利用基因型检测强直性脊柱炎易感性的方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种利用基因型检测强直性脊柱炎易感性的方法和试剂盒，其中，检测强直性脊柱炎易感性的方法包括：检测该个体的PSMB1基因、转录本和/或蛋白，并与正常的PSMB1基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患强直性脊柱炎的可能性高于正常人群；该试剂盒包括：特异性扩增PSMB1基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为100-2000bp且含有SEQ ID NO.1中第618位的扩增产物。本发明专利技术可用于早期辅助性诊断强直性脊柱炎，而且可使一些携带者在未发病前就采取合理的预防措施，从而提高携带者的生存期和生存质量，具有极其重大的应用价值和社会效益。

【技术实现步骤摘要】
利用基因型检测强直性脊柱炎易感性的方法和试剂盒
本专利技术涉及一种检测强直性脊柱炎易感性的方法和试剂盒，特别是涉及一种利用 基因型检测强直性脊柱炎易感性的方法和试剂盒。
技术介绍
强直性脊柱炎又名别赫捷列夫氏（VonBechterev)病或马-施二氏 (Maritstrumpell)病，是一种慢性、进行性，中轴关节受累的慢性炎症性疾病。主要影响 骨盆的骶髂关节、脊柱关节和椎旁组织。主要症状为下腰痛、脊椎僵硬及运动范围受限、 X线显示两侧骶髂关节炎（sacroilitis)为其特征。由于该病一般先侵犯骶髂关节，并重 点累及脊柱，最终导致脊柱骨性强直，故目前国内外多称之为强直性脊柱炎（Ankglosing Spondytitis, AS)〇 强直性脊柱炎有明显的种族性，在不同民族中发病率的差异很大。印第安人发病 率最高，北美印第安人发病率为2. 7%?6. 3%。其次为白种人，白种人中发病率为0. 1%? 1.4%。黄种人低于白种人，我国约为0.3%。而黑人发病率最低，约为白人的1/4,在非洲 仅为0. 2 %。 强直性脊柱炎好发于20至40岁的成年人，尤其是20?30岁的青年男性。 强直性脊柱炎呈常染色体显性遗传，有明显的家族遗传倾向，遗传因素 >90%。据 调查，强直性脊柱炎病人亲属发病率比一般人高一倍左右，同胞复发风险比为82. 90%以上 的AS病人具有HLA-B27阳性，在正常人群中阳性率为8%;子女HLA-B27阳性占 50%，发生 强直性脊柱炎的占 25%。目前基本上已有定论，HLA-B27作为独立的致病基因在AS的发病 中起作用。因为在HLA-B27阳性个体中只有1 %?5%发展成为AS，提示还有其他基因参与 AS的发病。 PSMBl基因位于6q27,大小约为22Kbp，其编码的产物属于蛋白酶体B型家族，是 一种泛素-蛋白酶复合物中的20S核心β-亚单位。蛋白酶体是一种存在于胞质和胞核内 的蛋白水解酶复合物，负责降解细胞内大部分蛋白质，在MHC I类分子包括HLA-B27分子的 表达及相关抗原呈递过程中起关键作用。MHC I类分子呈递的抗原均来源于蛋白酶体的降 解产物。蛋白酶体的功能受其结构组成的调控，其核心部分是由α和β亚单位组成的四 环状圆柱形结构，与ΡΑ28结合后成为免疫蛋白酶体。PSMBl是β环中重要的结构亚单位。 β环的改变会影响到降解蛋白质的速度及切割位点，以及内源性蛋白质的降解和抗原的呈 递。PSMBl基因的多态性影响着免疫蛋白酶体与待降解目标蛋白的结合情况，引起降解内源 性蛋白质产生的抗原肽的数量和性质发生改变，其中可能包括能诱导AS发生的特异性抗 原肽。有研究发现PSMBl基因与另一种自身免疫性疾病I型糖尿病的发生有关（J Autoim mun. 2005May;24(3):243-50)〇
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种利用基因型检测强直性脊柱炎易感性的方 法和试剂盒，为辅助诊断(尤其是早期诊断）强直性脊柱炎和治疗强直性脊柱炎提供基础。 在本专利技术的第一方面，提供了一种对个体的利用基因型检测强直性脊柱炎易感性 的方法的方法，包括步骤： 检测该个体的PSMBl基因、转录本和/或蛋白，并与正常的PSMBl基因、转录本和 /或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患强直性脊柱炎的可能性高于正常人群。 在另一优选例中，所述的方法中检测的是PSMBl的基因或转录本，并与正常PSMBl 核苷酸序列比较差异。 在另一优选例中，所述的差异是以下的单核苷酸多态性（SNP): 第618位的基因型CC ;其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO. 1。 