诃子鞣质类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及诃子的可水解鞣质，特别是新天然产物：(1-没食子酸酰)葡萄糖基6′→12-诃子裂酸酯[(1-galloyl)glucopyranosyl-6′-yl]-12-chebulate,化合物1]和(1-没食子酸酰)葡萄糖基4′→12-诃子裂酸酯[(1-galloyl)glucopyranosyl-4′-yl]-12-chebulate,化合物2]的结构、分离纯化方法、抗氧化活性、抗丙肝病毒蛋白酶活性及其用途。这些成分本身或以其为组分的混合物可作为抗氧化剂、保肝或防治肝炎制剂在食品、化妆品和药品中应用。

【技术实现步骤摘要】
诃子鞣质类化合物及其制备方法和应用
本专利技术属于天然药物化学及食品化学
，涉及2种诃子鞣质类新化合物及其有效部位及其制备方法和在防治肝炎和作为抗氧化剂在食品、化妆品和药品中的用途。
技术介绍
诃子为使君子科诃子(TerminaliachebulaRetz.)或绒毛诃子(TerminaliachebulaRetz.Var.tomentellaKurt)的干燥果实，有涩肠止泻，敛肺止咳，降火利咽功能。中医药用于久泻久痢，肺虚咳喘好，咽痛音哑等疾病（国家药典委员会编中华人民共和国药典2010年版第一部，中国医药科技出版社，2010年印刷，第173-174页）。诃子是蒙医药和藏医药中最常用的药材，被称为“众药之王”，蒙藏医临床用于风热疹起、咽喉干痛、爆发火眼、湿热黄疸、肝区刺痛等（赵丽娟，杜遵义，诃子在藏蒙药中应用研究的概述，中国民族医药杂志，2007，31-32。）。已知诃子中含有多种可水解鞣质类成分(Han,Q.,Song,J.,Wong,L.,Xu,H.,2006.PreparativeIsolationofhydrolysabletanninschebulagicacidandchebulinicacidfromTerminaliachebulabyhigh-speedcounter-currentchromatography.JSepSci.29,1653-1657.)，其中诃黎勒鞣花酸（chebulagicacid）有广谱抗病毒活性，可抑制病毒进入寄主细胞（Lin,L.T.,Chen,T.Y.,Lin,S.C.,Chun,C.Y.,Lin,T.C.,Wang,G.H.,Anderson,R.,Lin,C.C.,Richardson,C.D.,2013.Broad-spectrumantiviralactivityofchebulagicacidandpunicalaginagainstvirusesthatuseglycosaminglycansforentry.BMCMicrobiol.13,187.)。丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus,HCV）在全世界的感染率高达3%，造成全球约一亿七千万，中国内地约三千八百万的病毒携带者。HCV携带者虽然没有明显临床症状，但其中很大一部分人会逐渐发展为肝硬化和肝癌，同时还会作为传染源感染给别人。对于HCV感染，目前尚无特效药物，而且该病毒属于RNA病毒，经常发生变异使丙肝疫苗的研发异常困难，也使HCV容易对药物产生耐药性，所以寻找多种结构类型和多种作用机理的防治丙肝药物是药学研究者的紧迫任务（FrancescoRD,MigliaccioG.ChallengesandsuccessesindevelopingnewtherapiesforhepatitisC.Nature.436:953-960,2005.）。在HCV病毒繁殖的成熟阶段先合成一种聚合蛋白，该蛋白必须经过病毒蛋白酶的加工才能成熟为有感染力的病毒，因此抑制HCV蛋白酶是寻找抗丙肝药物的有效手段（ClercqED.ThedesignofdrugsforHIVandHCV.NatRevDrugDiscov6:1001-1018.2007.）。本专利技术以寻找多种结构类型和多种作用机理的防治丙肝药物为目的发现了具有抗HCV蛋白酶的诃子可水解鞣质（化合物1-10）。