本发明专利技术公开了一种病症结合的慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型的构建方法，包括以下步骤：取清洁级成年雄性SD大鼠，将大鼠置于净化笼中，温度为19-23℃，相对湿度40％-50％，自然采光，以大鼠标准饲料进行饲喂，自由饮水；适应性饲喂1周后，以每日所给饲料重量的0.2％的阿霉素进行灌胃，并以3.5mg/kg进行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周1次，连续6周即得。本发明专利技术的有益效果是：能够很好地模拟慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证，即符合西医慢性心力衰竭的病理特性(如LVEF、LVFS显著降低，BNP增高)，又能够表现出中医心气虚兼血瘀水肿证候表现，复制方法稳定性、重复性好，简单客观。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种动物模型的构建方法，尤其涉及一种病证结合的。
技术介绍
慢性心力衰竭是一种临床表现错综复杂的综合征，可以稳定、失代偿或恶化。中医理论认为:心衰病位主要在心，但与其他四脏相关联，其病机始动因素在于年老体虚、膏粱厚味、忧愁思虑、劳倦内伤等所致的脾失健运或脾气亏虚。然脾土生于心火，子病可及母，故脾失健运可诱发和加重心力衰竭的发生。慢性心力衰竭中医证候规律演变初期，首先表现为心气虚证或心气亏虚，症见心悸气短，胸闷自汗，动则加重，倦怠懒言，舌淡或有齿痕，苔薄白，脉弱或结代；其次演变发展为心气虚兼阴虚证，症见心悸气短，五心烦热，盗汗少寐，伴或不伴眩晕耳鸣，口干欲饮，舌红少苔或有裂痕，脉沉细。慢性心力衰竭后期，中医证候规律演变为心气亏虚兼血瘀证，症见唇口紫绀，胁下积聚，颈脉怒张，或见胸部刺痛，伴有或不伴有胸闷气短，乏力自汗，倦怠懒言。舌质紫暗，或有瘀斑，舌下络脉青紫，脉沉涩或结代；进而恶化形成心气亏虚兼血瘀水肿证，症见心悸气短，全身浮肿，尿少肢肿，颈脉显露，胁下积聚，甚则喘息不得卧，甚或汗出湿冷，四肢厥逆，舌质暗淡或绛紫，苔白滑，脉沉细，甚则脉微欲绝。动物实验是连接医学基础与临床的桥梁与纽带，而证候是中医的核心和灵魂，所以研发病证结合的动物模型是中医基础实验研究的必要手段。目前还未见有慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型的研究。虽然有采用阿霉素给大鼠隔日腹腔注射制作慢性心衰模型，但是不能完全模拟慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证，如胸痛、胸闷憋气、胁下痞块、浮肿尿少、形寒肢冷等。为了进一步深入探讨慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证本质及探寻其有效治疗中药，很有必要进行慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型的，建立和评价研究，为研究中医药在防治慢性心力衰竭中的疗效及作用机制提供必要的实验基础。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种病证结合的，能够很好地模拟慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证的SD大鼠模型，即符合西医慢性心力衰竭的病理特征(LVEF、LVFS显著降低，BNP增高)，又能够表现出心悸气短、胸闷憋气、胁下痞块、浮肿尿少、形寒肢冷的中医心气虚兼血瘀水肿证候表现。复制方法稳定性、重复性好，简单客观。为研究中医药在防治慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证中的疗效及作用机制提供必要的实验基础。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了一种，所述构建方法包括以下步骤:(I)取清洁级成年雄性SD大鼠，将大鼠置于净化笼中，温度为19_23°C，相对湿度40% -50%,自然采光，以大鼠标准饲料进行饲喂，自由饮水；(2)适应性饲喂I周后，以每日所给饲料重量的0.1% -0.3%的阿霉素进行灌胃；并以2-5mg/kg进行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周I次；连续6周即得。所述阿霉素优选地以每日所给饲料重量的0.2%进行灌胃；丙基硫氧嘧啶优选地以3.5mg/kg进行腹腔注射，每周I次。