【技术实现步骤摘要】
来源于真菌的脂肪酸脱氢酶专利技术背景本申请要求申请号为60/382,391、申请日为2002年5月22日，以及申请号为60/453,125、申请日为2003年3月7日的美国临时专利申请的优先权。特别将上述每个申请公开的全部内容都作为本申请的参考。1.专利
本专利技术主要涉及调节长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA’s)中双键的数目和位置的脱氢酶、及其使用方法和组合物。特别的是，本专利技术涉及利用脱氢酶改善脂肪酸的特性和在真菌中已确定的编码这些脱氢酶的核酸。2.相关技术的描述在绝大多数有机体中，脂肪酸生物合成的主要产物是16-和18-碳的化合物。这些脂肪酸的链长度与不饱和程度的相对比率随物种不同而相差很大。例如哺乳动物主要产生饱和的和单饱和的脂肪酸，然而绝大多数高等植物产生含有一个、两个或三个双键的脂肪酸，后面两个就包括多不饱和脂肪酸(PUFA’s)。PUFA’s的两种主要类别是Ω-3脂肪酸(也用“n-3”脂肪酸代表)，以二十碳五烯酸为例(EPA，20：4，n-3)；以及Ω-6脂肪酸(也用“n-6”脂肪酸代表)，以花生四烯酸为例(ARA，20：4，n-6)为例。...
【技术保护点】
一种分离的多核苷酸，其含有编码一种多肽的核酸序列，所述多肽具有在脂肪酸分子的碳１５位上脱氢的脱氢酶活性，其中该多核苷酸选自：（ａ）编码ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤＮＯ：５或ＳＥＱＩＤＮＯ：３４的多肽的多核苷酸；（ｂ）含有ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４或ＳＥＱＩＤＮＯ：３３的核酸序列的多核苷酸；（ｃ）与ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４或ＳＥＱＩＤＮＯ：３３或其互补序列中的一种或多种，在５×ＳＳＣ、５０％甲酰胺和４２℃的条件下杂交的多核苷酸；和（ｃ）编码具有至少一个下述氨基酸基序的多肽的真菌多核苷酸：ＴｒｐＩｌｅＬｅｕＡ...
【技术特征摘要】
US 2002-5-22 60/382,391;US 2003-3-7 60/453,1251.一种分离的多核苷酸，其含有编码一种多肽的核酸序列，所述多肽具有在脂肪酸分子的碳15位上脱氢的脱氢酶活性，其中该多核苷酸选自：(a)编码SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：34的多肽的多核苷酸；(b)含有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4或SEQ IDNO：33的核酸序列的多核苷酸；(c)与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4或SEQ IDNO：33或其互补序列中的一种或多种，在5×SSC、50％甲酰胺和42℃的条件下杂交的多核苷酸；和(c)编码具有至少一个下述氨基酸基序的多肽的真菌多核苷酸： TrpIleLeuAlaHisGluCysGlyHisGlyAlaSerPhe(WILAHECGHGASF)(SEQ ID NO：6)；LeuAlaHisGluCysGlyHis(LAHECGH)(SEQ ID NO：7)；HisSerPheLeuLeuValProTyrPheSerTrpLys(HSFLLVPYFSWK)(SEQ ID NO：8)；LeuLeuValProTyrPheSerTrpLys(LLVPYFSWK)(SEQ ID NO：9)；His(His/Ala)ArgHisHisArg(Phe/Tyr)ThrThr(H(H/A)RHHR(F/Y)TT)(SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：20，或SEQ ID NO：21)；TrpValHisHisTrpLeuValAlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThrHis(WVHHWLVAITYL(H/Q)HTH)(SEQ ID NO：11)；AlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThr(AITYL(H/Q)HT)(SEQ ID NO：12)；GlyAlaLeuAlaThrValAspArg(GALATVDR)(SEQ ID NO：13)或HisValValHisHisLeuPheXaaArgIleProPheTyr(HVVHHLFXRIPFY)(SEQ IDNO：14或SEQ ID NO：22).2.权利要求1所述分离的多核苷酸，其中所述的多核苷酸选自接合菌门、担子菌门和子囊菌门。3.权利要求1所述分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸选自如下种：粗糙链孢霉、构巢曲霉和灰葡萄孢。4.