一种蝶豆的组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种蝶豆的组织培养方法，该方法包括以下步骤：种子无菌萌发、初代培养、愈伤组织分化、生根培养和炼苗移栽。本发明专利技术的方法用于蝶豆的组织培养，具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，移栽成活率高的优点。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，该方法包括以下步骤：种子无菌萌发、初代培养、愈伤组织分化、生根培养和炼苗移栽。本专利技术的方法用于蝶豆的组织培养，具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，移栽成活率高的优点。【专利说明】
本专利技术涉及植物组织培养
，具体的是。
技术介绍
蝶豆(Clitoria ternatea L.)，又名蓝蝴蝶，蓝花豆，蝴蝶花豆，系蝶形花科(Papil1naceae)蝶豆属(Clitoria)植物,原产印度、印度尼西亚等地,在世界热带和亚热带地区广泛栽培。蝶豆具有广泛的经济价值，花可提取天然染料；嫩夹可食用；根可入药；此外，蝶豆还可调制成干草，用作饲料，尤其是近年来蝶豆作为庭园观赏植物，广泛用于园林植物造景配置中。 目前关于蝶豆的研究极少，国内的研究领域主要涉及一些特性的简单描述，以及种子萌发和栽培技术的研究。蝶豆种子的发芽率普遍较低，采用常规的种子繁殖方法速度慢。组织培养技术具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，能保持原有品种的优良性状，不受季节的限制等优点，已广泛应用各种观赏植物中，目前尚未见有应用于蝶豆上。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，解决了蝶豆因种子发芽率较低而繁殖速度慢的问题。本专利技术的方法用于蝶豆快速繁殖，具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，移栽成活率高的优点。 本专利技术所提供的技术方案是: ，其特征在于，该方法包括以下步骤: (I)种子无菌萌发:选用饱满的蝶豆种子，经自来水冲洗、酒精灭菌、无菌水冲洗、升汞灭菌、无菌水冲洗和催芽处理，然后播种，种子萌发出小苗； (2)初代培养；将种子萌发后小苗的下胚轴切成长为5-10mm的小段，然后接种在改良MS培养基上，得到愈伤组织； (3)愈伤组织分化:将获得的愈伤组织切成0.5cmX0.5cm的小块，然后接种在含有6-BA和NAA的改良MS培养基上，得到组培小苗； (4)生根培养:当组培小苗长至高约2.0-4.0cm时，转接在含有IBA的改良MS培养基或者含有IBA的改良1/2MS培养基上，得到生根组培苗； (5)炼苗及移栽:将生根组培苗置于室温下炼苗ld，然后除去瓶盖再炼苗l-2d，洗去残余培养基，并将生根组培苗用50%多菌灵可湿性粉剂稀释800-1000倍或者0.5%高锰酸钾溶液浸泡1min后移栽至基质中。 其中，步骤(I)中所述播种，是将种子接入改良MS培养基中或播入经过灭菌处理保持湿润的沙子中。 其中，步骤(2)中所述改良MS培养基:是将MS培养基中的大量元素增加至20倍，以6.7g/L的无水CaCl2替代8.8g/L的CaCl2.2H20，将MS培养基中的微量元素增加至200倍，以 0.0032g/L 的 CuSO4 替代 0.005g/L 的 CuSO4 *5H20,MnSO4.4Η20 的用量改为为 3.38g/L，并以自来水替代去离子水，蔗糖为20g/L，琼脂3.5-4.0g/L，其余成分及用量不变，PH值为 5.8-6.0。 其中，步骤(3)中所述含有不同浓度6-BA和NAA的改良MS培养基为MS+6-BA0.1-1.0mg/L+NAA0.01-0.lmg/L。 其中，步骤(4)中所述所述改良1/2MS培养基:是在步骤⑵所述的改良MS培养基的基础上，将大量元素减至改良MS培养基中的1/2，蔗糖为10g/L，其余成分及用量与改良MS保持一致；所述含有IBA的改良MS培养基为MS+IBA0.1-0.3mg/L ;所述含有IBA的改良 1/2MS 培养基为 1/2MS+IBA0.1-0.3mg/L。 其中，步骤(4)中所述生根组培苗，为真叶已长出，主根约有3-4条，根长约为 2.5-4.5cm 的苗。 其中，步骤(5)中所述移栽，是将生根组培苗移栽至50-72孔育苗穴盘中，穴盘的尺寸为540mmX 280mm，该穴盘中装有基质。 作为优选，所述基质是由按体积比泥炭:珍珠岩=2:1所组成，其PH值为6.0_7.0 ο 作为优选，所述基质在移栽前I周需要用800-1000倍的多菌灵可湿性粉剂稀释液或0.5%高锰酸钾溶液进行消毒。 