应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的技术方法技术

本发明专利技术的应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的技术方法，其特征在于：应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的技术方法，将待接种的鱼类浸泡于１×１０↑［６］－１×１０↑［９］细胞／毫升的浓度的疫苗溶液后，用中低频（２０－１０００ＫＨｚ）中低强度（０．０１－１００Ｗ／ｃｍ↑［２］）的超声波作用０．１－３０分钟。本发明专利技术真正做到了注射法的免疫效果、浸泡法的操作便利，达到简易、经济、快速、安全、高效的免疫接种要求。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

Application of ultrasonic technique in immunization of fish vaccine

The invention of the application of ultrasonic technique for fish vaccine, which is characterized in that: the application of ultrasonic fish using technique of immunization, the concentration will be vaccinated fish soaked in 1 * 10 = 6 - 1 * 10 = 9 cells / ml vaccine solution. With a low frequency (20 1000KHz) and low intensity (0.01 - 100W / cm = 2) 0.1 - 30 minutes of ultrasonic effect. The invention has the advantages that the immunization effect of the injection method and the operation of the immersion method are convenient, and the requirement of simple, economical, rapid, safe and effective immunization is achieved.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术属于生命学科的水产领域。随着水产养殖集约化程度的不断提高，鱼类疾病所造成的危害也日益严重，鱼病的预防与治疗已成为水产养殖成功与否的关键。过去，鱼类疾病的防治主要是利用抗生素等药物，但抗生素等药物的大量使用已产生了巨大的负面影响，目前已有许多国家对水产养殖中抗生素等化学药物的使用作出了严格的限制。鱼用疫苗因具有安全、卫生、高效等显著特点，是迄今为止替代化学药物用于鱼病防治的最好方法，目前，全球已先后研制了数十种工业化生产的商品鱼用疫苗，产生了巨大的经济效益和社会效益。在鱼用疫苗的推广应用过程中，目前存在的最大困难之一是缺乏合适的免疫接种方法。现在使用的鱼用疫苗免疫接种方法有四种注射法、浸泡法、口服法和喷雾法，但每种方法都存在明显的缺陷。注射法是将疫苗直接注入心脏、肌肉或腹腔，该法是目前最常用也是免疫效果最好的方法；但该法明显的缺陷是耗时费力，进行大规模免疫接种时困难很大，特别是该法要求所接种的个体必须有较大的规格，对于个体较小的鱼苗无法使用。浸泡法是将需要免疫接种的鱼类直接放入或经高渗溶液处理后放入疫苗中浸泡，以达到免疫接种的目的，该法虽然操作方便，但显著缺点是难以达到稳定的免疫效果。口服法是将疫苗直接投喂，虽操作方便，但由于肠胃消化液对疫苗的分解破坏而严重影响免疫效果。喷雾法是将疫苗以一定的压力直接喷射到鱼体上进行免疫，该法目前还不很成熟，无法达到要求的免疫效果。为此，寻找一种适合水产养殖动物免疫接种的简易、经济、安全、高效的免疫接种新方法已成为鱼用疫苗推广应用的关键。超声波在水产养殖业上的应用目前还仅限于应用高频超声波(频率在1MHz以上)对亲鱼或鱼类受精卵进行作用，以提高亲鱼的排卵受精能力以及受精卵的孵化率和仔鱼的成活率等。本专利技术利用中低频(频率在1MHz以下)超声波具有较强的穿透性的特点，采用中低频超声波对鱼类实行鱼用疫苗等药物的免疫接种，属国内外首创，在生产上具有广阔的应用前景。本专利技术的目的是提供一种与传统的鱼用疫苗免疫接种方法相比，具有安全、方便和高效的特点，应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的新方法。本专利技术是这样实现的频率到20KHz以上，人耳无法听到的声音叫超声。