胰岛分离方法及装置制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种胰岛分离方法及装置，所述方法包括如下步骤：胰腺的前处理；加消化液；注水；消化；检样；收集消化液；二次消化；离心；沉淀重悬。本发明专利技术涉及的胰岛分离方法，利用具有双层空心壁、且底部具有两层滤网的消化罐，通过其具有的双层空心壁中注入的恒定温度的水，保持消化灌内的温度恒定，使得胰腺的消化比较完全，且胰岛的得率较高，且成本低，操作简便。

【技术实现步骤摘要】
胰岛分离方法及装置
本专利技术涉及生物医学领域，特别是涉及一种胰岛分离方法及装置。
技术介绍
胰岛pancreatic islets (Iangerhans)是胰的内分泌部分,是许多大小不等和形状不定的细胞团，散布在胰的各处，可控制碳水化合物的代谢；如胰岛素分泌不足则患糖尿病。胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的主要激素。而现有分离技术主要应用机械分离法，持续应用机械力量和消化液流动的冲击力来冲击胰腺达到消化的目的。这种分离方法快速彻底，但是分离后的胰岛容易破碎，不适合哺乳动物的胰岛分离，比如成年猪和人的胰岛分离。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种分离纯度高，分离效果好且操作简便的胰岛分离方法。一种胰岛分离方法，包括如下步骤:(I)胰腺的前处理:选取具有双层空心壁的消化罐，且所述消化灌的底部具有两层滤网；往修整后的胰腺的胰管内灌注消化液后放入所述消化灌中，所述消化液为胶原酶消化液；(2)加消化液:向步骤(1)的消化灌中加入胶原酶消化液，并密封所述消化灌，所述胶原酶消化液的加入量为覆盖所述胰腺；(3)注水:注水至所述消化罐的双层空心壁中，所述水温为35~40°C，并保持温度的恒定；(4)消化:消化3-10分钟后，开始晃动消化罐，继续消化10-30分钟；(5)检样:取消化罐内的消化液，加入染色液，光学显微镜下观察胰岛，当游离胰岛≥60%时，停止消化，若未达到60%，则继续消化；(6)收集消化液:收集消化罐内的消化液，将收集的消化液放入HBSS和10%猪血清的混合物中保存于1-10°C ；(7) 二次消化:重新加入胶原酶消化液至消化罐里，继续消化未消化完的胰腺，消化后收集消化液，并合并收集的消化液；(8)离心:将合并收集的消化液离心，收集沉淀，所得沉淀用HBSS液洗涤；(9)沉淀重悬:用HBSS和9-11 (V/V) %猪血清的混合物中重悬沉淀，梯度离心纯化胰岛，得到分离后的胰岛。在其中一个实施例中，步骤(3)所述的水温为37 °C。在其中一个实施例中，步骤(4)所述的消化过程还包括将所述消化灌倒置。在其中一个实施例中，步骤(6)所述的染色液为DTZ染色液。在其中一个实施例中，步骤(4)所述的消化灌的晃动频率为每分钟3-5次。 本专利技术还提供了一种胰岛分离装置，所述装置技术方案如下所述。一种胰岛分离装置，包括前置箱、消化系统、收液箱及两个蠕动泵；所述消化系统具有消化罐，所述消化罐的内部具有第一滤网层及第二滤网层，所述消化罐具有双层空心壁，所述双层空心壁的外壁具有进水口和出水口，所述消化罐的底部具有入口及出口；所述前置箱、蠕动泵及消化罐的入口依次连通，所述消化罐的出口、蠕动泵及收液箱依次连通；所述第一滤网层的网孔尺寸为600-1000 μ m，所述第二滤网层的网孔尺寸为200-600 μ mD在其中一个实施例中，所述消化罐的底部具有出口，所述出口连接有T-型连接管的一个管口，所述T- 型连接管的另两个管口分别连接有所述蠕动泵，且所述管口与所述蠕动泵之间设有阀门。