本发明专利技术涉及一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合。本发明专利技术组合为使用烷化剂作为病毒灭活剂的水貂病毒性肠炎灭活疫苗兼作组合中犬瘟热活疫苗的稀释液；组合中两种疫苗具有特定的配比关系。该疫苗组合相比两种疫苗传统的应用方法达到一针两防(预防水貂病毒性肠炎和犬瘟热)，降低了疫苗成本、减少了动物应激反应、提高了免疫效果、减轻了饲养者的劳动强度从而取得显著的经济效益。
【技术实现步骤摘要】
一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合
本专利技术涉及一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗及犬瘟热活疫苗组合。属于兽用生物制 品领域。
技术介绍
水紹病毒性肠炎是由水紹肠炎病毒（Mink Enteritis Virus, MEV)引起的一种急 性、烈性和高度接触性传染病，主要以剧烈腹泻为主要特征，1949年由加拿大学者Sehofield 首次发现本病（Schofield F W. Virus enteritis in mink. Am Vet, 1949, 30:6512654·)。 1981年姜廷秀等（姜挺秀，朴厚坤，王喜龙等.疑似水貂病毒性肠炎初报.毛皮动物饲养， 1981，（2):224.)首先报道了我国发生水貂病毒性肠炎，此后该病逐渐蔓延全国，给我国养 貂业带来巨大的经济损失（高云，宋纯林，吴玉林等水貂病毒性肠炎（MEV)流行病学调查及 防治.特产科学实验，1984,（4) 33234.)。 犬癌热是由犬癌热病毒（Canine distemper virus, (DV)引起的犬科、融科和熊 科动物的一种高度接触性传染病，病死率30 %?80 %。犬瘟热病毒为副粘病毒科麻疹病毒 属，呈圆形或不整形。直径100?300nm，含有直径为15?17nm的螺旋状核衣壳，外覆一 层双轮膜，膜上长I. 3nm的纤突。发病率高，几乎可以达到100%，且临床症状多样，容易继 发其他细菌、病毒的混合感染和二次感染，死亡率高，素有毁灭性传染病之称，对养犬业、 毛皮动物养殖业造成巨大损失。自1809年Jeneer首次报道犬瘟热，1905年Carre通过动 物接种分离的滤过性致病因子复制出病例以来，各国学者已经对犬瘟热病毒的分离培养、 理化特性、流行病学以及免疫与防制作了大量的研究。近年来，其感染范围不断扩大，危害 也越来越大，甚至已经有人感染犬瘟热病毒的病例。Mee等也从患Pagets疾病的病人组织 中检测出犬瘟热病毒核酸，这使得犬瘟热有可能成为继狂犬病之后犬传播给人的第二种疫 病。在我国，随着近几年来军犬、警犬、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅度增加，以及异地交 流的不断增多，犬瘟热在我国犬中的发病率和致死率也均有升高的趋势，而且临床症状也 与以往的表现有所不同。 水貂病毒性肠炎与犬瘟热是毛皮动物养殖中发病率最高的两种疾病，均需要免疫 预防，目前这两种疾病均有单独疫苗可以使用。但是由于毛皮动物养殖中，每次免疫均会对 动物造成较大的应激，因而寻找一种将两种疫苗联合使用的方法极为重要。由于传统的水 貂病毒性肠炎灭活疫苗使用的是甲醛溶液灭活剂，如果与犬瘟热活疫苗共同使用则会造成 犬瘟热抗原的失效，无法实现联合使用。 烧化剂属于细胞毒类药物，又称生物烧化剂（Bioalkylating Agengts)，在体内能 形成碳正离子或其他具有活泼的亲电性基团的化合物，进而与细胞中的生物大分子中含有 丰富电子的基团发生共价结合，使其丧失活性或使DNA分子发生断裂，导致细胞死亡。其中 二乙烯亚胺（BEI)可以破坏病毒核酸，不改变病毒蛋白质，而且不同病毒对BEI的抵抗力不 尽相同，同时BEI对核酸具有较高的诱变作用。本专利技术使用BEI溶液作为水貂病毒性肠炎 灭活疫苗生产过程中的灭活剂，使得水貂病毒性肠炎灭活疫苗满足了作为犬瘟热活疫苗稀 释液进行使用的可能，并通过各种创造性试验，实现了水貂病毒性肠炎灭活疫苗与犬瘟热 活疫苗的联合应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗 组合，将水紹病毒性肠炎灭活疫苗作为犬癌热活疫苗稀释液，达到降低疫苗成本、减少动物 应激、提高经济效益的目的。 为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案在于： 1. -种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合，是由水貂病毒性肠炎灭活 疫苗和犬瘟热活疫苗组成，其中水貂病毒性肠炎灭活疫苗兼作犬瘟热活疫苗的稀释剂。 2. -种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合中水貂病毒性肠炎灭活疫 苗使用的灭活剂为烷化剂，优选灭活终浓度为〇. 