【技术实现步骤摘要】
—种检测TPD52L1蛋白的试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及化学发光免疫分析
,特别涉及一种检测TTO52L1蛋白的试剂盒及其制备方法,结合了生物素-亲和素免疫放大技术和化学发光免疫分析技术。
技术介绍
TPD52L1蛋白是由TTO52L1基因编码表达的蛋白,是D52系列基因家族的一员,在人类乳腺癌细胞中表达。编码蛋白包含一个卷曲螺旋域。在细胞增殖和钙信号蛋白质起作用。它还交互丝裂原活化蛋白激酶激酶5(MAP3K5/ASK1)和积极调节MAP3K5,诱导细胞凋亡。在科研和生产过程中,需要测定溶液中TTO52L1蛋白含量变化,来监控实验条件和监控生产过程。目前TPD52L1蛋白测定方法有胶体金免疫层析(GICA);蛋白质印迹(WB);酶联免疫吸附试验(ELISA),化学发光法免疫分析(CLIA) ;GICA、ELISA、WB的优点是相对成本低廉,缺点是灵敏度低,TPD52L1蛋白含量少的情况下检测不出,CLIA检测灵敏度比上述方法高,但还是不能满足科研上对TPD52L1蛋白超微量检测的需要。为了适应科研和生产上对检测灵敏度的更高要求,需要对化学发光技术进行创新。1977年,Halmann将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应结合起来,建立了化学发光免疫分析法(CLIA)。经过几十年的发展。目前根据标记物的不同,化学发光免疫分析可分以下四个类型:(I)以辣根过氧化物酶(HRP)为标记物的酶促化学发光系统。该系统的发光底物为鲁米诺及其衍生物,在氧化剂存在下,HRP催化鲁米诺及其衍生物发光,波长425nm。苯酚类化合物可增强其发光 ...
【技术保护点】
一种检测TPD52L1蛋白的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:1)TPD52L1蛋白校准品;2)链亲和素偶联的固相载体;3)生物素化的TPD52L1蛋白配体;4)5,10,15?三(4?吡啶基)?20?R?羧基卟啉偶联标记的TPD52L1蛋白配体;以及5)上述5,10,15?三(4?吡啶基)?20?R?羧基卟啉所作用的化学发光底物。
【技术特征摘要】
1.一种检测TPD52L1蛋白的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括: DTPD52L1蛋白校准品; 2)链亲和素偶联的固相载体; 3)生物素化的TTO52L1蛋白配体; 4)5,10,15-三(4-吡啶基)-20-R-羧基卟啉偶联标记的TPD52L1蛋白配体;以及 5)上述5,10,15-三(4-吡啶基)-20-R-羧基卟啉所作用的化学发光底物。2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述TTO52L1蛋白为TTO52L1基因编码表达的蛋白。3.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述TTO52L1蛋白校准品为TTO52L1蛋白配制的校准品冻干品,校准品内所用的保护基质蛋白为牛血清白蛋白,卵清蛋白。4.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述链亲和素偶联的固相载体为磁性颗粒,塑料颗粒。5.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述TPD52L1蛋白配体为可以与TPD52L1蛋白特异性结合反应的单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体、蛋白质、大分子有机化合物。6.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述5,10,15-三(4-吡啶基)-20-R-羧基卟啉结构式如(I)所示: 7.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述5,10,15-三(4-吡啶基)-20-R-羧基卟啉偶联标记的TPD52L1蛋白配体所用的偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC),N,K - 二环己基碳二亚胺(DCC)。8.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述5,10,15-三(4-吡啶基)-20-R-羧基卟啉所作用的化学发光底物为吖啶酯、吖啶磺酰胺。9.一种制备权利要求1所述试剂盒的方法,其特征在于包括以下步骤: 1)以TPD52L1蛋白纯品配制TPD52L1蛋白校准品; 2)使链亲和素偶联固相载体;3)使TPD52L1蛋白配体生物素化; 4)用5,10,15-三(4-吡啶基)-20-R-羧基卟啉偶联标记TPD52L1蛋白配体; 5)配制化学发光底物液; 6)分装上述TPD52L1蛋白校准品、链亲和素偶联固相载体、生物素化的TPD52L1蛋白配体、5,10,15-三(4-吡啶基)-20-R-羧基卟啉偶联标记的TTO52L1蛋白配体和化学发光底物液;以及 7)组装为成品。10.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述制备TPD52L1蛋白校准品的步骤I)采用以下方法: 配制含牛血清白蛋白2%,卵清蛋白1.5%,水解明胶0.5%,2.5%蔗糖的0.01M PB缓冲溶液为校准品基质液,用基质液配制含不同浓度TTO52L1蛋白的校准品,用西林瓶分装.1mL/瓶,冻干处理后,...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈秀发,李勇,徐海伟,胡庆锋,常立峻,
申请(专利权)人:苏州长光华医生物试剂有限公司,
类型:发明
国别省市:
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