用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡制造技术

本实用新型专利技术公开了一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡；旨在提供一种灵敏度高，检测结果可靠的用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡；其技要点包括底板，在底板上依次衔接有样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫，所述结合垫上设有荧光微球标记的CCV单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY，所述的硝酸纤维膜设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包被CCV单克隆抗体的检测T线；属于动物疫病检测领域。

【技术实现步骤摘要】
用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡
本技术公开了一种免疫荧光层析检测卡，具体地说，是一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡。
技术介绍
犬冠状病毒病的病原体是犬冠状病毒(CanineCoronaVirus,CCV)。以轻重不一的胃肠炎为临床特征，临床上呈致死性的水样腹泻。突然发病、精神消沉、食欲废绝、呕吐、排出恶臭稀软而带粘液的粪便。呕吐常可持续数天，直至出现腹泻前才有所缓解。以后，粪便由精状、半糊状至水样，呈橙色或绿色，内含粘液和数量不等的血液。迅速脱水，体重减轻。感染源主要是病犬和带毒犬，病犬排毒时间为14天，保持接触必传染的能力为期更长病犬经呼吸道、消化道随口涎、鼻液和粪便向外排毒，污染饲料、饮水、笼具和周围环境，直接或间接地传给有易感动物。CCV在粪便中可存活6—9天，在水中也可保持数日的传染性，因此一旦发病，则很难制止传播流行。犬冠状病毒广泛分布于全世界,是对我国养犬业、毛皮动物养殖业危害最大的疫病之一。中国专利ZL201620488080.4公开了一种快速检测犬冠状病毒抗体的胶体金试纸卡，在塑料底板一端粘贴样品垫，样品垫的一端紧密压接含有标记抗犬冠状病毒抗原的金标垫，金标垫的一端紧密压接含有标记鼠IgG抗体的金标鼠IgG抗体垫，金标鼠IgG抗体垫一端紧密压接硝酸纤维素NC膜，NC膜上包被有相互分离的检测线T和质控线C，NC膜的另一端连接吸水垫形成试纸，试纸装入塑料卡壳内形成试纸卡。该专利采用传统的胶体金层析技术，免疫标记物依靠静电吸附，存在灵敏度较低、难以定量、重复性和稳定性较差等缺陷，无法完全满足临床的检测需求。另外，犬感染犬冠状病毒后，以轻重不一的胃肠炎为临床特征，冠状病毒一般存在于病犬的粪便中，而犬冠状病毒抗体一般存在犬的血液中，该专利采用双抗原夹心法检测粪便中的犬冠状病毒抗体，可能存在检出率较低，准确性较差等情况。中国专利ZL201410753855.1公开了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条，包括标记物垫和捕获膜，所述标记物垫含有荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体，所述捕获膜含有捕获探针。该方法存在下述问题：采用试剂瓶分装荧光标记的犬冠状病毒抗体，而不是直接喷到标记物垫上，这样整个检测卡非干式，需要冷藏，检测时，需要先把含犬冠状病毒的样品溶液加入到试剂瓶中，操作欠方便，不合适现场检测。
技术实现思路
针对上述问题，本技术的目的是提供一种灵敏度高，检测结果重现性好的用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡。为此，本申请提供的技术方案是这样的：一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，包括底板，在底板上依次衔接有样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫,其特征在于，所述结合垫上设有荧光微球标记的CCV单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY，所述的硝酸纤维膜设有一条包被IgY的质控C线，以及一条包被CCV单克隆抗体的检测T线。进一步的，上述的一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，还包括盒体，所述盒体内设有样品稀释瓶和用于检测犬CDV的免疫荧光层析检测卡。进一步的，上述的一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，所述盒体内还设有吸管。进一步的，上述的一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，所述的壳体上设有与样品垫相适配的加样孔，与结合垫相适配的观察窗口。进一步的，上述的一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，所述的壳体上表面还设有防滑条。与现有技术相比，本技术提供的技术方案具有如下优点：1、本技术操作步骤简单，对样品预处理方法进行优化，只需要采集猫血清，稀释后加入到检测卡的加样孔中即可检测，检测速度快，10分钟出结果，结果即可定性观察又可定量测定，大大降低检测成本，减少工作量。