在本专利技术的第二方面，提供了一种检测样品是否存在PSMBl基因的单核苷酸多态 性的方法，包括步骤： 1)用PSMBl基因特异性引物扩增样品的PSMBl基因，得到扩增产物； 2)检测扩增产物中是否存在以下的单核苷酸多态性： 第618位的G/C多态(尤其是基因型CC);其中，核苷酸位置编号基于SEQ ID NO. 1。 在另一优选例中，所述PSMBl基因特异性引物具有SEQ ID NO. 2和3的序列。 在另一优选例中，所述的扩增产物的长度为100_2000bp，且含有SEQ ID NO. 1中第 618 位。 在本专利技术的第三方面，提供了一种利用基因型检测强直性脊柱炎(强直性脊柱炎 易感性）的试剂盒，其包括：特异性扩增PSMBl基因或转录本的引物，更佳地，所述的引物扩 增出长度为100_2000bp且含有SEQ ID NO. 1中第618位的扩增产物。 在另一优选例中，所述试剂盒还含有选自下组的试剂： 1)与SEQ ID NO. 1中第618位的G/C多态相结合的探针； 2)识别SEQ ID NO. 1中第618位的G/C多态的限制性内切酶。 在另一优选例中，所述第618位的G/C多态是G/C多态中的基因型CC。 所述引物的序列，可如SEQ ID NO. 2和3所示。 所述扩增产物的长度为100_2000bp且含有SEQ ID NO. 1中第618位。 本专利技术经过深入而广泛的研究，对大量候选基因的SNP进行了测定和分析。发现 和证明了 PSMBl的基因组序列与强直性脊柱炎密切相关，其中关联研究结果显示，在PSMBl 基因的SEQ ID NO. 1中第618位的SNP (第618位的基因型CC)在对照组和病例组中的分 布存在显著性差异（P < 0. 05)，因此，可作为辅助性检测强直性脊柱炎(或其易感性）的特 异性SNP。在此基础上完成了本专利技术。 本专利技术对PSMBl基因中的几乎整个区域进行了测序，关联研究表明SEQ ID NO. 1 中第618位的基因型CC是与强直性脊柱炎易感性关联性非常高的SNP。 具体而言，本专利技术揭示了 PSMBl基因一种单核苷酸多态性（SNP)以及该多态性与 强直性脊柱炎的相关性。本专利技术的SNP是SEQ ID NO. 1所示序列的第618位的G/C多态， 基因型CC在强直性脊柱炎病人群中的频率，要高于在正常对照人群中的频率。 基于本专利技术的新发现，PSMBl蛋白或多肽有多方面的新用途。这些用途包括：用于 辅助性诊断强直性脊柱炎。 另一方面，本专利技术还包括对人PSMBl基因 DNA或是其片段编码的多肽具有特异 性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，特异性是指抗体能结合于人 PSMBl基因产物或片段。较佳地，指那些能与人PSMBl基因产物或片段结合但不识别和结合 于其它非相关抗原分子的抗体。本专利技术中抗体包括那些能够结合并抑制人PSMBl蛋白的分 子，也包括那些并不影响人PSMBl蛋白功能的抗体。 本专利技术不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片 段，如Fab'或（Fab) 2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子；或嵌合抗 体。 本专利技术的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化 的人PSMBl基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产 生。与之相似的，表达人本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用基因型检测强直性脊柱炎的试剂盒，其特征在于，包括：特异性扩增PSMB1基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为100‑2000bp且含有SEQ ID NO.1中第618位的扩增产物。

【技术特征摘要】
1. 一种利用基因型检测强直性脊柱炎的试剂盒，其特征在于，包括：特异性扩增PSMB1 基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为100_2000bp且含有SEQ ID NO. 1中第618 位的扩增产物。2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有选自下组的试剂： 1) 与SEQ ID NO. 1中第618位的G/C多态相结合的探针； 2) 识别SEQ ID NO....

【专利技术属性】
技术研发人员：黄薇，牛振民，
申请(专利权)人：上海人类基因组研究中心，
类型：发明
国别省市：上海;31