一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法技术

一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，属于材料化学技术领域。本发明专利技术通过纳米金的表面修饰、纳米金转染细胞、细胞内纳米金的手性表征等步骤组装等离子手性纳米聚集体。本发明专利技术利用金纳米粒子独特的物理化学性质，当其转染细胞后，能够在特定的时间段内使其在细胞内部发生聚集，从而产生强烈的圆二色信号。本发明专利技术提供了纳米金表面修饰的具体方法，得到了性质稳定，手性信号强烈的纳米金聚集组装体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于材料化学
。
技术介绍
细胞作为生命活动的基本单元，其中伴随着许多生化反应的发生，采用有效的手段对这些生理过程的监测，对探究生物体基本活动以及疾病预防方面具有积极意义。利用等离子纳米材料在细胞内部的结构变化及其与手性配体偶极之间强烈的耦合，能够使得纳米材料在细胞内部表现出强烈的圆二色性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了，得到了性质稳定，手性信号强烈的纳米金聚集组装体。本专利技术的技术方案，，步骤为: (1)纳米金的表面修饰:利用柠檬酸还原法得到的金纳米粒子，将其与巯基修饰的聚乙二醇PEG 5000、聚乙二醇PEG 1000和穿膜肽TAT按一定比例混匀后，室温震荡24h，获得表面修饰的金纳米粒子； (2)纳米金转染细胞:将步骤(I)获得的表面修饰的金纳米粒子离心重悬于细胞培养液中，并与一定数量的细胞共同培养一段时间后，用胰蛋白酶消化细胞，得到细胞内含有金纳米粒子的细胞悬液； (3)细胞内纳米金的手性表征:对步骤(3)中得到的细胞悬液进行生物电镜表征和圆二色性表征。所述细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，具体步骤如下: (1)纳米金表面的修饰:取100mL、2nM、20nm的金纳米粒子以8000rpm离心IOmin,并重悬在IOmL 0.0lM pH7.4的磷酸盐缓冲液PBS中；按金纳米粒子:PEG5000: PEG1000: TAT为1: 1000: 100: 100的摩尔比同时加入金纳米粒子溶胶中；室温震荡24h后，8000rpm离心IOmin,沉淀重悬于超纯水中,得到表面修饰的纳米金溶胶； (2)纳米金转染细胞:将步骤(I)制备的表面修饰的纳米金溶胶重悬于细胞培养液中，使金纳米粒子的终浓度为5nM ;将细胞接种于6孔板中，取其中I个孔使其中的细胞数量达到IO4个，培养24h后去掉培养液，再向每孔加入上述含有纳米金溶胶的细胞培养液lmL，37°C孵育36h后，清除培养液，用PBS反复洗涤，将洗涤后的细胞用0.25%胰蛋白酶消化5min, IOOOrpm离心lOmin，沉淀重悬于IOOyL PBS中，得到细胞内含有金纳米粒子的细胞悬液； (3)细胞内纳米金的手性表征:采用生物透射电镜和圆二色谱法对步骤(2)中得到的细胞悬液进行表征。所述穿膜肽TAT的多肽序列为YGRKKRRQRR RC。表1多肽的编号、序列及长度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，其特征在于步骤为：（1）纳米金的表面修饰：利用柠檬酸还原法得到的金纳米粒子，将其与巯基修饰的聚乙二醇PEG 5000、聚乙二醇PEG 1000和穿膜肽TAT按一定比例混匀后，室温震荡24h，获得表面修饰的金纳米粒子；（2）纳米金转染细胞：将步骤（1）获得的表面修饰的金纳米粒子离心重悬于细胞培养液中，并与一定数量的细胞共同培养一段时间后，用胰蛋白酶消化细胞，得到细胞内含有金纳米粒子的细胞悬液；（3）细胞内纳米金的手性表征：对步骤（3）中得到的细胞悬液进行生物电镜表征和圆二色性表征。

【技术特征摘要】
1.一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，其特征在于步骤为: (1)纳米金的表面修饰:利用柠檬酸还原法得到的金纳米粒子，将其与巯基修饰的聚乙二醇PEG 5000、聚乙二醇PEG 1000和穿膜肽TAT按一定比例混匀后，室温震荡24h，获得表面修饰的金纳米粒子； (2)纳米金转染细胞:将步骤(I)获得的表面修饰的金纳米粒子离心重悬于细胞培养液中，并与一定数量的细胞共同培养一段时间后，用胰蛋白酶消化细胞，得到细胞内含有金纳米粒子的细胞悬液； (3)细胞内纳米金的手性表征:对步骤(3)中得到的细胞悬液进行生物电镜表征和圆二色性表征。2.根据权利要求1所述细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，其特征在于具体步骤如下: (1)纳米金的表面修饰:取100mL、2nM、20nm的金纳米粒子以8000rpm离心IOmin,并重悬在IOmL 0.0lM pH7.4的磷酸盐缓冲液PBS中；按金纳米粒子:PEG5000: PEG1000: TA...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐丽广，胥传来，孙茂忠，匡华，马伟，刘丽强，宋珊珊，吴晓玲，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32