在其中一个实施例中，所述消化罐的罐底部呈漏斗状。在其中一个实施例中，所述漏斗状的罐底部中间设有所述出口。在其中一个实施例中，所述消化罐的顶部匹配有顶盖。在其中一个实施例中，所述顶盖的边缘具有突出边，所述突出边将所述双层空心壁覆盖。在其中一个实施例中，所述双层空心壁的外壁具有两个进水口和两个出水口。在其中一个实施例中，所述两个进水口设于所述消化罐的一侧上端和下端，所述两个出水口设于所述消化罐的相对一侧的上端和下端，使得所述两个进水口与两个出水口处于消化罐主轴的两端。在其中一个实施例中，所述第一滤网层的网孔尺寸为750-850 μ m，所述第二滤网层的网孔尺寸为350-450 μ m。在其中一个实施例中，所述双层空心壁之间的厚度为4_8cm。本专利技术涉及的胰岛分离方法，具有以下有益效果:(I)本专利技术涉及的胰岛分离方法，利用具有双层空心壁、且底部具有两层滤网的消化罐，通过其具有的双层空心壁中注入的恒定温度的水，保持消化灌内的温度恒定，使得胰腺的消化比较完全，且胰岛的得率较高。(2)本专利技术涉及的胰岛分离方法，利用具有双层空心壁、且底部具有两层滤网的消化罐，设备简单，不需要额外复杂昂贵的设备，极大程度上节约了成本，且本专利技术设备生产简单,生产成本低。(3)本专利技术涉及的胰岛分离方法，操作简便，不需要复杂的操作方法，在常规的环境下即可进行，且消化过程人人工干预少，便于节省人力，节省时间。本专利技术所使用的胰岛分离装置，通过前置箱、消化系统、收液箱及两个蠕动泵的相互配合使用，且通过具有第一滤网层及第二滤网层的消化罐，达到胰腺消化的目的；本专利技术分离的胰岛纯度高，分离效果好，成本低，可以连续操作消化分离，直到消化完全，且操作简便。【附图说明】图1为本专利技术胰岛分离装置的主视图；图2为本专利技术胰岛分离装置的消化系统主视图；图3本专利技术胰岛分离装置的消化系统侧视图。附图标记说明10、前置箱；20、消化系统；30、消化罐；32、进水口 ；34、出水口 ；36、出口 ；38、双层空心壁；40、T-型连接管；50、蠕动泵；60、收液箱；70、硅胶管；72、夹子；80、第一滤网层；82、第二滤网层。【具体实施方式】以下将结合实施例及附图对本专利技术做进一步的说明。本专利技术所述胰岛分离方法使用的胰岛分离装置入下所述。本实施例提供了一种胰岛分离装置，且本专利技术通过以下胰岛分离装置实现。—种胰岛分离装置，参见图1-图3，包括前置箱10、消化系统20、收液箱60、T_型连接管40及两个蠕动泵50 ;所述T-型连接管40具有三个管口，分别为第一管口、第二管口及第三管口，呈T型，其规格为Nalgene Baxter Cat#T5342_3，T-型连接管40的尺寸规格如下:外径2.5cm,内径2cm，三个臂长均为3cm ;所述消化系统20具有消化罐30，所述消化罐30呈圆筒状，其规格 如下:消化罐30内径12cm，外径18cm，高度6cm ;所述消化罐30的内部具有第一滤网层80及第二滤网层82，所述第一滤网层80的网孔大小尺寸为800 μ m,所述第二滤网层82的网孔大小尺寸为400 μ m。所述消化罐30具有双层空心壁38，所述双层空心壁38之间的间隔厚度为4_8cm，所述双层空心壁38的内壁厚度为2mm，外壁厚度为3mm，所述双层空心壁38的外壁具有两个进水口 32和两个出水口 34，两个进水口 32和两个出水口 34均连接有管道，所述两个进水口 32和两个出水口 34处的管道的规格相同，如下所示:内径均为2cm，外径均有2.5cm,长度4cm ;所述两个进水口 32设于所述消化罐30的一侧上端和下端，所述两个出水口 34设于所述消化罐30的相对一侧的上端和下端，使得所述两个进水口 