本发明专利技术提供了一种抗体检测试剂盒，包括程序性死亡受体1的抗体以及至少三种簇分化抗原的抗体。所述程序性死亡受体1的抗体以及每种簇分化抗原的抗体携带有不同的荧光素，所述至少三种簇分化抗原包括成熟T细胞表面标记物、辅助T细胞表面标记物和细胞毒T细胞表面标记物，能够用于快速考察PD‑1蛋白的表达情况，且所述程序性死亡受体1的抗体所携带的荧光素的染色指数高于所述每种簇分化抗原的抗体所携带的荧光素的染色指数，有利于准确考察PD‑1蛋白的表达情况。本发明专利技术还提供了所述抗体检测试剂盒在免疫分析方面的应用。
【技术实现步骤摘要】
抗体检测试剂盒以及在免疫分析方面的应用
本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及抗体检测试剂盒以及在免疫分析方面的应用。
技术介绍
近年来，肿瘤免疫治疗取得了令人瞩目的成果，诸多临床研究已证实肿瘤免疫治疗可改善肿瘤患者的预后，显著延长患者的生存期。与此同时，肿瘤免疫治疗生物标志物的探索也成为了肿瘤免疫治疗研究的热点。程序性死亡受体1(Programmeddeath-1，PD-1)是一种共刺激分子，呈诱导性表达于活化的T细胞、B细胞和NK细胞表面，PD-1与其配体PD-L1结合后，可以抑制TCR活化信号的转导，从而抑制T淋巴细胞的活化、生存以及效应功能，诱导肿瘤特异性T淋巴细胞凋亡，促进CD4+T淋巴细胞向Foxp3+Treg分化，同时抵御细胞毒性T淋巴细胞对肿瘤细胞的攻击。因此，考察PD-1蛋白的表达情况具有重要的临床意义。公开号为CN109270265A的中国专利技术专利申请公开了一种人体外周血杀伤性免疫细胞功能评估试剂盒，该试剂盒包含带荧光素标记的抗人CD3抗体、抗人CD8抗体、抗人CD8抗体、抗人PD-1抗体等17种抗体。使用该试剂盒的全部17种抗体与人体外周血进行孵育后，再使用流式细胞仪对得到的检测样本进行分析，以通过获得的32项免疫功能指标评估人体外周血杀伤性免疫细胞的免疫功能。然而，该种试剂盒的抗体种类繁多，且无法直观清晰地考察PD-1蛋白的表达情况，且提高了检测成本。因此，有必要开发一种新型的抗体检测试剂盒以及检测方法以解决现有技术中存在的上述问题。
技术实现思路
<br>本专利技术的目的在于提供一种抗体检测试剂盒以及所述抗体检测试剂盒在免疫分析方面的应用，以准确快速考察PD-1蛋白的表达情况，同时降低检测成本。为实现上述目的，本专利技术的所述抗体检测试剂盒包括程序性死亡受体1的抗体以及至少三种簇分化抗原的抗体，所述至少三种簇分化抗原包括成熟T细胞表面标记物、辅助T细胞表面标记物和细胞毒T细胞表面标记物；所述程序性死亡受体1的抗体以及每种簇分化抗原的抗体携带的荧光素各不相同。本专利技术的所述抗体检测试剂盒的有益效果在于：所述抗体检测试剂盒包括的程序性死亡受体1的抗体以及每种簇分化抗原的抗体携带有不同的荧光素，所述至少三种簇分化抗原包括成熟T细胞表面标记物、辅助T细胞表面标记物和细胞毒T细胞表面标记物，能够用于快速考察PD-1蛋白的表达情况。优选的，所述成熟T细胞表面标记物包括CD3，所述辅助T细胞表面标记物包括CD4，所述细胞毒T细胞表面标记物包括CD8。其有益效果在于：通过CD4和CD8考察PD-1蛋白的表达情况，提高结果的准确性。进一步优选的，所述至少三种簇分化抗原还包括CD45。优选的，所述程序性死亡受体1的抗体以及所述至少三种簇分化抗原的抗体均为单克隆抗体。其有益效果在于：有利于提高抗体检测试剂盒的灵敏度和特异性。进一步优选的，所述程序性死亡受体1的抗体以及所述至少三种簇分化抗原的抗体均为鼠抗人抗体。