【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含
α
疱疹病毒启动子序列的重组核酸
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2019年2月5日提交的美国临时申请号62/801,524和2019年12月19日提交的美国临时申请号62/950,848的权益,前述申请的全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
[0003]病毒感染其宿主细胞,并将其遗传物质作为宿主复制周期的部分引入宿主的细胞中。这种遗传物质包含用于通过劫持人体正常生产机构以满足病毒需求来生产这些病毒的更多拷贝的基础“指令”。宿主细胞将执行这些指令并产生病毒的额外拷贝,从而导致越来越多的宿主细胞被感染。因此,病毒可被用作携带可提供治疗益处的基因到细胞中的载体。
技术实现思路
[0004]在一个方面,本专利技术提供了一种在宿主细胞中表达靶基因的重组载体,其包含:启动子,所述启动子包含与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4中的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列;克隆位点,所述克隆位点用于插入编码靶基因的核酸;和至少一个在宿主细胞中表达靶基因所需的非启动子调控元件。
[0005]在另一个方面,本专利技术提供了一种在宿主细胞中表达靶基因的重组载体,其包含:启动子,所述启动子包含与选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8中的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列;克隆位点,所述克隆位点用于插入编码靶基因的核酸;和至少一个在宿主细胞中表达靶基因所需的非启动子调控 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在宿主细胞中表达靶基因的重组载体,所述重组载体包含:启动子,所述启动子包含与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列;克隆位点,所述克隆位点用于插入编码所述靶基因的核酸;和至少一个在宿主细胞中表达所述靶基因所需的非启动子调控元件。2.根据权利要求1所述的重组载体,其中所述载体是病毒载体。3.根据权利要求2所述的重组载体,其中所述病毒载体是腺相关病毒(AAV)载体。4.根据权利要求1所述的重组载体,其中所述载体是非病毒载体。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的重组载体,其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的重组载体,其中所述宿主细胞包括体外神经元细胞、离体神经元细胞或二者。7.根据权利要求1
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5中任一项所述的重组载体,其中所述宿主细胞包括受试者的神经元细胞。8.根据权利要求7所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于所述受试者的初级运动区、次级运动区、初级躯体感觉区、补充躯体感觉区、视觉区、海马结构、纹状体、苍白球、丘脑、下丘脑、中脑区、后脑、嗅觉区或其组合中。9.根据权利要求8所述的重组载体,其中所述中脑区包括运动相关区、感觉相关区或二者。10.根据权利要求7所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于所述受试者的皮层、齿状回、纹状体、小脑、嗅球或其组合中。11.根据权利要求6
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10中任一项所述的重组载体,其中所述神经元细胞包括神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞或其组合。12.根据权利要求11所述的重组载体,其中所述神经元细胞包括神经元。13.根据权利要求7所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于所述受试者的脊髓中。14.根据权利要求13所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于所述脊髓的背角中。15.根据权利要求13或14所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于腰脊髓、胸脊髓、颈脊髓或其组合中。16.根据权利要求1
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5中任一项所述的重组载体,其中所述宿主细胞选自膀胱细胞、血细胞、骨细胞、内皮细胞、上皮细胞、脂肪细胞、心脏细胞、肠细胞、肾细胞、肝细胞、肺细胞、肌肉细胞、胰腺细胞、视网膜细胞、性细胞、皮肤细胞、脾细胞、干细胞及其组合。17.根据权利要求1
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16中任一项所述的重组载体,其中所述启动子包含与选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4组成的组的核酸序列具有至少90%序列同一性的核酸序列。18.根据权利要求17所述的重组载体,其中所述启动子包含选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4组成的组的核酸序列。19.根据权利要求1
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18中任一项所述的重组载体,其中所述至少一个非启动子调控元件包括增强子元件。20.根据权利要求1
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19中任一项所述的重组载体,其中所述至少一个非启动子调控元件包括诱导物元件。
21.根据权利要求1
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20中任一项所述的重组载体,所述重组载体进一步包含选择标记元件。22.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含权利要求1
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21中任一项所述的重组载体。23.一种包含编码靶基因的核酸的重组多核苷酸分子,其中所述核酸可操作地连接与包含与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列的启动子。24.根据权利要求23所述的重组多核苷酸分子,其中所述启动子包含与选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4组成的组的核酸序列具有至少90%序列同一性的核酸序列。25.根据权利要求24所述的重组多核苷酸分子,其中所述启动子包含选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4组成的组的核酸序列。26.根据权利要求24
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25中任一项所述的重组多核苷酸分子,其中所述编码靶基因的核酸包含超过4千碱基。27.一种重组多核苷酸分子,其包含用于插入编码靶基因的核酸的克隆位点,其中所述克隆位点可操作地连接包含与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列的启动子。28.根据权利要求27所述的重组多核苷酸分子,其中所述启动子包含与选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4组成的组的核酸序列具有至少90%序列同一性的核酸序列。29.根据权利要求28所述的重组多核苷酸分子,其中所述启动子包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的核酸序列。30.一种在宿主细胞中表达靶基因的方法,包括:使所述宿主细胞与重组多核苷酸分子接触,使得所述重组核苷酸分子被引入所述宿主细胞中,其中所述重组多核苷酸分子包含编码所述靶基因的核酸,并且其中所述核酸可操作地连接包含与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列的启动子,由此所述靶基因的表达在所述宿主细胞中发生。31.根据权利要求30所述的方法,其中所述启动子包含与选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4组成的组的核酸序列具有至少90%序列同一性的核酸序列。32.根据权利要求31所述的方法,其中所述启动子包含选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4组成的组的核酸序列。33.根据权利要求30
