【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改进的重组凝集素蛋白制备方法该申请对于2018年9月7日提交的第201821008382号印度临时专利申请和于2019年1月14日提交的第201921001559号印度临时专利申请的权益进行了声明,其全部内容通过引用包含在本文中。
本专利技术是关于一种重组凝集素蛋白以及一种重组凝集素蛋白制备方法,特别是一种粗重组凝集素蛋白纯化方法。
技术介绍
凝集素属于碳水化合物结合蛋白,是对其他分子的糖基具有高度特异性的高分子。凝集素在细胞和分子水平上进行识别,并在涉及细胞、碳水化合物和蛋白质的生物识别现象中发挥许多不同的作用。凝集素为二价或多价碳水化合物结合蛋白,能够结合和沉淀糖蛋白并凝集红细胞。在动物体内发现的凝集素通常有助于细胞相互作用,而植物凝集素则能够抵御潜在捕食者或病原体。一些凝集素可以检测与肿瘤相关的聚糖,因此有可能作为恶性肿瘤的生物标志物,并可能有助于研究癌细胞系中糖基化基序的变化。纯化后的凝集素在临床环境中很重要,因为它们可用于血型鉴定。有些存在于人类红细胞上的糖脂和糖蛋白可采用凝集素进行识别。许多凝集素可用作指示恶性生长早期检测的生物标志物或用作自噬诱导剂,而其他凝集素还表现出通过细胞凋亡抑制癌细胞生长的能力。由于细胞增殖不受调节,有些碳水化合物部分在癌细胞上以抗原的形式表达。凝集素在癌症治疗中用作药物载体,因为它们能够与恶性肿瘤特异性结合。此外,由于凝集素还能够调节癌症相关通路,因此它们有可能用作癌症诊断和治疗药物。凝集素能够与多种抗原结合,抗原已在癌细胞表面进行表征;大多数抗原都是针 ...
【技术保护点】
1.一种制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,所述制备重组凝集素蛋白的方法包括:在培养物的宿主细胞中表达由重组凝集素基因编码的重组凝集素蛋白,其中表达是在细胞具有不超过160分钟倍增时间的条件下进行。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180907 IN 201821008382;20190114 IN 2019210015591.一种制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,所述制备重组凝集素蛋白的方法包括:在培养物的宿主细胞中表达由重组凝集素基因编码的重组凝集素蛋白,其中表达是在细胞具有不超过160分钟倍增时间的条件下进行。
2.根据权利要求1所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中在细胞具有至少100分钟倍增时间的条件下进行表达。
3.根据权利要求1所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中在温度至少15℃且不超过22℃的温度下进行表达。
4.根据权利要求1所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中所述宿主细胞培养物的体积至少为10升。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中还包括培养宿主细胞,所述培养宿主细胞还包括:在蛋白表达之前使宿主细胞生长的生长期,以及进行蛋白表达的表达期。
6.根据权利要求5所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中所述生长期在高于进行表达期的温度下进行。
7.根据权利要求5或6所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中在至少4小时且不超过7小时的时间内将温度从生长期降至表达期。
8.根据权利要求5至7中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中通过加入浓度至少为0.1mM且不超过0.7mM的诱导剂来诱导表达期。
9.根据权利要求5至8中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中当培养物的光密度至少为25且不超过40时,通过添加诱导剂来诱导表达期。
10.根据权利要求9所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中光密度是培养物中宿主细胞群体的量度在600纳米处测量。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中用于表达重组凝集素蛋白的宿主细胞是大肠杆菌。
12.根据权利要求8至11中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中所述诱导剂为IPTG。
13.根据权利要求8至12中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中所述诱导剂以不超过0.5mM的浓度添加到所述培养物中。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中所述重组凝集素蛋白选自以下:
a.SEQIDNO.1;
b.SEQIDNO.3;
c.SEQIDNO.4;或
d.与a、b或c具有至少60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%或99%同源性的氨基酸序列。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中进一步包括:
a)可选的,将重组凝集素基因克隆到表达载体中并将所述表达载体插入宿主细胞中;
b)在合适的培养基中培养所述宿主细胞,其中所述培养包括在25℃到40℃的温度下进行的生长期和表达由重组凝集素基因编码的重组凝集素蛋白的表达期,其中所述生长期的温度为15℃到30℃并且所述表达期内维持的碳氮比为3∶1到6∶1;
c)可选的,分离(b)中表达的所述重组凝集素蛋白以获得粗重组凝集素蛋白;以及
d)可选的,纯化所述粗重组凝集素蛋白以获得重组凝集素蛋白分离物。
16.根据权利要求1所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中所述步骤(a)中的表达载体如图1所示。
17.根据权利要求15所述的制备重组凝集素蛋白的方法,其特征在于,其中...
【专利技术属性】
技术研发人员:达南杰·萨特,苏迪普·库马尔,马马塔·卡特代尔,
申请(专利权)人:联合化学实验室有限公司,
类型:发明
国别省市:印度;IN
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