一种基于近红外光谱测定溶液中总黄酮含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于近红外光谱测定复方阿胶浆中总黄酮含量的方法，属于中医药研究领域。本发明专利技术通过实验室浓缩稀释配制不同浓度样本，与复方阿胶浆成品样本共同组成样本集，采集样本集的近红外光谱图，进行异常样本剔除和样本集的划分，选择合适的光谱波段、数据预处理方法得到溶液样本特征光谱信息，以亚硝酸钠-硝酸铝比色法测得总黄酮含量为参照值，应用化学计量学技术，构建样本近红外光谱与其总黄酮含量之间关系的定量校正模型，采集待测复方阿胶浆成品的近红外光谱，利用构建的定量校正模型快速计算其总黄酮含量。本发明专利技术方法有利于提高复方阿胶浆成品的质量控制水平，保证成品质量稳定、可靠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体涉及一种基 于近红外光谱测定复方阿胶浆中总黄酮含量的方法，属于中医药研究
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技术介绍
药品成品检验是药品在进入市场前必经的最后一道质量控制程序，直接关系到消 费者的用药安全。目前中药药品的检测方法多为色谱法，这类方法需要在分析前经过复杂 的样品预处理，分析时间也较长，而且传统测定方法一次只能测定一个指标，延长了批生产 过程的总耗时。 复方阿胶浆是东阿阿胶股份有限公司独家生产的中药保护品种，它是根据明代医 家张介宾《景岳全书》中的两仪膏（熟地黄、人参)，加阿胶、党参等中药制成，主要用于气血 两虚引起的头晕目眩、心悸失眠、食欲不振、贫血、白细胞减少症及放化疗的增效减毒。 2010版《中国药典》中对于复方阿胶浆的含量测定仅有总氮量一项，不足以反映复 方阿胶浆成品中有效成分的整体状况，难以满足对复方阿胶浆成品进行含量分析与监控的 要求。因此，迫切需要建立复方阿胶浆成品中指标成分含量的简捷快速测定方法，以满足生 产企业对成品指标含量进行快速测定的需求。 近红外光谱（Near Infrared Spectroscopy, NIRS)是可见光与中红外光谱之间波 长范围为780至2500nm的光谱区。该光谱区主要是含氢基团（C-H、N-H、〇-H)的倍频与合 频吸收，通过扫描样品的近红外光谱，可以得到样品中有机分子含氢基团的特征信息。近红 外光谱用于中药质量分析能从整体上反映其化学组成信息，具有样品无需或仅需极少的预 处理、操作简便、不消耗化学试剂以及可实现在线过程控制等优势。该技术需要与化学计量 学结合，其中常用的化学计量学技术主要有多元线性回归、主成分回归和偏最小二乘回归 等。近年来，近红外光谱已被广泛应用于中药领域，在定性和定量测定中都显示了巨大的潜 力。 但由于中成药成分复杂，有效成分含量偏低且其近红外光谱中吸收重叠现象严重 等问题，有关中药成方制剂的近红外光谱研究报导尚较少。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，具体 涉及一种基于近红外光谱测定复方阿胶浆中总黄酮含量的方法，一方面为复方阿胶浆成品 的快速定量分析提供了一种新的测定方法，减轻成品检验的工作量，缩短批生产过程的总 耗时；另一方面也可适当提高抽检比例，以增强成品检验结果的可靠性。 本专利技术的目的是通过如下技术方案实现： -种基于近红外光谱测定溶液中总黄酮含量的方法，所述的方法包括以下步骤： 1.样本的收集：实验室浓缩稀释配制不同浓度样本，与复方阿胶浆成品样本共同 组成样本集以增加样本集的代表性； 2.样本集中各样本总黄酮含量的测定：以亚硝酸钠-硝酸铝比色法测得样本中总 黄酮的含量，具体操作步骤如下： (1)对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每lmL含0. 2mg的 溶液，摇勻，即得。 (2)标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0、1、2、3、4、5mL至25mL容量瓶中，力口 水补足5mL，精密加入质量分数为5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，放置6分钟，再精密加入质量 分数为10%硝酸铝溶液lmL，摇勻，放置6分钟，加氢氧化钠溶液10mL，摇勻，加水至刻线，摇 匀，放置15分钟，在500nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲 线。 (3)供试品溶液的测定：取0. 4mL复方阿|父楽成品样品（或0. 2mL实验室配制样 品)，与对照品相同方法测定，另取等量的样品加10mL氢氧化钠溶液并定容至25mL作为试 样空白。 3.近红外光谱数据采集：使用近红外光谱仪采集样本近红外光谱； 优选的，采用透反射模式采集样本溶液的近红外光谱图； 优选的，近红外光谱仪以仪器内置背景为参比，分辨率为4CHT1，扫描次数为128 次，光谱采集波数范围为4000-lOOOOcnT 1 ; 更优选的，所述的光谱波数范围为 4429-4900CHT1、6469-7377CHT1、7377-8000CHT1、 4429-8000(^- 1任一波段或其组合波段。 4.校正模型的建立：使用多元校正方法构建校正集样本总黄酮含量与近红外特 征光谱之间的定量校正模型，用于待测样本中总黄酮含量的预测。 应用化学计量学技术，建立总黄酮含量的定量校正模型。在建立校正模型之前， 首先需要鉴别并剔除异常样本并对样本集进行划分，以获得代表性强的校正集样本和验证 集样本，其中，用于建立模型的样本为校正集样本，用于模型验证和评价的样本为校正集样 本。本专利技术采用Chauvenet检验法和杠杆值与学生化残差值相结合的方法进行异常样本的 剔除，兼顾了化学值和光谱数据的异常，有助于提高模型的预测效果。 Chauvenet检验法首先计算所有样品光谱的平均光谱，然后计算每个样品光谱与 平均光谱之间的马氏距离，将距离值从小到大的顺序排列，根据Chauvenet判别准则判定 距离值最大的样品光谱是否为异常，若是则继续判别距离值第二大的样品光谱是否为异 常，以此类推，直至某一样品光谱被判定为正常。本专利技术中软件根据准则自动判断光谱是否 为异常。Chauvenet判别准则公式如下： 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于近红外光谱测定复方阿胶浆中总黄酮含量的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：(1)样本的收集：实验室浓缩稀释配制不同浓度样本，与复方阿胶浆成品样本共同组成样本集；(2)样本集中各样本总黄酮含量的测定：以亚硝酸钠‑硝酸铝比色法测得样本总黄酮的含量；(3)样本近红外光谱采集和数据预处理：使用近红外光谱仪采集样本近红外光谱，进行异常样本剔除和样本集的划分，然后选择合适的光谱波段和预处理方法，提取光谱特征信息；(4)校正模型的建立：使用多元校正方法构建校正集样本总黄酮含量与近红外特征光谱之间的定量校正模型用于待测样本中总黄酮含量的预测；(5)校正模型的应用：根据上述所建立的校正模型，对待测的成品进行分析，得出待测样本中总黄酮的含量。

【技术特征摘要】
1. 一种基于近红外光谱测定复方阿胶浆中总黄酮含量的方法，其特征在于，所述的方 法包括以下步骤： (1) 样本的收集：实验室浓缩稀释配制不同浓度样本，与复方阿胶浆成品样本共同组 成样本集； (2) 样本集中各样本总黄酮含量的测定：以亚硝酸钠-硝酸铝比色法测得样本总黄酮 的含量； (3) 样本近红外光谱采集和数据预处理：使用近红外光谱仪采集样本近红外光谱，进 行异常样本剔除和样本集的划分，然后选择合适的光谱波段和预处理方法，提取光谱特征 信息； (4) 校正模型的建立：使用多元校正方法构建校正集样本总黄酮含量与近红外特征光 谱之间的定量校正模型用于待测样本中总黄酮含量的预测； (5) 校正模型的应用：根据上述所建立的校正模型，对待测的成品进行分析，得出待测 样本中总黄酮的含量。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3)所述的近红外光谱的采集方式 为：使用透反射模式采集近红外光谱。3. 根据权利要求1所述的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦玉峰，尤金花，田守生，周祥山，瞿海斌，李文龙，韩海帆，张路，张淹，
申请(专利权)人：山东东阿阿胶股份有限公司，浙江大学，
类型：发明
国别省市：山东;37