05%?0. 3%的BEI溶液。 3. -种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合中两种疫苗具有每3毫升 水貂病毒性肠炎灭活疫苗稀释1头份犬瘟热活疫苗的配比关系，其中水貂病毒性肠炎灭 活疫苗灭活前病毒含量为每晕升I. ox i〇7_°tcid5(i以上，犬癌热活疫苗每头份病毒含量为 104_ 5TCID5tl 以上。 4. 一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合中水貂病毒性肠炎灭活疫 苗制备步骤包括： (1)将F81细胞系或者CRFK细胞系进行传代和培养； (2)将水貂病毒性肠炎病毒接种到长满80%的F81或者CRFK单层细胞的介质上， 用维持液培养，制备生产用种毒； (3)通过微载体平衡、细胞接种及消化转移、细胞罐放大转移使细胞培养扩大至 1000L的细胞罐。当细胞密度达到I. 5X 106cells/ml时，接种水貂肠炎病毒MEV-RCl株，得 到水貂病毒性肠炎病毒抗原液； (4)将水貂病毒性肠炎病毒抗原液分别加入BEI溶液灭活，混合均匀，加入水溶性 佐剂，优选灭菌的氢氧化铝胶配苗，即得。 5.组合中水貂病毒性肠炎灭活疫苗制备中使用水貂病毒性肠炎病毒（Mink Enteritis Virus，MEV)为MEV-RCl株该毒株已于2012年04月12日送交北京市朝阳区北 辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心保藏，编号为：CGMCC No. 4331。 【具体实施方式】 一、水貂病毒性肠炎灭活疫苗 1.水貂病毒性肠炎灭活疫苗的生产制备 (1)生产用毒种制备 取生长良好的F81细胞或者CRFK细胞按常规方法传代，待细胞长成80%单层后， 弃去生长液，换以含0. 5%?1% MEV-RCl株毒种的维持液（含2%在56°C下灭活30分钟 的新生牛血清的MEM) (MEM购自美国Gibco公司，新生牛血清购自济南劲牛生物科技有限公 司），置37°C继续培养，待80%左右的细胞出现典型拉网式病变时收获，冻融1次，定量分 装，冷冻保存，注明收获日期、毒种代次等。 (2)制苗用材料的选择 选择生长良好、符合现行《中国兽药典》生产、检验用细胞标准的或者CRFK细胞做 为制苗用材料，细胞代次为F6?F35代。 (3)制苗用毒液的繁殖 1)生物反应器清洗灭菌及微载体平衡 将生物反应器清洗干净，121°C灭菌30分钟。灭菌结束后，将灭菌好的微载体打入 细胞培养罐中，将平衡培养基MEM打入罐中至最小培养体积，平衡20?24小时。平衡载体 期间完成溶氧电极100%点的校正。 2)细胞接种及消化转移 选择生长旺盛的转瓶细胞，用EDTA-胰蛋白酶分散液消化后，用含8%新生牛血 清的MEM和微载体（Cytodex I型微载体，购自GE公司）悬浮制成细胞悬液，接种30L细 胞培养罐，接种密度5. 0?6. OX 105cells/ml，连续培养2?3天，细胞罐培养过程中当 葡萄糖含量低于500mg/L，用含5 %新生牛血清的MEM培养基批次换液，当细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗‑犬瘟热活疫苗组合，其特征在于该组合是由水貂病毒性肠炎灭活疫苗和犬瘟热活疫苗组成，其中水貂病毒性肠炎灭活疫苗兼作犬瘟热活疫苗的稀释剂。
【技术特征摘要】
1. 一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合，其特征在于该组合是由水貂病 毒性肠炎灭活疫苗和犬瘟热活疫苗组成，其中水貂病毒性肠炎灭活疫苗兼作犬瘟热活疫苗 的稀释剂。2. 权利要求1所述的一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合，其特征在于 组合中水貂病毒性肠炎灭活疫苗使用的灭活剂为烷化剂。3. 权利要求1所述的一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合，其特征在于 组合中两种疫苗具有每3毫升水貂病毒性肠炎灭活疫苗稀释1头份犬瘟热活疫苗的配比关 系，其中水貂病毒性肠炎灭活疫苗灭活前病毒含量为每毫升l.〇Xl〇 7_°TCID5(l以上、犬瘟热 活疫苗每头份病毒含量为l〇4 5TCID5(l以上。4. 如权利要求1、2所述的一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合，其特征 在于该组合中水貂病毒性肠炎灭活疫苗制备步骤包括： (1) 将F81细胞系或者CR...
【专利技术属性】
技术研发人员：禚宝山，宋晓飞，李营，秦绪伟，田真，王景伟，王蕾，鲍海忠，
申请(专利权)人：齐鲁动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。