经解析核磁共振和质谱数据,鉴定为(1-没食子酸酰)葡萄糖基6′→12-诃子裂酸酯[(1-galloyl)glucopyranosyl-6′-yl]-12-chebulate,化合物1]和(1-没食子酸酰)葡萄糖基4′→12-诃子裂酸酯[(1-galloyl)glucopyranosyl-4′-yl]-12-chebulate,化合物2],木麻黄鞣宁(casuarinin,化合物3),诃子裂酸(chebulicacid,化合物4),5-O-没食子酰基莽草酸（5-O-galloyl-shikimicacid,化合物5),五没食子酰葡萄糖（pentagalloylglucose,化合物6),柯里拉京（corrilagin,化合物7),鞣花酸(ellagicacid,化合物8),诃黎勒鞣花酸（chebulagicacid,化合物9)，没食子酸（gallicacid,化合物10)（附图16从诃子中分离鉴定出的化合物1-10的化学结构）；其中化合物1和2为新化合物，结构为诃子裂酸基和没食子酸基与葡萄糖形成的酯，与其他缩合鞣质的结构有很大差别。本专利技术的目的在于提供2种诃子鞣质类新化合物及其有效部位及其制备方法和在防治肝炎和作为抗氧化剂在食品、化妆品和药品中的应用。
技术实现思路
本专利技术涉及诃子裂酸衍生物：(1-没食子酸酰)葡萄糖基6′→12-诃子裂酸酯（1）和(1-没食子酸酰)葡萄糖基4′→12-诃子裂酸酯（2）的结构及诃子可水解鞣质的提取分离纯化方法和抗丙肝病毒蛋白酶活性。诃子的甲醇提取物经多种色谱分离得到10个纯品化合物，经解析多种核磁共振图谱和质谱数据确定出化合物的结构为：(1-没食子酸酰)葡萄糖基6′→12-诃子裂酸酯（1）、(1-没食子酸酰)葡萄糖基4′→12-诃子裂酸酯（2）、木麻黄鞣宁(3),诃子裂酸(4)、5-O-没食子酰基莽草酸（5)、五没食子酰葡萄糖(6)、柯里拉京（7)、鞣花酸(8)、诃黎勒鞣花酸（9)和没食子酸（10)；其中(1-没食子酸酰)葡萄糖基6′→12-诃子裂酸酯（1）和(1-没食子酸酰)葡萄糖基4′→12-诃子裂酸酯（2）为新化合物；这些可水解鞣质类化合物均有较强的抗丙肝病毒蛋白酶活性和抗氧化活性。其具体技术方案为：诃子可水解鞣质的提取分离纯化方法：诃子粉碎后用甲醇迴流提取，提取物浓缩后直接用葡聚糖凝胶LH-20色谱分离，或者用乙酸乙酯和甲醇依次捏溶，或将浓缩物悬浮水中用乙酸乙酯萃取。各部分经ODS色谱分离,用甲醇/水梯度洗脱，经葡聚糖凝胶LH-20色谱，甲醇/水系统洗脱，ODS色谱包括制备液相色谱纯化得到诃子鞣质类化合物。上述化合物(3-10)经解析多种核磁共振图谱和质谱数据及和文献值对照确定出结构为：木麻黄鞣宁(3),诃子裂酸(4),5-O-没食子酰基莽草酸(5),五没食子酰葡萄糖(6),柯里拉京(7),鞣花酸(8),诃黎勒鞣花酸(9)和没食子酸(10)。化合物1和2为新化合物，结构测定过程如下：化合物1和2的结构测定化合物1和2的负离子电喷雾质谱均给出669.0的[M-H]-峰。它们的负离子高分辨率电喷雾质谱分别给出m/z669.0934和m/z669.0943的精密分子量,结合核磁共振谱确定这两个化合物的分子式均为C27H26O20(理论值:669.0939)。虽然因为化合物1和2的溶解度稍有差异因此在不同的氘代溶剂中测定了核磁共振谱,但它们的氢谱和碳谱在核磁信号的个数和偶合模式方面均很相似(表1)。这些现象说明化合物1和2是异构体,因此通过同时分析比较这2个化合物的图谱确定了它们的结构。化合物1和2的氢谱显示出可水解鞣质常有的芳香氢单峰和葡萄糖的信号。这些芳香氢单峰在多键碳氢关系(HMBC)谱中与酚性碳及羰基碳相关，说明存在没食子酰基。在每个化合物氢谱中均有2个这样的芳香单峰，1个积分值为2个本文档来自技高网...

【技术保护点】
2种可水解鞣质新化合物及其有效部位, 其结构式如式(I)所示: 式 （I）。

【技术特征摘要】
1.2种可水解鞣质新化合物1和2及以其为组分的混合物,其结构式如式(I)所示:式（I）。2.权利要求1所述的可水解鞣质新化合物1和/或2及以其为组分的混合物与一种或多种辅料组成的药物制剂。3.权利要求1所述化合物及以其为组分的混合物的制备方法,所述方法特征包括化合物及以其为组分的混合物的提取，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马超美，阿贾拉奥卢塞贡，阿扎吉雅，
申请(专利权)人：内蒙古大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15