CCR1在作为COPD诊断标志物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及CCR1在作为COPD诊断标志物中的应用。方法：用FCM检测30名健康对照组、30例肺炎患者及30例COPD患者外周血及痰(健康对照组除外)中性粒细胞氧化吞噬功能及相关受体的表达水平，分析组间差异。结果：与健康对照组相比，COPD患者组外周血和痰液中中性粒细胞氧化吞噬功能和表面CCR1受体的表达均有显著下降(P<0.05)；与肺炎对照组相比，中性粒细胞氧化吞噬功能在外周血差异无统计学意义，但在痰液中，COPD患者组明显低于肺炎对照组，且COPD患者组痰液中中性粒细胞表面受体CCR1的表达明显高于肺炎对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。

【技术实现步骤摘要】
CCR1在作为COPD诊断标志物中的应用
本专利技术涉及
，具体地说，是CCR1表达在作为COPD诊断标志物中的应用。
技术介绍
COPD是以不完全可逆的气流受限为特征的疾病，是一种常见、多发、高致死率的慢性呼吸系统疾病，是目前世界范围内四大致死性疾病之一。迄今为止，COPD的确切发病机制尚不清楚，目前普遍认为COPD以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征，肺部的蛋白酶和抗蛋白酶失衡、氧化与抗氧化失衡也在COPD发病中起重要作用。中性粒细胞(PMN)是机体参与固有免疫重要的效应细胞，PMN通过趋化吞噬、呼吸爆发、分泌分解酶和免疫活性物质而在调节炎症和免疫应答的过程中发挥重要作用。中性粒细胞的氧化聚集是COPD发生的重要环节之一，中性粒细胞及其组分均参与COPD发生发展过程：1、趋化因子受体(Chemokinereceptor,CR)是以趋化因子为配体的跨膜受体家族，中性粒细胞表面的CR(如CCR1)是其向病原体感染部位迁移或向炎症部位游走的关键分子。Wang等证实：炎症细胞上CCR1表达与COPD的严重程度相关；2、Toll样受体(Toll-likereceptor,TLRs)是一类天然的免疫受体，在各种炎症反应细胞吞噬作用的调节和细胞信号传导及细胞凋亡中起重要作用。TLR作为病原识别受体对中性粒细胞的功能起着决定性的作用，在炎症的发生，发展及转归中发挥重要的调控作用。中性粒细胞是一把双刃剑，其胞质内的细胞毒性物质在杀伤外来人侵的病原微生物的同时可能造成自身组织细胞的损伤。中性粒细胞在COPD发病的过程中担任了非常重要的角色。研究多聚焦于在COPD患者中性粒细胞数量的增多是否因为凋亡的减少而引起寿命的增长，然而目前细胞凋亡研究还没有表现出中性粒细胞寿命增长的明确证据，甚至一些研究结论还是相互矛盾的。近年来，学者逐渐将视野转移到中性粒细胞自身功能方面，Prieto等认为COPD患者存在PMN吞噬活性的缺陷，在动物实验中已经证明在假单胞菌感染的鼠模型中，香烟烟雾提取物会损害中性粒细胞的吞噬作用。Sapey等在研究中提出，COPD患者中性粒细胞可能具有自身功能缺陷，其趋化行为和移行结构与其他人群有本质差异。因此，在研究中我们聚焦于中性粒细胞的氧化吞噬功能。COPD属于气道炎症，而肺炎为非气道炎症，我们选择肺炎作为对照组，能更好的说明实验的结论是气道炎症所特有的；同时检测COPD外周血与痰里中性粒细胞的吞噬功能能够更好地反应COPD整体与局部的关系。中性粒细胞吞噬功能的检测我们采用了流式细胞仪-DHR的方法，是一种常用于临床评价中性粒细胞吞噬和氧化功能的简便、快速和重复性好的方法。无荧光染料二氢若丹明123(dihydrorhodamine123DHR)，在中性粒细胞吞噬作用发挥时，通过呼吸爆发使其在氧化反应中还原为具有高度绿色荧光的若丹明123(Rhodamine123，Rho123)。通过流式细胞仪检测，可直观地检测中性粒细胞被刺激后其功能增强的表现，DHR首先被激活的中性粒细胞吞噬，然后被氧化中性粒细胞产生的氧化系统所氧化。因此这种方法所检测的中性粒细胞功能可以反映中性粒细胞的吞噬和氧化两种功能，任何一种功能缺陷都将影响检测结果。关于本专利技术CCR1表达在作为COPD诊断标志物中的应用目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种外周血和痰中性粒细胞及CCR1的用途。本专利技术的第二个目的是针对现有技术的不足，提供一种鉴别气道炎症和非气道炎症的试剂盒。本专利技术的第三个目的是针对现有技术的不足，提供一种鉴别COPD和肺炎的试剂盒。本专利技术的第四个目的是针对现有技术的不足，提供一种COPD诊断试剂盒。