一种疫苗组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种疫苗组合物，该疫苗组合物包含免疫量的番鸭细小病毒抗原和免疫量的番鸭细小病毒抗体。该疫苗组合物既可应用于雏番鸭的免疫，也可直接应用于番鸭胚免疫，且免疫效果不受母源抗体的影响，且免疫力产生速度更快，在免疫后第2天即可产生理想的保护，使用强毒攻击后，免疫鸭5/5无发病，而对照鸭则5/5发病死亡。

【技术实现步骤摘要】
一种疫苗组合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种用于预防番鸭细小病毒病的疫苗组合物。
技术介绍
番鸭细小病毒病是由番鸭细小病毒（MPV)引起的雏番鸭的一种传染病，该病主要 侵害1?3周龄的雏番鸭，俗称三周病。其发病率为26%?62%，病死率为22%?43%，病 愈鸭大部分成为僵鸭，给养鸭业带来一定损失。该病具有高度传染性，多以腹泻、喘气和进 行性消瘦及脚发软为主要症状。 目前对番鸭细小病毒病的预防主要是使用番鸭细小病毒病弱毒活疫苗，这其中的 弱毒活疫苗由于免疫力产生速度快，因而得到了较为广泛的应用。但由于活疫苗受母源抗 体的影响较大，而雏番鸭或高或低总会从种鸭获取部分的母源抗体，因此活疫苗的免疫也 受到了母源抗体的影响。此外，也有少量的灭活疫苗在使用。 番鸭细小病毒可在番鸭胚和鹅胚中繁殖，因此，使用番鸭胚或者鹅胚培养的方法 即可获取番鸭细小病毒的全病毒，并且使用该全病毒可制备相应的抗血清和蛋黄抗体。MPV 属于细小病毒科细小病毒属，与鹅细小病毒（GPV)-样，具有3种结构多肽，VPl(91ku)、VP2 (78ku)和VP3 (61ku)，其中VP2为MPV的主要免疫保护抗原，能够诱导机体产生中和抗体。 在无 VPl存在的情况下，VP2蛋白可自我组装成具有免疫原性，而不具有传染性的病毒样颗 粒。已有文献报道，使用真核表达系统(毕赤酵母表达、昆虫细胞表达）和原核表达系统(大 肠杆菌表达)表达MPV的VP2蛋白，获取具有免疫原性的蛋白。使用表达的免疫原蛋白同样 可以制备多抗血清或者多克隆蛋黄抗体。 有关已公开的番鸭细小病毒抗原相关关键技术有： (1)免疫原性蛋白VP2的表达 已有文献报道，使用大肠杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统和昆虫细胞表达系统 表达番鸭细小病毒的VP2蛋白。 (2)多克隆抗体的制备 使用制备的全病毒或者免疫原蛋白，加入适当佐剂制备疫苗，免疫动物或者种禽， 收集免疫动物的血清或者种禽所下的种蛋，即可制得多克隆抗血清和多克隆蛋黄抗体。 (3)抗原和抗体复合物的配制方法 将制备的番鸭细小病毒全病毒的活病毒或者具有免疫原性的VP2蛋白，按适当比 例与相应的多克隆抗血清或者多克隆蛋黄抗体混合孵育，即可制成抗原和抗体复合物。 福建省农业科学院畜牧兽医研究所利用番鸭细小病毒弱毒Pl株和番鸭源鹅细小 病毒弱毒D株为种毒，经增殖后按一定比例混合，制成能够同时预防和控制番鸭细小病毒 病和番鸭小鹅瘟病的二联活疫苗(福建省农业科学院畜牧兽医研究所，番鸭细小新型疫苗 的制备方法：中国，1〇1880651Α[Ρ]，2010. 11. 10)。然而，由于雏鸭普遍存在针对番鸭细小 病毒的母源抗体，弱毒活疫苗的免疫效果会受到较大程度的影响。其次，使用该专利技术制备的 疫苗免疫1日龄雏番鸭，雏番鸭在免疫后7天才能产生针对强毒的保护，虽然免疫鸭使用强 毒攻击后10/10无发病，而对7日龄之前的攻毒并不能产生理想的保护。 王永坤等人利用番鸭细小病毒M91-G27株接种鹅胚，收获感染鹅胚液，制备番鸭 细小病毒冻干活疫苗，使用该疫苗免疫1日龄雏番鸭，在免后10天可提供较为理想的保护 (王永坤，钱钟，钱淑美等，雏番鸭细小病毒和小鹅瘟病毒特性比较及二联活苗的应用[J]， 中国禽业导刊，2004, 21 (9) : 18-20)。然而，由于雏鸭普遍存在针对番鸭细小病毒的母源抗 体，弱毒活疫苗的免疫效果会受到较大程度的影响。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种番鸭细小病毒抗原和番鸭细小病毒的 疫苗组合物，该疫苗组合物既可应用于雏番鸭的免疫，也可直接应用于番鸭胚免疫，且免疫 效果不受母源抗体的影响。 本专利技术使用抗原抗体复合物技术所制备的番鸭细小病毒病疫苗组合物，能够克服 母源抗体的影响，并且免疫力产生速度更快，在免疫后第2天即可产生理想的保护，使用强 毒攻击后，免疫鸭5/5无发病，而对照鸭则5/5发病死亡。 本专利技术的主要目的在于提供一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量 的番鸭细小病毒抗原和免疫量的番鸭细小病毒抗体。 本专利技术所指的番鸭细小病毒抗原是指：包含至少一种对番鸭给药后能诱导、刺激 或增强抗番鸭细小病毒感染的免疫应答的抗原的任何组合物。