32与两个出水口 34处于消化罐30直径的两端点处，所述两个进水口 32均连接于水泵；所述消化罐30的罐底部呈漏斗状，所述漏斗状的罐底部中间设有所述出口 36，所述出口 36通过硅胶管70连接于所述T-型连接管40的第三管口，所述T-型连接管40的第一管口、第二管口分别通过硅胶管70连接有所述蠕动泵50，所述硅胶管70的外径为2.5cm,内径为2cm，长度为60-80cm ;且所述管口与所述蠕动泵50之间设有夹子7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰岛分离方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)胰腺的前处理：选取具有双层空心壁的消化罐，且所述消化灌的底部具有两层滤网；往修整后的胰腺的胰管内灌注消化液后放入所述消化灌中，所述消化液为胶原酶消化液；(2)加消化液：向步骤(1)的消化灌中加入胶原酶消化液，并密封所述消化灌，所述胶原酶消化液的加入量为覆盖所述胰腺；(3)注水：注水至所述消化罐的双层空心壁中，所述水温为35～40℃，并保持温度的恒定；(4)消化：消化3‑10分钟后，开始晃动消化罐，继续消化10‑30分钟；(5)检样：取消化罐内的消化液，加入染色液，光学显微镜下观察胰岛，当游离胰岛≥60％时，停止消化，若未达到60％，则继续消化；(6)收集消化液：收集消化罐内的消化液，将收集的消化液放入HBSS和9‑11(V/V)％猪血清的混合物中保存于1‑10℃；(7)二次消化：重新加入胶原酶消化液至消化罐里，继续消化未消化完的胰腺，消化后收集消化液，并合并收集的消化液；(8)离心：将合并收集的消化液离心，收集沉淀，所得沉淀用HBSS液洗涤；(9)沉淀重悬：用HBSS和10％猪血清的混合物中重悬沉淀，梯度离心纯化胰岛，得到分离后的胰岛。

【技术特征摘要】
1.一种胰岛分离方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)胰腺的前处理:选取具有双层空心壁的消化罐，且所述消化灌的底部具有两层滤网；往修整后的胰腺的胰管内灌注消化液后放入所述消化灌中，所述消化液为胶原酶消化液； (2)加消化液:向步骤(1)的消化灌中加入胶原酶消化液，并密封所述消化灌，所述胶原酶消化液的加入量为覆盖所述胰腺； (3)注水:注水至所述消化罐的双层空心壁中，所述水温为35~40°C，并保持温度的恒定; (4)消化:消化3-10分钟后，开始晃动消化罐，继续消化10-30分钟； (5)检样:取消化罐内的消化液，加入染色液，光学显微镜下观察胰岛，当游离胰岛≥60%时，停止 消化，若未达到60%，则继续消化； (6)收集消化液:收集消化罐内的消化液，将收集的消化液放入HBSS和9-11(V/V) %猪血清的混合物中保存于1-1o°c ； (7)二次消化:重新加入胶原酶消化液至消化罐里，继续消化未消化完的胰腺，消化后收集消化液，并合并收集的消化液； (8)离心:将合并收集的消化液离心，收集沉淀，所得沉淀用HBSS液洗涤； (9)沉淀重悬:用HBSS和10%猪血清的混合物中重悬沉淀，梯度离心纯化胰岛，得到分离后的胰岛。2.根据权利要求1所述的胰岛分离方法，其特征在于，步骤(3)所述的水温为37±0.5。。。3.根据权利要求1或2所述的胰岛分离方法，其特征在于，步骤(4)所述的消化过程还包括将所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋小峰，钱滔来，俞晓立，杨学伟，薛平，陈德，
申请(专利权)人：蒋小峰，钱滔来，
类型：发明
国别省市：广东;44