用于分析和测定在卫康醇中杂质的改良分析方法技术

一种用于卫康醇制备物分析的改良分析方法，提供用于测定卫康醇纯度并侦测卫康醇制备物中杂质的方法，以及辨识任何此等杂质。所述方法采用高效液相色谱法(HPLC)，特别是，具有折射率(RI)侦测的高效液相色谱法，所述高效液相色谱法之后可进行串联质谱法。所述方法还可包括执行存在于卫康醇制备物中的至少一特定物质波峰的制备性高效液相色谱法的收集的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案此案主张美国临时专利申请案第61/603,464号的优先权，命名为″用于分析和测定在卫康醇中杂质的改良分析方法″，由Xiaoyun Lu提交，于2012年2月27日申請，其内容通过引用的方式幷入本文整体中。
本专利技术关于多个卫康醇的改良分析方法，特别是涉及高效液相色谱法(HPLC)。
技术介绍
卫康醇(1，2：5，6dianhydrogalactitol或DAG)是多种己糖醇或己糖醇衍生物之一，其具有显著药理活性，包括化学治疗(chemotherapy)活性。特别是卫康醇已被建议用于化学治疗(chemotherapy)，如在美国专利第7,157,059号，Nielsen等人所著，并通过引用幷入本文。卫康醇具有抗多种肿瘤的活性。然而，如果卫康醇被成功地用作治疗剂，具有极高纯度并且去除杂质则是必需的。杂质的存在可能会导致非预期的副作用。一个发生在许多年前的例子，当时存在于一批色氨酸(tyrosine)氨基酸(其为一种蛋白质的正常组成分)的杂质引起一种嗜酸粒细胞增多-肌痛综合征(eosinophilia-myalgia syndrome)的剧烈爆发，造成了大量的永久性残疾的病例及至少37人死亡。如果治疗剂(例如卫康醇)是用在免疫系统受损或肝或肾功能障碍的患者、或老年患者，这会是尤其重要。由于这类患者对污染物的敏感性，他们可能遇到更高的不良副作用发生率。一种发现在卫康醇制备物中的杂质是半乳糖醇(dulcitol)。其他存在卫康醇制物的杂质醇取决于其制备方法。因此，需要一种改良的分析方法以检测卫康醇制剂物中的杂质和降解产物，以提供更高的纯度，使得当卫康醇被施用于治疗目的时，有较低的机会引发副作用。
技术实现思路
一种用于测定卫康醇纯度幷侦测在卫康醇制备物中杂质和降解产物的改良分析方法，其符合本文所述的需求。一般而言，这种分析方法采用高效液相色谱法(HPLC)，尤指具有折射率指数(RI)侦测的HPLC。在一取代方案中，一种用于分析在卫康醇制备物中杂质存在和量的分析方法，其特征在于：所述分析方法包括以下步骤：(1)通过运用高效液相色谱法于卫康醇的一制备物，利用流动相梯度洗提，使卫康醇与所述制备物的半乳糖醇及其他杂质分离，从而分析卫康醇的所述制备物；以及(2)测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度。所述非卫康醇本身的化合物是：(1)半乳糖醇；(2)非半乳糖醇的杂质；和(3)卫康醇的降解产物中的至少一个。在所述方法的一取代方案中，以约2.5毫摩尔至约0.1毫摩尔的氢氧化纳的梯度进行洗提。优选地，以约1.5毫摩尔至约0.1毫摩尔的氢氧化纳的梯度进行洗提。更优选地，以约1毫摩尔至约0.1毫摩尔的氢氧化纳的梯度进行洗提。在所述方法的另一取代方案中，以氢氧化铵和一挥发性铵盐的结合物的梯度进行洗提，所述挥发性胺盐选自于甲酸铵和乙酸铵和氢氧化铵所组成的一群组，幷且甲酸铵和乙酸铵的总浓度为约2.5毫摩尔至约0.1毫摩尔。优选地，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1.5毫摩尔至约1.0毫摩尔。更优选地，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1毫摩尔至约0.1毫摩尔。通常而言，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的比例是从洗提开始时的约100∶1变化至洗提结束时的约1∶100。通常而言，所述测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度的步骤是通过挥发性光散射侦测而执行。通常而言，所述挥发性光散射侦测与电喷雾液相色谱/质谱分析法(LC/MS)相容。通常而言，所述挥发性光散射侦测包括一挥发性溶剂的柱后添加，以提高100％水性流动相的蒸发。通常而言，所述挥发性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈所组成的群组。在另一取代方案中，一电喷雾串联质谱仪安装幷线上连接至一具有挥发性光散射侦测的高效液相色谱系统。通常而言，收集质谱数据，其提供可能存在于卫康醇的制备物中的各个杂质和降解产物的化学物质信息。此外通常而言，收集串联质谱数据，其提供可能存在于卫康醇的制备物中的各个杂质和降解产物的化学物质信息。所述方法还包括以下步骤：执行存在于卫康醇制备物中的至少一特定物质波峰的制备性高效液相色谱法的收集。存在于卫康醇制备物中的至少一物质波峰为一杂质。在另一取代方案中，一种用于分析在卫康醇制备物中杂质存在和量的分析方法，其特征在于：所述分析方法包括以下步骤：(1)通过运用高效液相色谱法于卫康醇的一制备物，利用等梯度流动相洗提，使卫康醇与所述制备物的半乳糖醇及其他杂质分离，从而分析卫康醇的所述制备物；以及(2)测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度。在一取代方案中，当以等梯度洗提时，所述等梯度流动相为氢氧化钠，且氢氧化钠的浓度为约5毫摩尔至约0.1毫摩尔。优选地，氢氧化钠的浓度为约2.5毫摩尔至约0.1毫摩尔。更优选地，氢氧化钠的浓度为约1毫摩尔。在另一取代方案中，当以等梯度洗提时，所述等梯度流动相为氢氧化铵和一挥发性铵盐的结合物，所述挥发性胺盐选自于甲酸铵和乙酸铵和氢氧化铵所组成的一群组，幷且氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约5毫摩尔至约0.1毫摩尔。优选地，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约2.5毫摩尔至约1.0毫摩尔。更优选地，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1毫摩尔。通常而言，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的比例是约50∶50。通常而言，在一取代方案中，所述测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度的步骤是通过挥发性光散射侦测(ELSD)而执行。通常而言，所述挥发性光散射侦测与电喷雾液相色谱/质谱分析法(LC/MS)相容。通常而言，所述挥发性光散射侦测包括一挥发性溶剂的柱后添加，以提高100％水性流动相的蒸发。通常而言，所述挥发性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈所组成的群组。在此取代方案中，一电喷雾串联质谱仪安装幷线上连接至一具有挥发性光散射侦测的高效液相色谱系统。通常而言，收集质谱数据，其提供可能存在于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于分析在卫康醇制备物中杂质存在和量的分析方法，其特征在于：所述分析方法包括以下步骤：(a)通过运用高效液相色谱法于卫康醇的一制备物，利用流动相梯度洗提，使卫康醇与所述制备物的半乳糖醇及其他杂质分离，从而分析卫康醇的所述制备物；以及(b)测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.02.27 US 61/603,4641.一种用于分析在卫康醇制备物中杂质存在和量的分析方法，其特征在于：
所述分析方法包括以下步骤：
(a)通过运用高效液相色谱法于卫康醇的一制备物，利用流动相梯度洗提，
使卫康醇与所述制备物的半乳糖醇及其他杂质分离，从而分析卫康醇的
所述制备物；以及
(b)测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一
或多个波峰的相对浓度。
2.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述非卫康醇本身的化合物
是：(1)半乳糖醇；(2)非半乳糖醇的杂质；和(3)卫康醇的降解产物中
的至少一个。
3.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：以约2.5毫摩尔至约0.1毫
摩尔的氢氧化纳的梯度进行洗提。
4.如权利要求3所述的分析方法，其特征在于：以约1.5毫摩尔至约0.1毫
摩尔的氢氧化纳的梯度进行洗提。
5.如权利要求4所述的分析方法，其特征在于：以约1毫摩尔至约0.1毫摩
尔的氢氧化纳的梯度进行洗提。
6.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：以氢氧化铵和一挥发性铵盐
的结合物的梯度进行洗提，所述挥发性胺盐选自于甲酸铵和乙酸铵和氢氧
化铵所组成的一群组，幷且氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的
一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约2.5毫摩尔至约0.1毫摩尔。
7.如权利要求6所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和
乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1.5毫摩尔至约
1.0毫摩尔。
8.如权利要求7所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和

