一种应用于甲基结合蛋白测序中的甲基化DNA富集方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，公开了一种应用于甲基结合蛋白测序中的甲基化DNA富集方法，包含以下步骤：(1)磁珠的活化与甲基结合蛋白交联反应；(2)甲基结合蛋白-磁珠复合物与片段化DNA的孵化；(3)去除非甲基化DNA；(4)甲基化DNA洗脱；(5)乙醇沉淀，得到富集的甲基化DNA。同现有技术相比，本发明专利技术在去除非甲基化DNA这步，依次采用160mM NaCl与200mM NaCl对片段化DNA与甲基结合蛋白-磁珠复合物的混合物进行洗脱，更完全地除去了非甲基化DNA，保留甲基化DNA，提高了最后富集到的DNA中甲基化DNA的比例，从而提高了甲基化区域的测序深度。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种应用于甲基结合蛋白测序中的甲基化DNA富集方法，采用甲基化DNA富集试剂盒进行，其特征在于，包含下述步骤：(1)磁珠的活化与甲基结合蛋白交联反应将磁珠进行活化，然后使生物素标记的甲基结合蛋白与活化后的磁珠发生交联反应，得到甲基结合蛋白‑磁珠复合物；(2)甲基结合蛋白‑磁珠复合物与片段化DNA的孵化将片段化DNA加入上述步骤(1)得到的甲基结合蛋白‑磁珠复合物中，进行孵化，使甲基化DNA与复合物进行特异性地结合；(3)去除非甲基化DNA对上述步骤(2)中经孵化的片段化DNA与甲基结合蛋白‑磁珠复合物的混合物，用160mM NaCl将磁珠洗脱4遍，再用200mM NaCl洗脱3遍，除去非甲基化DNA；(4)甲基化DNA洗脱对上述步骤(3)中得到的去除了非甲基化DNA的混合物，使用2000mMNaCl对磁珠进行洗脱，得到甲基化DNA组份；(5)乙醇沉淀采用乙醇沉淀法对上述步骤(4)中洗脱得到的甲基化DNA组份进行沉淀，干燥后以TE缓冲液溶解，即得到富集的甲基化DNA。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙子奎，高文学，丁方美，王锋，唐嘉婕，
申请(专利权)人：上海派森诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31