一种鸭瘟组织灭活苗、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种鸭瘟组织灭活苗、制备方法及其应用，其制备方法包括采集样品，通过继代感染保存毒株，配制PBS缓冲液，加入甲醛溶液处理。本发明专利技术方法制备的鸭瘟组织灭活苗具有制备方法简单，使用操作方便，免疫效率高，保存时间长等特点，适用于规模化批量生产和应用。

【技术实现步骤摘要】
—种鸭瘟组织灭活苗、制备方法及应用
本专利技术涉及动物组织灭活苗的制备方法，特别是鸭瘟组织灭活苗的制备方法。
技术介绍
鸭瘟(Duck Plague)是由一种疱疹病毒引起的鸭急性、热性、败血性传染病，感染各种不同年龄的游禽(如鹅、鸭、天鹅等)。具有流行广泛，传播迅速，发病率和死亡率高等特点。鸭子感染鸭瘟后表现的病理症状有:出血管损伤导至组织出血，体腔溢血，消化道粘膜坏死性病变，淋巴器管受损以及实质器管的退行性变化等。组织灭活苗和疫苗是鸭饲养行业中常用的生物制剂。目前，使用鸭瘟冻干疫苗来避免大规模鸭瘟的流行，具有免疫效果不理想，接种后保护率低等问题，因此提供一种高效的鸭瘟组织灭活苗的制备方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是:鉴于目前所使用的冻干疫苗具有免疫效果不理想的问题，提供一种高效的鸭瘟组织灭活苗的制备方法，从而为发展鸭用组织灭活苗开辟新的有效途径。 本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下:一种鸭瘟组织灭活苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: I)样品采集: 将患有鸭瘟的鸭子消毒处理，采集病变组织(心脏、肝脏、肺部、肾脏等组织器官)，置于灭菌缸；将所述病变组织，分成两份，一份用于直接制备鸭瘟组织灭活苗，一份冷冻保存； 2)通过继代感染保存毒株: 将步骤I)所述冷冻保存的病变组织取出解冻后，将其制备成组织过滤浆液，所述组织过滤浆液接种至健康的鸭子使其感染鸭瘟，采集病变组织(心脏、肝脏、肺部、肾脏等组织器官)，冷冻保存； 3)称取步骤I)所述用于直接制备鸭瘟组织灭活苗的病变组织或步骤2)所述冷冻保存的病变组织，捣烂，收集组织浆液； 4)配制PBS缓冲液，包括以下步骤: 称取170g分析纯氯化钠置于烧杯中，加入适量去离子水或蒸馏水溶解，加入13.6g分析纯磷酸二氢钾,3.0g分析纯氢氧化钠,不断搅拌直至全部溶解,转移至100ml的容量瓶中，定容至1000ml，将定容后的溶液分装到高温瓶(插上针头)中用高压灭菌锅进行高压菌处理，所述高温灭菌条件为0.15mpa保温30min，待溶液冷却后，置于5°C保存，使用时将所述溶液稀释20倍，即为PBS缓冲液；所述PBS缓冲液含有8.5g/L氯化钠、0.68g/L磷酸二氢钾、0.15g/L氢氧化钠； 5)向步骤3)所述组织浆液中加入步骤4)配制的900ml PBS缓冲液，混合均匀，30001-/111111,离心 2111111，收集上清液； 6)向步骤5)所述上清液中加入1001质量分数36%的甲醛溶液，加入？83缓冲液，使终体积为100001，得到混合均匀的溶液；甲醛占所述混合均匀的溶液的质量的1% ； 7)将所述制备好的溶液分装，贴标签，51保存。 本专利技术所述的冷冻温度为01至-51。 本专利技术的有益效果是:制备方法简单，短时间内可制备完；使用操作方便，使用时取出组织灭活苗注射即可；适于规模化批量生产和应用；免疫效率高，接种后保护率可至100%；保质期长(可达12个月)；组织灭活苗的病毒株可以通过本专利技术的制备方法长期保存，循环利用。 【具体实施方式】 以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。 本专利技术提供的一种高效的鸭瘟组织灭活苗的制备方法，包括以下步骤: 1)样品采集: 将患有鸭瘟的鸭子消毒处理，采集病变组织(心脏、肝脏、肺部、肾脏等组织器官)，置于灭菌缸；将所述病变组织，分成两份，一份用于直接制备鸭瘟组织灭活苗，一份冷冻保存； 2)通过继代感染保存毒株: 将步骤1)所述冷冻保存的病变组织取出解冻后，将其制备成组织过滤浆液，所述组织过滤浆液接种至健康的鸭子使其感染鸭瘟，采集病变组织(心脏、肝脏、肺部、肾脏等组织器官)，冷冻保存； 3)称取步骤1)所述用于直接制备鸭瘟组织灭活苗的病变组织或步骤2)所述冷冻保存的病变组织，捣烂，收集组织浆液； 4)配制？83缓冲液，包括以下步骤: 称取1708分析纯氯化钠置于烧杯中，加入适量去离子水或蒸馏水溶解，加入 13.68分析纯磷酸二氢钾，3.08分析纯氢氧化钠，不断搅拌直至全部溶解，转移到10001111的容量瓶，定容至10001111，将定容后的溶液分装到高温瓶(插上针头)中用高压灭菌锅进行高压菌处理，所述高温灭菌条件为0.15,21保温30111111，待溶液冷却后，置于51保存，使用时将所述溶液稀释20倍，即为？83缓冲液；所述？83缓冲液含有8.5^/1氯化钠、0.68^/1磷酸二氢钾、0.158/1氢氧化钠； 5)向步骤3)所述组织浆液中加入步骤4)配制的90001 ？