\t乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1.0毫摩尔至约
0.1毫摩尔。
9.如权利要求4所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和
乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的比例是从洗提开始时的约
100∶1变化至洗提结束时的约1∶100。
10.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述测定由高效液相色谱法
解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度的
步骤是通过挥发性光散射侦测而执行。
11.如权利要求10所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性光散射侦测与
电喷雾液相色谱/质谱分析法相容。
12.如权利要求10所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性光散射侦测包
括一挥发性溶剂的柱后添加，以提高100％水性流动相的蒸发。
13.如权利要求12所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性溶剂选自甲醇、
乙醇、异丙醇和乙腈所组成的群组。
14.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：一电喷雾串联质谱仪安装幷
线上连接至一具有挥发性光散射侦测的高效液相色谱系统。
15.如权利要求14所述的分析方法，其特征在于：收集串联质谱数据，其提
供可能存在于卫康醇的制备物中的各个杂质和降解产物的化学物质信息。
16.如权利要求15所述的分析方法，其特征在于：与高效液相色谱法串连的
质谱分析提供各个所观察到的杂质和降解产物的分子离子信息以及具有
与分子离子信息一致的分子量的可能化学结构。
17.如权利要求15所述的分析方法，其特征在于：至少一种杂质或降解产物
通过柱色谱法的分离而鉴定，随后通过至少一纯化步骤，以产出一固态未
知样品。
18.如权利要求17所述的分析方法，其特征在于：所述的固态未知样品通过

\t至少一种标准的分析方法而辨识，其选自于由核磁共振(NMR)、质谱法
(MS)、傅立叶变换红外光谱法(FT-IR)、元素分析、通过高效液相色谱
法测定纯度和卡尔费休滴定法测定水含量所组成的一群组。
19.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：还包括以下步骤：执行存在
于卫康醇制备物中的至少一特定物质波峰的制备性高效液相色谱法的收
集。
20.如权利要求19所述的分析方法，其特征在于：存在于卫康醇制备物中的
至少一物质波峰为一杂质。
21.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：盧暁云，
申请(专利权)人：德马医药，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA