预测直肠癌患者对贝伐单抗敏感性的生物标志物制造技术

本发明专利技术属于生物医学领域，具体涉及预测直肠癌患者对贝伐单抗敏感性的生物标志物，所述生物标志物包括RNF34、DTD2、ASMTL。具体地，本发明专利技术还提供了所述生物标志物在预测直肠癌患者对贝伐单抗敏感性中的应用。者对贝伐单抗敏感性中的应用。者对贝伐单抗敏感性中的应用。

【技术实现步骤摘要】
预测直肠癌患者对贝伐单抗敏感性的生物标志物


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及预测直肠癌患者对贝伐单抗敏感性的生物标志物。

技术介绍

[0002]直肠癌(rectal cancer)是指发生在直肠齿状线以上至直肠、乙状结肠交界处的恶性肿瘤。中国直肠癌发病部位80％以上发生在近肛门处，多能通过直肠指检发现。直肠癌的病因尚不明确，多数直肠癌由腺瘤性息肉演变而来，经历增生、腺瘤、癌变各阶段及相应的染色体改变，癌变涉及多基因参与。虽然其病因未明确，但其相关的高危因素逐渐被认识。
[0003]直肠癌的治疗应采取个体化综合治疗的原则，医生会根据患者的身体状态、肿瘤的病理类型、侵犯范围(分期)，有计划地应用多种治疗手段，以期最大程度地根治肿瘤，提高治愈率。直肠癌的全系膜切除(total mesorectal excision，TME)手术最早由英国的Heald提出，目前已经成为直肠癌的标准治疗术式。局部晚期直肠癌(LARC)患者的标准治疗方法是放化疗(CRT)，然后进行全系膜切除手术。通过这种治疗，30％的患者将在治疗结束后5年内死于局部和远处复发。为了克服这个问题，迫切需要加强术前治疗。
[0004]贝伐单抗(Bevacizumab，Avastin，阿瓦斯汀)是重组的人源化单克隆抗体。2004年2月26日获得FDA的批准，是美国第一个获得批准上市的抑制肿瘤血管生成的药。目前研究表明，IgG1抗体能通过体内、体外检测系统与人血管内皮生长因子(VEGF)结合并阻断贝伐单抗的生物活性。最初贝伐单抗适用于大肠癌的治疗，近年来在直肠癌患者中获得了贝伐单抗抗血管生成的直接证据，抗血管生成药物和CRT的这种组合可能优于单独的个体治疗。但是贝伐单抗对直肠肿瘤的确切作用尚未完全阐明，患者对贝伐单抗的敏感性也难以预测。

技术实现思路

[0005]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种预测直肠癌患者对贝伐单抗敏感性的标志物及其应用。本专利技术所提供的标志物对于预测直肠癌患者对贝伐单抗的敏感性具有较高的灵敏度和特异性，可作为指导术前治疗方案的新型标志物。
[0006]预测方法
[0007]一方面本专利技术提供了检测RNF34、DTD2、ASMTL中一个或多个的表达量的试剂在制备预测受试者对贝伐单抗敏感性的产品中的应用。
[0008]所述RNF34在对贝伐单抗敏感的患者中高表达。
[0009]所述DTD2在对贝伐单抗敏感的患者中低表达。
[0010]所述ASMTL在对贝伐单抗敏感的患者中低表达。
[0011]优选地，所述高表达指标志物表达水平大于其在健康对照群体中的表达水平，相对于对照表达水平高至少1.1倍，例如至少1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7
倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍或更多。
[0012]本专利技术所述“敏感性”，即患者的疾病情况是否可以通过贝伐单抗治疗而得到改善；优选地，达到完全缓解(complete remission，CR)。在进行预测时，只要在施用贝伐单抗前，测量来着受试者的样本中的标志物表达量即可判断。
[0013]如本文中所使用的，术语“施用”意指通过本领域中已知的适合于施用治疗性抗体的任何手段对需要此类治疗或医学干预的患者施用贝伐单抗。非限制性施用路径包括通过口服、静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、表面、皮内、鼻内或支气管内(例如通过吸入实现的)路径。
[0014]优选地，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物。
[0015]优选地，所述受试者为人。
[0016]优选地，所述受试者是直肠癌患者。
[0017]更优选地，所述受试者是晚期直肠癌患者。
[0018]优选地，所述检测表达量的试剂包括检测mRNA表达量和/或蛋白表达量的试剂。
[0019]优选地，所述检测包括定量或定性的检测。
[0020]优选地，所述检测mRNA表达量的试剂包括以下方法中使用到的试剂：基于PCR原理的检测方法、Southern杂交方法、Northern杂交方法、点杂交方法、荧光原位杂交方法、DNA微阵列方法、ASO法、高通量测序平台方法。
[0021]优选地，所述基于PCR原理的检测方法包括以下至少任意一种：将提取RNA的步骤、mRNA逆转录为cDNA的步骤、测量cDNA的含量的步骤。
[0022]优选地，所述测量cDNA的含量的方法包括但不限于PCR、NASBA、RPA、SDA、LAMP、HAD、NEAR、MDA、RCA、LCR、RAM。
[0023]优选地，所述检测mRNA表达量的试剂包括特异性引物和/或探针。
[0024]优选地，所述探针包括杂交型探针和水解型探针(Taqman探针)。
[0025]优选地，所述探针的两端连接有淬灭基团和/或荧光基团。
[0026]优选地，所述荧光基团包括但不限于FAM(羧基荧光素，Carboxy fluorescein，绿色荧光)、FITC(异硫氰酸荧光素，Fluorescein isothiocyanate)、TET(四氯
‑6‑
羧基荧光素，Tetrachloro fluorescein)、HEX(六氯
‑6‑
甲基荧光素，Hexachloro fluorescein)、JOE(2，7
‑
二甲基
‑
4，5
‑
二氯
‑6‑
羧基荧光素)、罗丹明类(Rhodamine染料如R110，TAMRA、Texas Red等)、ROX、AlexaFluor染料、ATTO染料、DyLight染料、cyanine染料(如Cy2，Cy3，Cy3.5，Cy3b，Cy5，Cy5.5，Cy7，Cy7.5)、FluoProbes染料、SulfoCy染料、Seta染料、IRIS染料、SeTau染料、SRfluor染料、Square染料。
[0027]优选地，本文所述淬灭基团包括但不限于3'
‑
BBQ
‑
650(Black Berry Quencher650)、BHQ
‑
0(Black Hole Quencher 0，3')、BHQ
‑
1(Black Hole Quencher 1，3')、BHQ
‑
2(Black Hole Quencher 2，3')、BHQ
‑
3(Black Hole Quencher 3，3')、BHQ
‑
1(Black Hole Quencher
‑
1，5')、BHQ
‑
2(Black Hole Quencher
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种标志物组合，所述标志物组合是RNF34+DTD2或RNF34+ASMTL或DTD2+ASMTL。2.检测RNF34、DTD2、ASMTL和权利要求1所述标志物组合中任意一种的表达量的试剂在预测受试者对贝伐单抗敏感性中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述受试者是直肠癌患者；优选地，所述受试者是晚期直肠癌患者。4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述检测表达量的试剂包括检测mRNA表达量和/或蛋白表达量的试剂。5.一种预测受试者对贝伐单抗敏感性的试剂盒，所述试剂盒包含检测RNF34、DTD2、ASMTL或权利要求1所述标志物组合中任意一种的表达量的试剂；优选地，所述受试者是直肠癌患者；优选地，所述受试者是晚期直肠癌患者。6.权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述检测表达量的试剂包括检测mRNA表达量和/或蛋白表达量的试剂。7.权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述产品中还包括收集和/或处理样品的试剂或仪器；优选地，所述样品包括：血液、血清、血浆、全血、尿液、唾液、精液、乳汁、脑脊髓液、泪液、鼻上皮细胞、痰、组织、粘液、淋巴、胞液、腹水、胸膜积液、羊水、膀胱冲洗液和支气管肺泡灌洗液；优选地，所述样品是组织。8.一种预测受试者对贝伐单抗敏感性的系统，所述系统包括根据受试者的RNF34、DTD2、ASMTL或...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，王丹，李雨晨，
申请(专利权)人：青岛泱深生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：