88缓冲液，混合均匀，30001-/111111,离心 2111111，收集上清液； 6)向步骤5)所述上清液中加入1001质量分数36%的甲醛溶液，加入？83缓冲液，使终体积为100001，得到混合均匀的溶液；甲醛质量占所述混合均匀的溶液的质量的1% ； 7)将所述制备好的溶液分装，贴标签，51保存。 本专利技术所涉及的高效制备鸭瘟组织灭活苗的方法获得的鸭瘟组织灭活苗不仅限用于鸭子对鸭瘟病毒的免疫，也适用于其他禽类(如鹅、天鹅等)对鸭瘟病毒的免疫。 下面结合实施例对上述制备方法进一步说明。 实施例 贵州省凯里市某养鸭场于2010年5月至7月养骡鸭1000羽，15日龄时接种鸭瘟冻干疫苗，25日龄时爆发鸭瘟，5天内共死亡896羽，死亡率90%。 专利技术人收集上述因患有鸭瘟已死亡的鸭子，利用常规的方法进行消毒处理，采集病变严重的肝脏和肺部，置于灭菌缸；一部分病变组织用于直接制备鸭瘟组织灭活苗，一部分病变组织置于冰箱中冷冻保存，用于保存毒株。 称取200g病变组织，用捣浆机将其捣烂，收集组织浆液置于200ml的烧杯中。 采取以下步骤配制PBS缓冲液: 称取170g分析纯氯化钠置于烧杯中，加入适量去离子水或蒸馏水溶解，加入13.6g分析纯磷酸二氢钾,3.0g分析纯氢氧化钠,不断搅拌直至全部溶解,转移到100ml的容量瓶，定容至1000ml，将定容后的溶液分装到高温瓶(插上针头)中用高压灭菌锅进行高压菌处理，使用的高温灭菌条件为0.15mpa保温30min，待溶液冷却后，置于5°C保存，使用时将所述溶液用水稀释20倍，即为PBS缓冲液。 向收集的组织浆液中加入配制的PBS缓冲液900ml，充分混合均匀后置于沉降式实验离心机离心管内，将离心管对称放入离心机的套管中，把离心机的转速调至3000r/min，离心2min，收集上清液置于100ml的容量瓶中，加入1ml质量分数36%的甲醛溶液，加入PBS缓冲液，使终体积为1000ml，混合均匀，溶液中甲醛的质量分数为1%。将制备好的溶液分装，贴标签，5°C保存，可以保存12个月。每年每批鸭在20-25日龄时用本专利技术制备的鸭瘟组织灭活苗进行免疫接种。组织苗在使用时按照每1000只份的剂量加入80万单位青霉素和100万单位链霉素的比例使用，混匀溶解后,每羽肌肉注射0.5ml。 由于鸭瘟组织灭活苗超过保存期后免疫效率降低，所以需要通过继代感染将毒株保存。具体方法是将采集到的病变组织，除了用于制取组织灭活苗外，剩于的部分用灭菌袋装好贴上标签放入冰箱冷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸭瘟组织灭活苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采集样品：将患有鸭瘟的鸭子消毒处理，采集病变组织置于灭菌缸；将所述病变组织，分成两份，一份用于直接制备鸭瘟组织灭活苗，一份冷冻保存；2)通过继代感染保存毒株：将步骤1)所述冷冻保存的病变组织取出解冻后，将其制备成组织过滤浆液，所述组织过滤浆液接种至健康的鸭子使其感染鸭瘟，采集感染鸭瘟鸭子的病变组织，冷冻保存；3)称取步骤1)所述用于直接制备鸭瘟组织灭活苗的病变组织或步骤2)所述冷冻保存的病变组织，捣烂，收集组织浆液；4)配制PBS缓冲液；5)向步骤3)所述组织浆液中加入步骤4)配制的PBS缓冲液，混合均匀，离心，收集上清液；6)向步骤5)所述上清液中加入甲醛溶液和PBS缓冲液，混合均匀；7)将所述制备好的溶液分装，贴标签，冷藏保存。

【技术特征摘要】
1.一种鸭瘟组织灭活苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)米集样品: 将患有鸭瘟的鸭子消毒处理，采集病变组织置于灭菌缸；将所述病变组织，分成两份，一份用于直接制备鸭瘟组织灭活苗，一份冷冻保存； 2)通过继代感染保存毒株: 将步骤1)所述冷冻保存的病变组织取出解冻后，将其制备成组织过滤浆液，所述组织过滤浆液接种至健康的鸭子使其感染鸭瘟，采集感染鸭瘟鸭子的病变组织，冷冻保存； 3)称取步骤1)所述用于直接制备鸭瘟组织灭活苗的病变组织或步骤2)所述冷冻保存的病变组织，捣烂，收集组织浆液； 4)配制PBS缓冲液； 5)向步骤3)所述组织浆液中加入步骤4)配制的PBS缓冲液，混合均匀，离心，收集上清液； 6)向步骤5)所述上清液中加入甲醛溶液和PBS缓冲液，混合均匀； 7)将所述制备好的溶液分装，贴标签，冷藏保存。2.根据权利要求1所述一种鸭瘟组织灭活苗的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述病变组织选自感染鸭瘟的鸭子的心脏、肝脏、肺部、肾脏中的一种或几种。3.根据权利要求1所述一种鸭瘟组织灭活苗的制备方法，其特征在于，步骤4)中，所述配制PBS缓冲液，包括以下步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：龙明珠，杨茂生，
申请(专利权)人：龙明珠，
类型：发明
国别省市：贵州;52