超声波对生物的作用主要有空化作用、机械作用和热作用等，它能显著增加皮肤和肌肉组织的通透性。本专利技术就是根据超声波的这一作用特点，将待接种的鱼类浸泡于1×106—1×109细胞/毫升的浓度的疫苗溶液后，用中低频(20-1000KHz)中低强度(0.01-100W/cm2)的超声波作用0.1-30分钟，通过超声作用达到理想的免疫接种效果。1)将鱼用疫苗用水配制成1×106—1×109细胞/毫升的浓度，并将该疫苗溶液倒入底部安放有超声探头的超声容器内，将待接种的鱼类放于疫苗溶液中。2)用频率为20-1000KHz、强度为0.01-100W/cm2的中低频中低强的超声波作用0.1-30分钟，疫苗便可在超声作用下通过皮肤和肌肉足量进入鱼类机体，从而快速方便地完成鱼用疫苗的免疫接种。根据鱼的种类和疫苗的种类不同，应用超声波进行鱼用疫苗的免疫接种方法有以下八种①连续超声——即将待接种鱼类放入疫苗溶液中后立即开动超声仪连续超声作用0.1-30分钟，超声结束后立即将鱼捞出；②浸泡＋连续超声——即将待接种鱼类在疫苗溶液中浸泡数分钟后再开动超声仪连续超声作用0.1-30分钟，超声结束后立即将鱼捞出；③连续超声＋浸泡——即将待接种鱼类放入疫苗溶液中后立即开动超声仪连续超声作用0.1-30分钟，超声结束后再将鱼在疫苗溶液中浸泡数分钟后捞出；④浸泡＋连续超声＋浸泡——即将待接种鱼类在疫苗溶液中浸泡数分钟后开动超声仪连续超声作用0.1-30分钟，超声结束后再将鱼在疫苗溶液中浸泡数分钟后捞出；⑤脉冲超声——即将待接种鱼类放入疫苗溶液中后立即开动超声仪脉冲超声作用0.1-30分钟(脉冲超声的方法为超声作用一定时间后停止超声作用一定时间，再超声作用一定时间，再停止超声作用一定时间，再……)，超声结束后立即将鱼捞出；⑥浸泡＋脉冲超声——即将待接种鱼类在疫苗溶液中浸泡数分钟后再开动超声仪脉冲超声作用0.1-30分钟，超声结束后立即将鱼捞出；⑦脉冲超声＋浸泡——即将待接种鱼类放入疫苗溶液中后立即开动超声仪脉冲超声作用0.1-30分钟，超声结束后再将鱼在疫苗溶液中浸泡数分钟后捞出；⑧浸泡＋脉冲超声＋浸泡——即将待接种鱼类在疫苗溶液中浸泡数分钟后开动超声仪脉冲超声作用0.1-30分钟，超声结束后再将鱼在疫苗溶液中浸泡数分钟后捞出。3)将鱼经上述方法处理后就已完成了疫苗的免疫接种，捞出并按常规方法进行养殖一定时间便可产生抗体，以抵抗相关疾病的侵袭。必要时，还可用上述同样的方法步骤进行加强免疫。本专利技术“应用超声波进行鱼用疫苗的免疫接种技术方法”是应用超声作用对鱼类实施免疫接种的新方法，在生产上得到推广使用后，可有效解决目前鱼用疫苗在免疫接种方法上存在的缺陷，大大加速鱼用疫苗的开发与应用。由于该法批次接种鱼类的数量可达数百至上千尾，特别适合幼小鱼苗大规模的免疫接种，既克服了传统注射法操作困难的缺陷，又较传统的浸泡法、口服法和喷雾法大大提高了免疫接种效果，真正做到了注射法的免疫效果、浸泡法的操作便利，达到简易、经济、快速、安全、高效的免疫接种要求。应用于生产后，可进一步促进鱼类疫苗的大规模推广应用，有效预防养殖鱼类相关疾病的发生。详细描述实现专利技术的最好方式实施例1(“连续超声＋浸泡”的超声免疫方法)1)将青石斑创伤弧菌疫苗配制成1×108细胞/毫升的浓度，将该疫苗溶液倒入底部安放有超声探头的超声容器内，将200尾体长为10-15cm的青石斑鱼苗放于疫苗溶液中。2)青石斑鱼苗放入疫苗溶液中后立即用频率为35KHz、强度为0.2W/cm2的的超声波连续超声作用3分钟，之后再在疫苗溶液中浸泡3分钟，将鱼捞出并按常规方法进行养殖。3)结果青石斑鱼苗经上述方法进行免疫接种后，第20天测定的平均血清凝集抗体效价为282(对造的注射法为307、浸泡法为4)；第30天用1×108细胞/毫升的浓度的创伤弧菌活菌对经上述方法进行免疫接种的青石斑鱼攻毒，再养殖15天后的成活率为93.3％(对造的注射法为90％、浸泡法为13.3％)。说明应用超声波进行鱼用疫苗的免疫接种方法兼备安全高效和快速方便的特点。实施例2(“浸泡＋脉冲超声＋浸泡”的超声免疫方法)1)将真鲷多价菌体疫苗配制成1×108细胞/毫升的浓度，将该疫苗溶液倒入底部安放有超声探头的超声容器内，将300尾体长为8-15cm的真鲷鱼苗放于疫苗溶液中。2)待真鲷鱼苗在疫苗中浸泡3分钟后，用频率为50KHz、强度为0.3W/cm2的的超声波脉冲超声作用6分钟(脉冲超声的方式为超声30秒，停30秒，再超声30秒，再停30秒，……，如此重复持续6分钟，实际超声作用时间仍为3分钟)，之后再在疫苗溶液中浸泡3分钟，将鱼捞出并按常规方法进行养殖。3)结果真鲷鱼苗经上述方法进行免疫接种后，第20天测定的平均血清凝集抗体效价为358(对造的注射法为333、浸泡法为6)；第30天用1×108细胞/毫升的浓度的溶藻弧菌活菌对经上述方法进行免疫接种的真鲷攻毒，再养殖15天后的成活率为96.7％(对造的注射法为90％、浸泡法为6.7％)。说明应用超声波进行鱼本文档来自技高网...