本专利技术的有益.效果 本专利技术的方法用于蝶豆组织培养，具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，移栽成活率高的优点。 【具体实施方式】 下面结合具体例对本专利技术作进一步详细的说明。 实施例1: 2012年7月2日，选用饱满的蝶豆种子，自来水冲洗后，先用75%的酒精灭菌40s，无菌水冲洗3遍，再用0.1 %升汞灭菌lOmin，用无菌水冲洗3遍后进行催芽。催芽用50°C无菌水浸种15min后置于室温下24h。然后接入改良MS培养基中并置于组培室中，温度28±2°C，光照每天12h。 经过一段时间观察，于7月17日进行统计:种子在第5d开始萌发，污染率为0，萌发率为36.7%。7月25日将种子萌发后的小苗(子叶已展开)的上胚轴、下胚轴和带子叶茎段切成长为5mm的小段，分别接种于改良的MS培养基上。 经过一段时间观察，于9月10日统计:上胚轴、下胚轴和带子叶茎段在改良MS培养基上均可直接从基部诱导出愈伤组织，愈伤组织在第15d开始形成，愈伤组织诱导率为100%，愈伤组织质地酥松，颜色为淡黄色。 9月22日将获得的愈伤组织切成0.5cmX0.5cm大小，接种到附加了不同激素种类和浓度的改良MS培养基上，发现不同部位的愈伤组织分化能力不同，上胚轴、下胚轴和带子叶茎段的愈伤组织分化能力从高到低的顺序为:下胚轴、上胚轴和带子叶茎段的愈伤分化率分别为81^^20%和0%。愈伤组织分化的最佳培养基为:改良MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L,增殖系数达4.5，同时愈伤组织在继续变大，质地酥松，分化出的小苗长势好，健壮。愈伤组织分化所需时间约25-30d。当组培苗长至高约2.0-3.5cm时，转接于附加了不同浓度的6-BA和NAA的改良培养基中，结果为:最佳生根培养基为MS+IBA0.lmg/L,生根率100%，小苗长势好，主根平均数为3.5条，主根平均长度3.5cm，根系白色，部分偏黄，有少量须根。生根时间需要1cL 将生根良好的小苗(真叶已长出，主根有3条，根长约为4.5cm)置于室温下炼苗ld，然后除去瓶盖再炼苗ld，洗去残余培养基，并将小苗用1000倍多菌灵浸泡1min后，移栽入装有基质的50孔育苗穴盘中(基质体积比为泥炭:珍珠岩=2:1，PH = 7.0)。并浇透定根水，置于全光照间歇式喷灌系统中养护管理。白天每间隔4h喷雾I次，7d后即可正常生长，成活率100%。 实施例2: 2012年7月2日，选用饱满的蝶豆种子，自来水冲洗后，先用70%的酒精灭菌30s，无菌水冲洗4遍，再用0.1 %升汞灭菌lOmin，用无菌水冲洗4遍后进行催芽。催芽用60°C无菌水浸种15min后置于室温下24h。然后播入经过灭菌的湿润沙子中(种子萌发过程中，沙子要保持湿润，但不能有积水)，并置于组培室中，温度28±2°C，光照每天12h。 经过一段时间观察，于7月17日进行统计:种子在第7d开始萌发，污染率为0，萌发率为27.27%。7月25日将种子萌发后的小苗(子叶已展开)的上胚轴、下胚轴和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蝶豆的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)种子无菌萌发：选用饱满的蝶豆种子，经自来水冲洗、酒精灭菌、无菌水冲洗、升汞灭菌、无菌水冲洗和催芽处理，然后播种，种子萌发出小苗；(2)初代培养；将种子萌发后小苗的下胚轴切成长为5‑10mm的小段，然后接种在改良MS培养基上，得到愈伤组织；(3)愈伤组织分化：将获得的愈伤组织切成0.5cm×0.5cm的小块，然后接种在含有6‑BA和NAA的改良MS培养基上，得到组培小苗；(4)生根培养：当组培小苗长至高约2.0‑4.0cm时，转接在含有IBA的改良MS培养基或者含有IBA的改良1/2MS培养基上，得到生根组培苗；(5)炼苗及移栽：将生根组培苗置于室温下炼苗1d，然后除去瓶盖再炼苗1‑2d，洗去残余培养基，并将生根组培苗用50％多菌灵可湿性粉剂稀释800‑1000倍或者0.5％高锰酸钾溶液浸泡10min后移栽至基质中。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：闫海霞，卜朝阳，卢家仕，黄昌艳，何荆洲，王晓国，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院花卉研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45