所述动物模型建模完成后，采用以下评价指标对动物模型进行评价:左室射血分数、左室内径缩短率、心率；心肌病理切片、心重指数；呼吸频率、肺重指数、肺脏病理切片；尿量；肝重指数、肝脏病理切片；力竭性游泳试验；耳温、血清BNP、T3、T4、TSH ;上述评价指标均采用盲法检测；[0011 ] 所述评价的具体方法如下:(I)在建模前、后分别测量大鼠左室射血分数、左室内径缩短率、心率、呼吸频率、尿量、耳温和力竭性游泳实验；(2)建模结束后，腹主动脉取血后，分离血清，并在_80°C的条件下保持，剖取心脏、肺脏、肝脏，洗去残血，滤纸吸干，称量后计算出心重指数、肺重指数、肝重指数；(3)取少量左室肌、肺脏、肝脏标本，福尔马林固定，HE染色后，采用盲法在显微镜下观察并镊片，通过ELISA法检测血清BNP、T3、T4、TSH ；若与建模前相比，建模后大鼠左室射血分数减少率大于等于50%，左室内径缩短率减少率大于等于50%，心率增加量大于等于50次/分，呼吸频率增加量大于等于20次/分，尿量减少量大于等于4ml/24h，耳温降低量大于等于0.5°C，力竭性游泳试验的时间减少量大于等于55min ；若建模后，大鼠血清BNP含量大于等于70hg/L, T3含量小于等于43.5ng/ml, T4含量小于等于60ng/ml, TSH含量大于等于25ng/ml ；若建模后，心重指数至少为5.5g/kg、肺重指数至少为5.5g/kg、肝重指数至少为30g/kg ；同时满足上述条件，则慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证的动物模型建模成功。所述左室射血分数(LVEF)、左室内径缩短率(LVFS)均采用Teichholz法测量；心率采用无创套尾法监测；呼吸频率的测量方法为上午8-10点熟睡时，记录20s呼吸次数，最终结果乘以3 ;尿量的检测方法为:统一灌胃5ml水后，收集24小时代谢笼尿液；力竭性游泳的方法为:大鼠连续反复下沉，沉入水下三次，每次超过5s时间，至力竭为止，统计游泳的总时间。本专利技术还提供了一种慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型的评价方法，所述评价方法采用以下评价指标对动物模型进行评价:LVEF、LVFS、心率；心肌病理切片、心重指数；呼吸频率、肺重指数、肺脏病理切片；尿量；肝重指数、肝脏病理切片；力竭性游泳试验；耳温、血清BNP、T3、T4、TSH ;上述评价指标均采用盲法检测；所述评价的具体方法如下:(I)在建模前、后分别测量大鼠LVEF、LVFS、心率、呼吸频率、尿量、耳温和力竭性游泳实验；(2)建模结束后，腹主动脉取血后，分离血清，并在_80°C的条件下保持，剖取心脏、肺脏、肝脏，洗去残血，滤纸吸干，称量后计算出心重指数、肺重指数、肝重指数；(3)取少量左室肌、肺脏、肝脏标本，福尔马林固定，HE染色后，采用盲法在显微镜下观察并镊片，通过ELISA法检测血清BNP、T3、T4、TSH ；若与建模前相比，建模后大鼠左室射血分数减少率大于等于50 %，左室内径缩短率减少率大于等于50%，心率增加量大于等于50次/分，呼吸频率增加量大于等于20次/分，尿量减少量大于等于4ml/24h，耳温降低量大于等于0.5°C，力竭性游泳试验的时间减少量大于等于55min ；若建模后，大鼠血清BNP含量大于等于70hg/L, T3含量小于等于43.5ng/ml, T4含量小于等于60ng/ml, TSH含量大于等于25ng/ml ；若建模后，心重指数至少为5.5g/kg、肺重指数至少为5.5g/kg、肝重指数至少为30g/kg ；同时满足上述条件，则慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证的动物模型建模成功。所述LVEF、LVFS均采用Teichholz法测量；心率采用无创套尾法监测；呼吸频率的测量方法为上午8-10点熟睡时，记录20s呼吸次数，最终结果乘以3 ;尿量的检测方法为:统一灌胃5ml水后，收集24小时代谢笼尿液；力竭性游泳的方法为:大鼠连续反复下沉，沉入水下三次，每次超过5s时间，至力竭为止，统计游泳的总时间。本专利技术的有益效果是:与传统慢性心力衰竭的动物模型相比，本专利技术采用双重因子攻击法构建的动物模型，能够很好地模拟慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证，即符合西医慢性心力衰竭的病理特征(LVEF、LVFS显著降低，BNP增高)，又能够表现出心悸气短、胸闷憋气、胁下痞块、浮肿本文档来自技高网...