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32中任一项所述的方法,其中所述重组多核苷酸分子在所述宿主细胞与所述重组多核苷酸接触时通过转导被引入所述宿主细胞中。34.根据权利要求30
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32中任一项所述的方法,其中所述重组多核苷酸分子在所述宿主细胞与所述重组多核苷酸接触时通过转染被引入所述宿主细胞中。35.根据权利要求30
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34中任一项所述的方法,其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。36.根据权利要求30
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35中任一项所述的方法,其中所述宿主细胞包括体外神经元细胞、离体神经元细胞或二者。
37.根据权利要求30
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35中任一项所述的方法,其中所述宿主细胞包括受试者的神经元细胞。38.根据权利要求37所述的方法,其中所述神经元细胞位于所述受试者的初级运动区、次级运动区、初级躯体感觉区、补充躯体感觉区、视觉区、海马结构、纹状体、苍白球、丘脑、下丘脑、中脑区、后脑、嗅觉区或其组合中。39.根据权利要求38所述的方法,其中所述中脑区包括运动相关区、感觉相关区或二者。40.根据权利要求37所述的方法,其中所述神经元细胞位于所述受试者的皮层、齿状回、纹状体、小脑、嗅球或其组合中。41.根据权利要求36
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40中任一项所述的方法,其中所述神经元细胞包括神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞或其组合。42.根据权利要求41所述的方法,其中所述神经元细胞包括神经元。43.根据权利要求37所述的方法,其中所述神经元细胞位于所述受试者的脊髓中。44.根据权利要求43所述的方法,其中所述神经元细胞位于所述脊髓的背角中。45.根据权利要求43或44所述的方法,其中所述神经元细胞位于腰脊髓、胸脊髓、颈脊髓或其组合中。46.根据权利要求30
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35中任一项所述的方法,其中所述宿主细胞选自膀胱细胞、血细胞、骨细胞、内皮细胞、上皮细胞、脂肪细胞、心脏细胞、肠细胞、肾细胞、肝细胞、肺细胞、肌肉细胞、胰腺细胞、视网膜细胞、性细胞、皮肤细胞、脾细胞、干细胞及其组合。47.一种用于在宿主细胞中表达靶基因的重组载体,所述重组载体包含:启动子,所述启动子包含与选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8中的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列;克隆位点,所述克隆位点用于插入编码所述靶基因的核酸;和至少一个在所述宿主细胞中表达所述靶基因所需的非启动子调控元件。48.根据权利要求47所述的重组载体,其中所述载体是病毒载体。49.根据权利要求48所述的重组载体,其中所述病毒载体是腺相关病毒(AAV)载体。50.根据权利要求47所述的重组载体,其中所述载体是非病毒载体。51.根据权利要求47
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50中任一项所述的重组载体,其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。52.根据权利要求47
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51中任一项所述的重组载体,其中所述宿主细胞包括体外神经元细胞、离体神经元细胞或二者。53.根据权利要求47
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51中任一项所述的重组载体,其中所述宿主细胞包括受试者的神经元细胞。54.根据权利要求53所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于所述受试者的初级运动区、次级运动区、初级躯体感觉区、补充躯体感觉区、视觉区、海马结构、纹状体、苍白球、丘脑、下丘脑、中脑区、后脑、嗅觉区或其组合中。55.根据权利要求54所述的重组载体,其中所述中脑区包括运动相关区、感觉相关区或二者。56.根据权利要求53所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于所述受试者的皮层、齿
状回、纹状体、小脑、嗅球或其组合中。57.根据权利要求52
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56中任一项所述的重组载体,其中所述神经元细胞包括神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞或其组合。58.根据权利要求57所述的重组载体,其中所述神经元细胞包括神经元。59.根据权利要求53所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于所述受试者的脊髓中。60.根据权利要求59所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于所述脊髓的背角中。61.根据权利要求59或60所述的重组载体,其中所述神经元细胞位于腰脊髓、胸脊髓、颈脊髓或其组合中。62.根据权利要求47
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51中任一项所述的重组载体,其中所述宿主细胞选自膀胱细胞、血细胞、骨细胞、内皮细胞、上皮细胞、脂肪细胞、心脏细胞、肠细胞、肾细胞、肝细胞、肺细胞、肌肉细胞、胰腺细胞、视网膜细胞、性细胞、皮肤细胞、脾细胞、干细胞及其组合。63.根据权利要求47
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62中任一项所述的重组载体,其中所述启动子包含与选自由SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的核酸序列具有至少90%序列同一性的核酸序列。64.根据权利要求63所述的重组载体,其中所述启动子包含选自由SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的核酸序列。65.根据权利要求47
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64中任一项所述的重组载体,其中所述至少一个非启动子调控元件包括增强子元件。66.根据权利要求47
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65中任一项所述的重组载体,其中所述至少一个非启动子调控元件包括诱导物元件。67.根据权利要求47
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66中任一项所述的重组载体,所述重组载体进一步包含选择标记元件。68.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含权利要求47
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67中任一项所述的重组载体。69.一种包含编码靶基因的核酸的重组多核苷酸分子,其中所述核酸可操作地连接包含与选自由SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列的启动子。70.根据权利要求69所述的重组多核苷酸分子,其中所述启动子包含与选自由SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的核酸序列具有至少90%序列同一性的核酸序列。71.根据权利要求70所述的重组多核苷酸分子,其中所述启动子包含选自由SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的核酸序列。72.根据权利要求69
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71中任一项所述的重组多核苷酸分子,其中所述编码靶基因的核酸包含超过4千碱基。73.一种重组多核苷酸分子,其包含用于插入编码靶基因的核酸的克隆位点,其中所述克隆位点可操作地连接包含与选自由SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的序列具有至少70%序列同一性的核酸序列的启动子。74.根据权利要求73所述的重组多核苷酸分...
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