权利要求1所述分离的多核苷酸，其中多核苷酸编码具有至少一个下述氨基酸基序的多肽：IrpIleLeuAlaHisGluCysGlyHisGlyAlaSerPhe(WILAHECGHGASF)(SEQ ID NO：6)；LeuAlaHisGluCysGlyHis(LAHECGH)(SEQ ID NO：7)；HisSerPheLeuLeuValProTyrPheSerTrpLys(HSFLLVPYFSWK)(SEQ ID NO：8)；LeuLeuValProTyrPheSerTrpLys(LLVPYFSWK)(SEQ ID NO：9)；His(His/Ala)ArgHisHisArg(Phe/Tyr)ThrThr(H(H/A)RHHR(F/Y)TT)(SEQ ID NO：10，SEQ IDNO：19，SEQ ID NO：20，或SEQ ID NO：21)；TrpValHisHisTrpLeuValAlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThrHis(WVHHWLVAITYL(H/Q)HTH)(SEQ ID NO：11)；AlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThr(AITYL(H/Q)HT)(SEQ ID NO：12)；GlyAlaLeuAlaThrValAspArg(GALATVDR)(SEQ ID NO：13)或HisValValHisHisLeuPheXaaArgIleProPheTyr(HVVHHLFXRIPFY)(SEQ ID NO：14或SEQID NO：22).5.权利要求1所述分离的多核苷酸，其中多核苷酸编码SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：34的多肽。6.权利要求1所述分离的多核苷酸，其中多核苷酸包含SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：33的核酸序列。7.权利要求1所述分离的多核苷酸，其中多核苷酸在5×SSC、50％的甲酰胺和42℃的条件下与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4或SEQ ID NO：33中的一种或多种杂交。8.一种含有权利要求1所述分离的多核苷酸的重组载体。9.权利要求8所述的重组载体，其进一步包含至少一种选自以下的附加序列：(a)与多核苷酸可操作性连接的调控序列；(b)与多核苷酸可操作性连接的选择标记；(c)与多核苷酸可操作性连接的标记序列；(d)与多核苷酸可操作性连接的纯化部分；和(e)与多核苷酸可操作性连接的靶序列。10.权利要求8所述的重组载体，其被进一步限定为含有与所述分离的多核苷酸可操作性连接的启动子。11.权利要求10所述的重组载体，其中启动子是发育调控的、细胞器特异性的、组织特异性的，组成型的或细胞特异性的启动子。12.权利要求10所述的重组载体，其中所述启动子选自由35SCaMV、34S FMV、Napin、7S、Glob和Lec组成的组。13.权利要求8所述的重组载体，其被限定为一种分离的表达盒。14.权利要求8所述的重组载体，其被进一步限定为含有编码具有在脂肪酸分子碳6位脱氢的脱氢酶活性的多肽的核酸序列，和/或编码具有在脂肪酸分子碳12位脱氢的脱氢酶活性的多肽的核酸序列。15.一种分离的多核苷酸，其含有编码具有在脂肪酸分子碳12位脱氢的脱氢酶活性的多肽的核酸序列，该多核苷酸选自：(a)编码SEQ ID NO：32或SEQ ID NO：40的多肽的多核苷酸；(b)含有SEQ ID NO：31或SEQ ID NO：39的核酸序列的多核苷酸；和(c)与SEQ ID NO：31或SEQ ID NO：39或其互补序列中一种或多种，在5×SSC、50％的甲酰胺和42℃的条件下杂交的多核苷酸；和16.权利要求15所述分离的多核苷酸，其中所述的多核苷酸选自接合菌门、担子菌门和子囊菌门。17.权利要求15的分离的多核苷酸，其中多核苷酸选自粗糙链孢霉和灰葡萄孢。18.一种含有权利要求15所述的分离的多核苷酸的重组载体。19.一种权利要求18所述的重组载体，其进一步被限定为含有一种编码具有在脂肪酸分子碳6位脱氢的脱氢酶活性的多肽的核酸序列，和/或一种编码具有在脂肪酸分子碳15位脱氢的脱氢酶活性的多肽的核酸序列。20.真菌多肽或其片段，其具有在脂肪酸分子碳15位脱氢的脱氢酶活性并含有至少一种下述的氨基酸基序：TrpIleLeuAlaHisGluCysGlyHisGlyAlaSerPhe(WILAHECGHGASF)(SEQ ID NO：6)；LeuAlaHisGluCysGlyHis(LAHECGH)(SEQ ID NO：7)；HisSerPheLeuLeuValProTyrPheSerTrpLys(HSFLLVPYFSWK)(SEQ ID NO：8)；LeuLeuValProTyrPheSerTrpLys(LLVPYFSWK)(SEQ ID NO：9)；His(His/Ala)ArgHisHisArg(Phe/Tyr)ThrThr(...
【专利技术属性】
技术研发人员：VM乌尔辛，T弗尔克，B弗罗曼，
申请(专利权)人：孟山都技术有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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