【技术实现步骤摘要】
-种强化解脂亚洛酵母合成a-鋼戊二酸的方法
本专利技术涉及一种强化解脂亚洛酵母合成a -丽戊二酸的方法，尤其是一种通过调 节细胞内氨基酸代谢强化a -丽戊二酸合成的方法，属于代谢工程领域。
技术介绍
a -丽戊二酸作为微生物细胞内H駿酸循环（TCA)途径中重要中间产物之一，参 与微生物细胞的多种代谢活动。不仅是H駿酸循环中的关键节点，在生物体内参与氨基酸、 蛋白质、维生素的合成W及能量代谢，与H駿酸循环中其他代谢中间产物相比，a-丽戊二 酸在微生物细胞内代谢积累受到多种调控作用。因此，掲示a-丽戊二酸在微生物细胞内 代谢积累及调控机制具有重要的研究意义，并对强化细胞内其他H駿酸循环中代谢产物积 累具有指导意义。a-丽戊二酸是重要的化工合成中间体，在氨基酸、维生素和其它小分子 物质合成，在医药、有机合成、营养强化剂等领域都有着重要的应用前景。传统化学合成法 生产该有机酸因合成线路长，反应过程复杂，而且利用氯化物等对人体有毒害化合物阻止 了化学合成法生产的a-丽戊二酸在医药和食品等高附加值产品中的应用。利用微生物法 发酵生产a -丽戊二酸不...
【技术保护点】
一种α‑酮戊二酸合成强化的重组解脂亚洛酵母，其特征在于，是在解脂亚洛酵母中过量表达谷氨酸脱氢酶，强化谷氨酸供应。
【技术特征摘要】
1. 一种a-酮戊二酸合成强化的重组解脂亚洛酵母，其特征在于，是在解脂亚洛酵母 中过量表达谷氨酸脱氢酶，强化谷氨酸供应。2. 根据权利要求1所述的重组解脂亚洛酵母，其特征在于，编码所述谷氨酸脱氢酶的 基因来源于酿酒酵母。3. 根据权利要求1或2所述的重组解脂亚洛酵母，其特征在于，以解脂亚洛酵母为出发 菌株，以含有潮霉素转磷酸移酶为筛选标记的整合型表达载体P〇为表达载体，表达核苷酸 序列如SEQ ID NO. 2所不的基因。4. 一种强化解脂亚洛酵母合成a-酮戊二酸的方法，其特征在于，通过在解脂亚洛酵 母中过量表达谷氨酸脱氢酶，强化谷氨酸脱氢酶活力，强化谷氨酸供应、增强a -酮戊二酸 积累。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在解脂亚洛酵母发酵产a-酮戊二酸过程 中外源添加谷氨酰胺合成酶抑制剂L-蛋氨酸亚胺，降低细胞内谷氨酸分解代谢。6. -种构建权利要求1所述重组解脂亚洛酵母的方法，主要包括以下步骤：（1)构建表 达目的基因所用的整合型表达载体：扩增潮霉素磷酸转移酶hph基因，hph基因的核苷酸序 列如SEQ ID NO. 1所示，利用限制性内切酶Stu I与Hind III同时处理扩增得到的hph基 因和pO质粒，并连接两酶切产物得到含有潮霉素转磷酸移酶为筛选标记的整合型表达载 体pO (hph) ; (2)构建重组整合型表达质粒：全化学合成编码谷氨酸脱氢酶的编码基因 GDH2 的开放阅读框序列，利用限...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，周景文，郭洪伟，曾伟主，堵国成，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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