本发明专利技术还公开了序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、以及SEQ ID No.4的microRNA以及所述的microRNA在制备活动性结核检测试剂中的应用：所述的活动性结核检测试剂盒包括扩增特异性引物、real-time PCR试剂盒和内参引物，还可以包括microRNA反转录体系、缓冲液。本发明专利技术通过real-time PCR相对定量方法特异性地检测所述mircoRNA的含量并与内参microRNA进行比较，从而用于检测结核病，本发明专利技术所述的microRNA对于活动性结核病检测的灵敏度高和准确度较高，检测速度快，可以大大提高活动性结核病的诊断效率。
【技术实现步骤摘要】
m i croRNA及其在制备活动性结核病检测试剂中的应用
本专利技术涉及生物治疗领域，尤其涉及一种与结核感染相关的microRNA及其在制备活动性结核病检测试剂中的应用。
技术介绍
结核病仍然是威胁人类健康的主要传染病之一，每年全世界依然有几百万的新发结核病例。我国在结核 病的预防和控制上投入了大量人力物力，尽管我国广泛接种卡介苗(BCG)，并依照WHO的标准来治疗结核病患者，但每年死于结核的人数依然徘徊于主要传染病的前三位。特别是近年来，随着耐药结核以及耐多药结核菌株的流行，以及结核与艾滋合并感染的增多，使得结核问题变得更为复杂。持续升温的结核问题使得发达国家也加强了结核基础研究和应用研究方面的投入，包括临床快速诊断，改良或研发新疫苗，研发新型抗结核药物，以及研究结核杆菌同宿主免疫系统之间的相互作用机制。结核感染机体后，免疫反应中的调节子，比如细胞因子，细胞表面受体等等，一直是研究的重点。关注这些免疫调节子，不仅可以了解结核感染的具体致病机制，更可以利用相关因子作为诊断或治疗的靶标，来开发新型诊断技术或治疗手段。比如IFN-Y主要由CD4和CD8T细胞分泌，是指导THl型细胞免疫的主要细胞因子。目前基于IFN-Y释放试验诊断结核感染的方法，就是利用血液中特异性T淋巴细胞来识别TB抗原，释放IFN- Y的原理。在已有研究中发现，潜伏结核感染者血里IFN-Y含量高于活动性结核病人，另外一些炎症因子，比如TNF-a，IL-6，IP-10和MIP-1等等，也随着TB发病呈现不同的表达谱。而另一些特征性因子，比如细胞表面受体TLR2，TLR4等的表达也与结核发病相关。此外，结核病发生与否，主要受两种因素的影响，一为感染菌量及结核杆菌毒力的大小，另一为机体免疫抵抗力的高低。所以老年人与儿童等机体免疫抵抗力较低的人群较容易发生结核病。这与活动性结核患者体内调控系统可能存在着失调的情况有关，这其中可能包含一类特殊的调节子，microRNA,在结核感染中表达情况与调节作用都并不清楚，尚在研究中。MicroRNA是一种内源非编码的小RNA，在生物体内起着重要调控作用。它主要在转录后水平通过降解mRNA或抑制翻译的方式，抑制靶基因的表达。这种调控作用贯穿于细胞生长，分化，信号转导的各个环节。自microRNA被发现以来，研究日新月异，越来越多的研究发现microRNA在人类各种疾病中都具有特征表达谱，对于发病或疾病的进程具有预示作用。现有技术中，已经可以通过建立microRNA特征表达谱,来揭示microRNA与相关疾病之间的联系；更多的研究者希望能找到疾病特征的miciORNA，用来为疾病诊断服务；还有研究者把特殊的miCToRNA作为治疗的靶点，进行药物开发。现有的采用microRNA对疾病进行诊断或治疗的技术有:如由丹麦制药公司Santaris Pharma开发的LNA-antimiRTM_122已经进入了临床试验,是世界上首个在人体中试验的micro RNA药物；又如Hoekstra等找到miR_135a在冠状动脉疾病(CAD)患者中上调，而miR-147却在CAD患者中明显下调表达。MiR_146a，miR-155, miR-132和miR-16被报道在风湿病人PBMC中呈不同程度的上调表达。Dai等发现有16个microRNA是在系统性红斑狼疮患者的PBMC中差异表达。Voellenkle等对缺血性慢性心衰患者(ICM)、非缺血性心肌扩张型心衰患者(NIDCM)以及对照组PBMC中microRNA表达进行分析，发现miR-107，miR-139和miR-142_5p在两组患者中都是下调表达，而miR-142_3p和miR_29b仅在NIDCM患者中上调，同时miR-125b和miR-497仅在ICM患者中下调。由于microRNA检测技术复杂,不同的microRNA对疾病的表达差异较大，因此,亟待对与结核感染相关的microRNA进一步的研究。
技术实现思路