【技术保护点】
慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：(1)取清洁级成年雄性SD大鼠，将大鼠置于净化笼中，温度为19‑23℃，相对湿度40％‑50％，自然采光，以大鼠标准饲料进行饲喂，自由饮水；(2)适应性饲喂1周后，以每日所给饲料重量的0.1％‑0.3％的阿霉素进行灌胃；并以2‑5mg/kg进行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周1次；连续6周即得。
【技术特征摘要】
1.慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤: (1)取清洁级成年雄性SD大鼠，将大鼠置于净化笼中，温度为19-23°c，相对湿度40% -50%,自然采光，以大鼠标准饲料进行饲喂，自由饮水； (2)适应性饲喂I周后，以每日所给饲料重量的0.1% -0.3%的阿霉素进行灌胃；并以2-5mg/kg进行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周I次；连续6周即得。2.根据权利要求1所述的慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型的构建方法，其特征在于，所述阿霉素以每日所给饲料重量的0.2%进行灌胃；丙基硫氧嘧啶以3.5mg/kg进行腹腔注射，每周I次。3.根据权利要求1或2所述的慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型，其特征在于，所述动物模型建模完成后，采用以下评价指标对动物模型进行评价:左室射血分数、左室内径缩短率、心率；心肌病理切片、心重指数；呼吸频率、肺重指数、肺脏病理切片；尿量；肝重指数、肝脏病理切片；力竭性游泳试验；耳温、血清8册333433!1;上述评价指标均采用盲法检测； 所述评价的具体方法如下: (1)在建模前、后分别测量大鼠左室射血分数、左室内径缩短率、心率、呼吸频率、尿量、耳温和力竭性游泳实验； (2)建模结束后，腹主动脉取血后，分离血清，并在_80°C的条件下保持，剖取心脏、肺脏、肝脏，洗去残血 ，滤纸吸干，称量后计算出心重指数、肺重指数、肝重指数； (3)取少量左室肌、肺脏、肝脏标本，福尔马林固定，HE染色后，采用盲法在显微镜下观察并镊片，通过ELISA法检测血清BNP、T3、T4、TSH ； 若与建模前相比，建模后大鼠左室射血分数减少率大于等于50 %，左室内径缩短率减少率大于等于50%，心率增加量大于等于50次/分，呼吸频率增加量大于等于20次/分，尿量减少量大于等于4ml/24h，耳温降低量大于等于0.5°C，力竭性游泳试验的时间减少量大于等于55min ； 若建模后，大鼠血清BNP含量大于等于70hg/L，T3含量小于等于43.5ng/ml，T4含量小于等于60ng/ml, TSH含量大于等于25ng/ml ； 若建模后，心重指数至少为5.5g/kg、肺重指数至少为5.5g/kg、肝重指数至少为30g/kg ； 同时满足上述条件,则慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证的动物模型建模成功。4.根据权利要求1-3任一项所述的慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型，其特征在于，所述左室射血分数、左室内径缩短率均采用Teichholz法测量；心率采用无创套尾法监测。5.根据权利要求1-4任一项所述的慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证动物模型，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：周杰，葛明，王营，
申请(专利权)人：周杰，
类型：发明
国别省市：山东;37
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