本专利技术所指的番鸭细小病毒 抗体是指：含至少一个，优选两个重链可变区（VH)和/或至少一个，优选两个轻链可变区 (VL)的蛋白，且该蛋白重链和轻链的可变区含有可与番鸭细小病毒VP2蛋白相互结合的区 域。 优选地，所述番鸭细小病毒抗原为番鸭细小病毒全病毒，优选灭活形式、改良的活 的形式或减毒形式的番鸭细小病毒，含有至少番鸭细小病毒的免疫原性氨基酸序列的嵌合 病毒，任何其它含至少番鸭细小病毒的免疫原性氨基酸序列的多肽或蛋白；所述番鸭细小 病毒抗体为使用番鸭细小病毒抗原制备的蛋黄抗体和/或抗血清。 更优选地，所述番鸭细小病毒抗原为减毒形式的番鸭细小病毒活病毒或番鸭细小 病毒VP2蛋白；所述番鸭细小病毒抗体为使用减毒形式的番鸭细小病毒活病毒或番鸭细小 病毒VP2蛋白制备的蛋黄抗体和/或抗血清。 进一步优选，所述番鸭细小病毒抗原为番鸭细小病毒M91-G27株，番鸭细小病毒 Pl株，番细小病毒Q株活病毒，或为番鸭细小病毒M91-G27株，番鸭细小病毒Pl株，番细小 病毒Q株VP2蛋白；所述番鸭细小病毒抗体为使用番鸭细小病毒M91-G27株，番鸭细小病毒 Pl株，番细小病毒Q株灭活疫苗制备的蛋黄抗体和/或抗血清，或为番鸭细小病毒M91-G27 株，番鸭细小病毒Pl株，番细小病毒Q株VP2蛋白制备的蛋黄抗体和/或抗血清。 更优选地，所述番鸭细小病毒抗原含量为5?IO5ELD5tlA). 2ml或所述番鸭细小病 毒抗原含量为VP2蛋白1?100ng/ml ;所述番鸭细小病毒抗体LPAI抗体滴度为1 : 2? 1 : 90。 本专利技术的另一目的在于提供一种制备权利要求1所述疫苗组合物的方法，所述方 法包括： 1)增殖培养所述减毒形式的番鸭细小病毒活病毒；2)用所述番鸭细小病毒灭活疫 苗制备蛋黄抗体或用所述番鸭细小病毒灭活疫苗制备抗血清；3)按比例配制所述番鸭细小 病毒活病毒抗原和所述番鸭细小病毒抗体组合物。 本专利技术的再一目的在于提供一种制备权利要求1所述疫苗组合物的方法，所述方 法包括： 1)表达所述番鸭细小病毒VP2蛋白；2)用所述番鸭细小病毒灭活疫苗制备蛋黄抗 体或用所述番鸭细小病毒灭活疫苗制备抗血清；3)按比例配制所述番鸭细小病毒活病毒抗 原和所述番鸭细小病毒抗体组合物。 本专利技术的又一目的在于提供所述的疫苗组合物在制备预防和治疗番鸭细小病毒 病的药物中的应用。 优选地，所述疫苗组合物施用动物为雏番鸭、番鸭胚。 更优选地，所述番鸭胚为20?29日龄的番鸭胚。 本专利技术所提供的番鸭细小病毒抗原抗体复合物疫苗可用于雏番鸭的免疫，当用于 雏番鸭时，可使雏番鸭在易感日龄对抗番鸭细小病毒的感染。 本专利技术所提供的番鸭细小病毒抗原抗体复合物可用于20?29日龄番鸭胚的接 种，当用于番鸭胚的接种时，可使孵化出的雏番鸭即具有对抗番鸭细小病毒的感染的抵抗 力。 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的番鸭细小病毒抗原和免疫量的番鸭细小病毒抗体。

【技术特征摘要】
1. 一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的番鸭细小病毒抗原和免疫量 的番鸭细小病毒抗体。2. 如权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述番鸭细小病毒抗原为番鸭细小病毒全 病毒，优选灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的番鸭细小病毒，含有至少番鸭细小病毒 的免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何其它含至少番鸭细小病毒的免疫原性氨基酸序列 的多肽或蛋白；所述番鸭细小病毒抗体为使用番鸭细小病毒抗原制备的蛋黄抗体和/或抗 血清。3. 如权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述番鸭细小病毒抗原为减毒形式的番鸭 细小病毒活病毒或番鸭细小病毒VP2蛋白；所述番鸭细小病毒抗体为使用减毒形式的番鸭 细小病毒活病毒或番鸭细小病毒VP2蛋白制备的蛋黄抗体和/或抗血清。4. 如权利要求3所述的疫苗组合物，其中，所述番鸭细小病毒抗原为番鸭细小病毒 M91-G27株，番鸭细小病毒P1株，番细小病毒Q株活病毒，或为番鸭细小病毒M91-G27株，番 鸭细小病毒P1株，番细小病毒Q株VP2蛋白；所述番鸭细小病毒抗体为使用番鸭细小病毒 M91-G27株，番鸭细小病毒P1株，番细小病毒Q株灭活疫苗制备的蛋黄抗体和/或抗血清， 或为番鸭细小病毒M91-G27株，番鸭细小病毒P1株，番细小病毒Q株VP2蛋白制备的蛋黄 抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，白朝勇，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41