【技术保护点】
应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的技术方法，其特征在于：应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的技术方法，将待接种的鱼类浸泡于１×１０↑［６］－１×１０↑［９］细胞／毫升的浓度的疫苗溶液后，用中低频（２０－１０００ＫＨｚ）中低强度（０．０１－１００Ｗ／ｃｍ↑［２］）的超声波作用０．１－３０分钟。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的技术方法，其特征在于应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的技术方法，将待接种的鱼类浸泡于1×106—1×109细胞/毫升的浓度的疫苗溶液后，用中低频(20-1000KHz)中低强度(0.01-100W/cm2)的超声波作用0.1-30分钟。2.根据权利要求1所述的应用超声波进行鱼用疫苗免疫接种的技术方法，其特征在于将鱼用疫苗用水配制成1×106—1×109细胞/毫升的浓度，并将该疫苗溶液倒入底部安放有超声探头的超声容器内，将待接种的鱼类放于疫苗溶液中；频率为20-1000KHz、强度为0.01-100W/cm2的中低频中低强的超声波作用0.1-30分钟，疫苗便可根据鱼的种类和疫苗的种类不同，应用超声波进行鱼用疫苗的免疫接种方法有以下八种①连续超声——即将待接种鱼类放入疫苗溶液中后立即开动超声仪连续超声作用0.1-30分钟，超声结束后立即将鱼捞出；②浸泡＋连续超声——即将待接种鱼类在疫苗溶液中浸泡数分钟后再开动超声仪连续超声作用0.1-30分钟，超声结束后立即将鱼捞出；③连续超...

【专利技术属性】
技术研发人员：周永灿，黄晖，张吕平，
申请(专利权)人：周永灿，
类型：发明
国别省市：66[中国|海南]