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：CCR1在作为COPD患者痰中性粒细胞氧化杀伤氧化阳性率诊断标志物中的应用，CCR1表达量与COPD患者痰中性粒细胞氧化杀伤氧化阳性率成反比。痰中性粒细胞联合CCR1在作为鉴别肺炎和COPD的诊断标志物中的应用。优选地，COPD患者的痰中性粒细胞氧化吞噬氧化阳性率低于肺炎患者，COPD患者的痰中性粒细胞CCR1表达量高于肺炎患者。外周血和痰中性粒细胞联合CCR1在作为COPD诊断标志物中的应用。优选地，COPD患者的外周血和痰中性粒细胞氧化吞噬氧化阳性率及CCR1表达量低于正常值。痰中性粒细胞联合CCR1在作为鉴别气道炎症和非气道炎症的诊断标志物中的应用。优选地，气道炎症患者的痰中性粒细胞氧化吞噬氧化阳性率低于非气道炎症患者，气道炎症患者的痰中性粒细胞CCR1表达量高于非气道炎症患者。CCR1在制备提高中性粒细胞氧化功能的药物中的应用。CCR1抑制剂在制备提高中性粒细胞氧化功能的药物中的应用。优选地，CCR1抑制剂是降低CCR1表达量的物质。优选地，CCR1抑制剂选自小分子化合物或生物大分子。优选地，所述生物大分子是以CCR1蛋白或其转录本为靶序列、且能够抑制CCR1蛋白表达或基因转录的小干扰RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种鉴别气道炎症和非气道炎症的试剂盒，所述的试剂盒包括检测痰中性粒细胞氧化吞噬氧化阳性率及CCR1表达量的试剂。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种鉴别COPD和肺炎的试剂盒，所述的试剂盒包括检测痰中性粒细胞氧化吞噬氧化阳性率及CCR1表达量的试剂。为实现上述第四个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种COPD诊断试剂盒，所述的试剂盒包括检测外周血和痰中性粒细胞氧化吞噬氧化阳性率及CCR1表达量的试剂。本专利技术优点在于：1、用FCM检测30名健康对照组、30例肺炎患者及30例COPD患者外周血及痰(健康对照组除外)中性粒细胞氧化吞噬功能及相关受体[CCR1(CD191)和TLRs(2,4)]的表达水平，分析组间差异。结果表明与健康对照组相比，COPD患者组外周血和痰液中中性氧化吞噬功能和表面CCR1受体的表达均有显著下降(P<0.05)；与肺炎对照组相比，中性粒细胞氧化吞噬功能在外周血差异无统计学意义，但在痰液中，COPD患者组明显低于肺炎对照组(0.3360±0.3173vs0.5157±0.3650)，且COPD患者组痰液中中性粒细胞表面受体CCR1的表达明显高于肺炎对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；COPD患者痰液中性粒细胞氧化吞噬阳性率仅与表面受体CD191表达呈负相关(P＜0.01,r＝-0.548)与其他两种受体TLR2和TLR4的表达没有显著相关性(r值分别为－0.206、－0.219，P>0.05)。2、建立了适用于临床的流式细胞术检测COPD患者痰中性粒细胞的氧化吞噬功能的方法；COPD患者痰液中性粒细胞氧化杀伤功能和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CCR1在作为COPD患者痰中性粒细胞氧化杀伤氧化阳性率诊断标志物中的应用，CCR1表达量与COPD患者痰中性粒细胞氧化杀伤氧化阳性率成反比。/n

【技术特征摘要】
1.CCR1在作为COPD患者痰中性粒细胞氧化杀伤氧化阳性率诊断标志物中的应用，CCR1表达量与COPD患者痰中性粒细胞氧化杀伤氧化阳性率成反比。


2.痰中性粒细胞联合CCR1在作为鉴别肺炎和COPD的诊断标志物中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，COPD患者的痰中性粒细胞氧化吞噬氧化阳性率低于肺炎患者，COPD患者的痰中性粒细胞CCR1表达量高于肺炎患者。


4.外周血和痰中性粒细胞联合CCR1在作为COPD诊断标志物中的应用。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，COPD患者的外周血和痰中性粒细胞氧化吞噬氧化阳性率及CCR1表达量低于正常值。


6.痰中性粒细...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫佩毅，朱晴晖，金姝，张建宾，张骥，苏立杰，
申请(专利权)人：上海市普陀区人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31