡聚核酸由碱基组成如SEQ. IDNO. 12所示的反义链以 及碱基组成如SEQ. IDNO. 11所示的正义链组成。 在其中一个实施例中，所述寡聚核酸由碱基组成如siRNA-M8-42, siRNA-M8-40， siRNA-M8-41，siRNA-M8-39, siRNA-M8-36, siRNA-M8-28 所示。 本专利技术提供寡聚核酸是双链RNA，其中所述双链RNA中的特征为：反义链含有核苷 酸序列为"3' GCXUCXUCUACCUGAAA⑶5' "如序列表中序列12,或与其具有至少70%以上同 源性的同源序列；正义链含有与反义链反向互补链具有50%同源性以上的核苷酸序列。上 述寡聚核酸可为经过（1)-(4)中任一项或多项修饰得到的寡聚核酸： 1)对所述寡聚核酸的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰，优选将所述磷酸二酯键 的氧用硫取代； 2)对所述寡聚核酸的所含核糖进行修饰，优选将核糖2'-0H用甲氧基或氟取代或 者对所述2' -0H进行脱氧修饰，或以开环核酸（UNA)进行修饰； 3)对所述寡聚核酸的核苷酸碱基的修饰，优选胞嘧啶5位甲基修饰、5-乙炔基尿 嘧啶、吲哚修饰； 4)对所述寡聚核酸末端修饰，优选末端连接胆固醇、多肽、荧光、糖、抗体分子、磷 酸化修饰； 5)本专利技术所述寡聚核酸在3'末端可以添加悬挂碱基，优选悬挂碱基为dT。 本专利技术的另一目的还在于提供一种有抑制MYD88基因表达功能的DNA。 具体技术方案如下。 可表达上述任一种寡聚核酸且具有抑制MYD88基因表达功能的DNA。 本专利技术的另一目的还在于提供一种具有抑制MYD88基因表达功能的载体。 具体技术方案如下。 含有上述任一种寡聚核酸或者上述DNA的载体，所述载体为脂质体、聚合物材 料、多肽、纳米材料。其中脂质体载体材料为本领域常用的阳离子脂质体，优选转染试剂 lipo2000 ;聚合物载体材料优选透明质酸或聚赖氨酸；多肽材料优选RGD，或含RGD序列的 多肽；纳米材料优选为壳聚糖纳米粒。 本专利技术的另一目的还在于提供一种具有抑制MYD88基因表达功能的组合物。具体 技术方案如下。 一种具有抑制MYD88基因表达功能的组合物，含有上述任一种寡聚核酸或者上述 DNA，以及药学上可接受的载体。 本专利技术的另一目的还在于提供上述寡聚核酸、DNA、载体或者组合物的应用。 具体技术方案如下。 上述寡聚核酸、DNA、载体或者组合物在制备调节细胞中MYD88基因表达制品中的 应用。 上述寡聚核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
抑制MYD88基因的寡聚核酸，所述寡聚核酸为双链RNA，其特征是，所述寡聚核酸的碱基组成为：包括有(1)含有SEQ.ID NO.12所示的70％以上同源的反义链；(2)含有与(1)所述反义链反向互补配对的寡聚核酸的50％以上序列同源的正义链；且(3)所述正义链和所述反义链经过退火后能形成双链结构。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张必良，杨秀群，王玮，
申请(专利权)人：广州爱格生物医药有限公司，广州市锐博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44