本专利技术旨在对与结核感染相关的microRNA进一步的研究,并提供了一种与结核感染有关的microRNA及其应用。本专利技术的第一方面提供了一种microRNA,所述的microRNA中包括序列为SEQ IDN0.1、SEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3、以及 SEQ ID N0.4 的 microRNA 中的一种或几种。所述的microRNA为与结核感染有关的microRNA。在本专利技术一个较为优选的实施例中，所述的SEQ ID N0.1 (本专利技术下文也称为“miR-132*，，)，其序列优选为 accguggcuuucgauuguuacu ；所述的SEQ ID N0.2 (本专利技术下文也称为“miR-630”)，其序列优选为aguauucuguaccagggaaggu ；所述的SEQ ID N0.3 (本专利技术下文也称为“miR-572”)，其序列优选为guccgcucggcgguggccca ；所述的SEQ ID N0.4 (本专利技术下文也称为“miR-362_3p ”)，其序列优选为aacacaccuauucaaggauuca。本专利技术的第二方面提供了一种所述的microRNA在制备活动性结核病血液检测试剂中的应用；其中，所述的活动性结核病检测试剂为试剂盒，所述试剂盒包括针对SEQ ID N0.1、SEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3、以及SEQ ID N0.4中的任意一种或几种microRNA序列所设计的PCR扩增引物。在本专利技术一个较为优选的实施例中，所述的活动性结核病血液检测试剂包括PCR扩增特异性引物，其中，所述的PCR扩增特异性引物包括针对SEQ IDN0.USEQ IDN0.2,SEQID N0.3、以及SEQ ID N0.4中的任意一种或几种microRNA序列所设计的引物；优选地，所述的PCR扩增特异性引物可为其所针对的HiiCT0RNA本身序列。优选地，所述的PCR扩增特异性引物的序列可包括SEQ ID N0.5、SEQ ID N0.6、SEQID N0.7、SEQ ID N0.8中的任意一种或几种的引物。 在本专利技术一个较为优选的实施例中，所述的活动性结核病血液检测试剂及其所包含的PCR扩增特异性引物还可包括序列SEQ ID N0.9。优选地，序列SEQ ID N0.9为本专利技术中所需使用计算microRNA相对表达倍数的内参基因U6的PCR扩增特异性引物。U6为U6snRNA的简称，是一种人体内源表达的核酸小RNA，在人体血细胞中表达量稳定，可作为microRNA表达相对倍数计算的重要的内源参比基因。在本专利技术一个较为优选的实施例中，所述的活动性结核病血液检测试剂还包括real-time PCR试剂盒和内参引物，以及microRNA反转录体系、缓冲液中的一种或两种；优选为包括real-time PCR试剂盒、内参引物、microRNA反转录体系和缓冲液。在本专利技术一个较为优选的实施例中，所述的PCR扩增特异性引物的序列包括SEQID N0.5、SEQ ID N0.6、SEQ ID N0.7、SEQ ID N0.8、SEQ ID N0.9 中的一种或几种。具体地:本专利技术所述SEQ ID N0.5 (本专利技术下文也称本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种microRNA，其特征在于，包括序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、以及SEQ ID No.4的microRNA中的一种或几种。
【技术特征摘要】
1.一种 microRNA，其特征在于，包括序列为 SEQ ID N0.1、SEQ IDN0.2、SEQ ID N0.3、以及SEQ ID N0.4的microRNA中的一种或几种。2.一种如权利要求1所述的microRNA在制备活动性结核病检测试剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的活动性结核病检测试剂为试剂盒，所述试剂盒包括针对SEQ ID N0.1、SEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3、以及SEQ ID N0.4中的任意一种或几种microRNA序列所设计的PCR扩增特异性引物。4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述的试剂盒还包括real-timePCR试剂盒、内参引物、microRNA反转录体系和缓冲液。5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：张文宏，吴晶，陈嘉臻，王森，
申请(专利权)人：复旦大学，复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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