2、本申请提供的技术方案，通过对样品垫处理液和标记荧光微球稀释液的优化，相比传统工艺，灵敏度明显高，最低检测限(LOD)可达到2.69ng/mL(常规工艺6.25ng/mL)，线性更好，剂量-反应曲线的决定系数由0.9892提升到0.9953。3、本申请提供的技术方案对结合垫、硝酸纤维膜制备过程严格考究、优化，进一步提高了检测卡的精密度。附图说明图1是本技术提供的检测试纸卡结构示意图；图2是本技术提供的检测试纸条结构示意图；图3是本技术提供的另一种检测试纸卡结构示意图；图4是本技术提供的检测卡判定结果为阳性时示意图；图5是本技术提供的检测卡判定结果为阴性示意图；图6是本技术本技术提供的检测卡判定结果为无效时一种示意图；图7是本技术本技术提供的检测卡判定结果为无效时另一种示意图；图8是本申请提供的病毒抗原浓度检测的标准曲线图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本技术的权利要求作进一步的详细说明。实施例1本技术提供的一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，参阅图1至图2，包括壳体7，所述的壳体7内设有用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，所述用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡包括底板1，在底板1上依次衔接有样品垫2、结合垫3、硝酸纤维膜4和吸水垫5，所述结合垫3上设有荧光微球标记CCV单克隆抗体31和荧光微球标记的羊抗鸡IgY32，所述的硝酸纤维膜4设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包被CCV单克隆抗体的检测T线。所述的壳体7上设有与样品垫2相适配的加样孔72，与结合垫3相适配的观察窗口71，所述的壳体7上表面还设有防滑条73，方便试剂卡的取出与放入。实施例2本申请提供的另一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，参阅图1至图3，包括盒体9，所述的盒体9内设有样品稀释液瓶6，吸管8以及用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，所述用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡位于壳体7内，所述用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡包括底板1，在底板1上依次衔接有样品垫2、结合垫3、硝酸纤维膜4和吸水垫5，所述结合垫3上设有荧光微球标记CCV单克隆抗体31和荧光微球标记的羊抗鸡IgY32，所述的硝酸纤维膜4设有一条包被IgY的质控C线，以及一条包被CCV单克隆抗体的检测T线。所述的壳体7上设有与样品垫2相适配的加样孔72，与结合垫3相适配的观察窗口71，所述的壳体7上表面还设有防滑条73，方便试剂卡的取出与放入。实施例3实施例1和实施例2提供的用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡的制备方法，在温度(18～26)℃、湿度≤30％的环境下进行装配，在底板1上依次衔接有硝酸纤维膜4、吸水垫5、结合垫3和样品垫2；将粘贴好的大板切成4.0MM宽的试纸条，装入塑料卡壳内，即CCV检测卡；将每一检测卡置于铝膜袋中，加入干燥剂1包，热合封口备用。具体制备方法如下：1.1结合垫的制备1.1.1CCV单克隆抗体的标记1)选择微球：微球为含有稀土铕元素的荧光错配物的聚苯乙烯微球；密度：1.05g/cm3；折射率：1.59@589nm，25℃；直径300nm；功能基团：羧基；外观：白色。2)稀释荧光微球：取一离心管，加入1mL0.1M的MES标记缓冲液(2-(N-吗啡啉)乙磺酸，加入荧光微球1mg，涡旋混匀。3)微球的活化：在上述离心管中加入(20-50)μL(优选30本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，包括底板(1)，在底板(1)上依次衔接有样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维膜(4)和吸水垫(5)，其特征在于，所述结合垫(3)上设有荧光微球标记的CCV单克隆抗体(31)和荧光微球标记的羊抗鸡IgY(32)，所述的硝酸纤维膜(4)设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包被CCV单克隆抗体的检测T线。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，包括底板(1)，在底板(1)上依次衔接有样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维膜(4)和吸水垫(5)，其特征在于，所述结合垫(3)上设有荧光微球标记的CCV单克隆抗体(31)和荧光微球标记的羊抗鸡IgY(32)，所述的硝酸纤维膜(4)设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤永平，梁展鹏，
申请(专利权)人：广州敏捷生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：广东,44