【技术实现步骤摘要】
用于检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒
本专利技术属于兽用生物制品
,具体涉及一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒。
技术介绍
非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)感染家猪和野猪引起猪的一种急性、热性、高度接触性传染病,临床以猪高热、食欲废绝、皮肤发绀、内脏实质器官出血、呼吸系统和神经系统功能紊乱为主要特征,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病,在我国被列为一类动物疫病。该病病程极短、死亡率高。非洲猪瘟病毒基因型众多,目前已知有24个基因型。迄今为止,该病尚无商品化的疫苗,疫情的防控主要依靠加强饲养场生物安全管理、限制生猪和猪产品跨区域流动、对疫点和疫区内所有生猪采取扑杀等措施。1921年,Montgomery首次报道在肯尼亚发生非洲猪瘟疫情。2007年以来,非洲猪瘟在中东欧多个国家扩散并流行,特别是俄罗斯及其周边地区。2017年3月,俄罗斯远东地区伊尔库茨克州发生非洲猪瘟疫情,2018年8月,我国辽宁省沈阳市沈北区首次发现非洲猪瘟疫情,经核酸检测和序列比对分析发现,该毒株与俄罗斯和中东欧国家流行的格鲁吉亚毒株(Georgia2007)属于同一进化支,属于基因II型毒株。随后,在我国的河南、江苏、内蒙古、黑龙江、浙江、安徽、等多个省份(自治区、直辖市)呈现散发流行,对我国养猪业造成了数十亿元的经济损失。由于ASF可 ...
【技术保护点】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒,包括盒体(A),其特征在于,所述的盒体(A)内设有CD2v抗体免疫荧光层析检测卡(B)和装有血清稀释液的血清稀释液瓶(C),装有标准阳性血清的血清瓶(D),装有标准有阴性血清的标准血清瓶(E);所述的CD2v抗体免疫荧光层析检测卡(B)包括PVC底板(1),所述的PVC底板(1)上从左至右依次设有吸收垫(2)、反应膜(3)、结合垫(4)和样品垫(5),所述的结合垫(4)上负载有荧光标记的CD2v蛋白和荧光标记的羊抗鸡IgY,所述的反应膜(3)设有一条检测线T,一条质控线C,所述的检测线T上包被有重组CD2v蛋白,所述的质控C线上包被有羊抗鸡IgY免疫球蛋白。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒,包括盒体(A),其特征在于,所述的盒体(A)内设有CD2v抗体免疫荧光层析检测卡(B)和装有血清稀释液的血清稀释液瓶(C),装有标准阳性血清的血清瓶(D),装有标准有阴性血清的标准血清瓶(E);所述的CD2v抗体免疫荧光层析检测卡(B)包括PVC底板(1),所述的PVC底板(1)上从左至右依次设有吸收垫(2)、反应膜(3)、结合垫(4)和样品垫(5),所述的结合垫(4)上负载有荧光标记的CD2v蛋白和荧光标记的羊抗鸡IgY,所述的反应膜(3)设有一条检测线T,一条质控线C,所述的检测线T上包被有重组CD2v蛋白,所述的质控C线上包被有羊抗鸡IgY免疫球蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒,其特征在于,所述的CD2v抗体免疫荧光层析检测卡(B)位于卡壳(6)内,所述的卡壳(6)位于盒体(A)内,所述的卡壳(6)上设有加样孔(7),所述的加样孔(7)与样品垫(5)相对应。
3.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒,其特征在于,所述的盒体(A)内设有ID芯片卡(8),盒体(A)外设有ID芯片卡(8)相适配的二维码(9)。
4.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒,其特征在于,所述的反应膜通过下述方法制得的:
用含3%蔗糖的PB分别稀释CD2v蛋白和羊抗鸡IgY免疫球蛋白至浓度为1mg/ml,得检测线溶液和质控线溶液,在反应膜上划线,在膜的一端用记号笔做好质控线和检测线的标记,质控线和检测线的距离为5mm,检测T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为10mm,划线浓度均为1μL/cm,完成后将片材放置在温度18~26℃、湿度≤30%的干燥室中干燥16~18h,干燥完迅速装到铝膜袋中,加入干燥剂,封口,2~8℃保存,待用。
5.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒,其特征在于,所述的结合垫的通过下述步骤制得的:
1)将1mg纳米稀土荧光微球超声分散,用活化缓冲液MES稀释10倍,加入到2ml的EP管中;加入10mg的活化剂EDC和10mg的活化剂NHS混匀,活化15min-30min;14000r/min,离心15min;倒掉上清液,加入1ml偶联缓冲液,然后用超声波分散均匀,边搅拌边滴加CD2v蛋白或羊抗鸡IgY100μg,室温混匀1小时,加入封闭剂封闭1小时,14000r/min,离心15min,去上清,加入复溶液分散均匀,即标记好的T线标记物或C线标记物;
2)将玻璃纤维膜裁剪为10mm*300mm大小,将标记好的T线标记物和C线标记物,按照体积比1:10比例混合,按3μl/cm、0.02MPa采用喷金划膜仪喷至剪裁后的玻璃纤维膜上,放置在18~26℃、湿度≤30%的干燥室中干燥16~18h,干燥完迅速装到铝膜袋中,加入干燥剂,封口,2~8℃保存,待用。
6.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒,其特征在于,所述的样品垫通过...
【专利技术属性】
技术研发人员:汤永平,蒋智勇,羊晓珊,梁展鹏,刘卫,李闯,
申请(专利权)人:广州敏捷生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:广东;44
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