优选的，所述程序性死亡受体1的抗体所携带的荧光素的染色指数高于所述每种簇分化抗原的抗体所携带的荧光素的染色指数。其有益效果在于：有利于后续的流式细胞术分析中提高细胞阳性率的准确性。进一步优选的，所述程序性死亡受体1的抗体所携带的荧光素为藻红蛋白。进一步优选的，所述成熟T细胞表面标记物的抗体和所述辅助T细胞表面标记物的抗体中的任意一种所携带的荧光素为异硫氰酸，另一种所携带的荧光素为别藻蓝蛋白，所述细胞毒T细胞表面标记物的抗体所携带的荧光素为PerCP-Cy5.5和PE-Cy7中的任意一种，所述CD45的抗体所携带的荧光素为PerCP-Cy5.5和PE-Cy7中的任意一种。优选的，所述程序性死亡受体1的抗体以及每种簇分化抗原的抗体分别容纳于不同的容器中，以形成不同的检测试剂。其有益效果在于：便于根据不同的检测需求任意组合使用。进一步优选的，所述检测试剂为液态试剂或粉剂，所述液态试剂中，所述程序性死亡受体1的抗体的浓度为0.8微克/毫升-1.2微克/毫升，所述成熟T细胞表面标记物的抗体的浓度为2微克/毫升-3微克/毫升，所述辅助T细胞表面标记物的抗体的浓度为1.3微克/毫升-1.8微克/毫升，所述细胞毒T细胞表面标记物的抗体和所述CD45的抗体中的任意一种的浓度为4.8微克/毫升-7.2微克/毫升。本专利技术的所述抗体检测试剂盒在免疫分析方面的应用包括：将待检测样本、所述程序性死亡受体1的抗体以及所述至少三种簇分化抗原的抗体相混合后进行孵育处理和重悬处理，然后通过流式细胞术进行所述免疫分析。其有益效果在于：使用流式细胞术进行所述免疫分析，以提高检测结果的准确性。优选的，当所述至少三种簇分化抗原包括CD3、CD4和CD8，所述免疫分析包括统计CD3+CD4+PD-1+的细胞阳性率以及统计CD3+CD8+PD-1+的细胞阳性率。进一步优选的，所述免疫分析包括统计CD3+CD4+的细胞阳性率以及统计CD3+CD8+的细胞阳性率，并根据所述CD3+CD4+的细胞阳性率和所述CD3+CD8+的细胞阳性率统计所述CD3+CD4+PD-1+的细胞阳性率以及所述CD3+CD8+PD-1+的细胞阳性率。进一步优选的，当所述至少三种簇分化抗原还包括CD45，所述免疫分析还包括统计CD45+CD3+的细胞阳性率。附图说明图1为本专利技术实施例1的以携带有FITC的CD3细胞数目为X轴，侧向散射光强度为Y轴的细胞群散点图；图2为本专利技术实施例1的以携带有FITC的CD3细胞数目为X轴，携带有APC的CD4细胞数目为Y轴的细胞群散点图；图3为本专利技术实施例1的以携带有PE的PD-1细胞数目为X轴，侧向散射光强度为Y轴的细胞群散点图；图4为本专利技术实施例1的以携带有FITC的CD3细胞数目为X轴，携带有PerCP-Cy5.5的CD8细胞数目为Y轴的细胞群散点图；图5为本专利技术实施例1的以携带有PE的PD-1细胞数目为X轴，侧向散射光强度为Y轴的细胞群散点图；图6为本专利技术实施例2的以携带PE-Cy7的CD45的细胞数目为X轴，侧向散射光强度为Y轴得到的细胞群散点图；图7为本专利技术实施例2的以携带有FITC的CD3的细胞数目为X轴，侧向散射光强度为Y轴的细胞群散点图；图8为本专利技术实施例2的以携带有FITC的CD3的细胞数目为X轴，携带APC的CD4的细胞数目为Y轴的细胞群散点图；图9为本专利技术实施例2的以携带有PE的PD-1的细胞数目为X轴，侧向散射光强度为Y轴的细胞群散点图；图10为本专利技术实施例2的以携带有FITC的CD3的细胞数目为X轴，携带PerCP-Cy5.5的CD8的细胞数目为Y轴的细胞群散点图；图11为本专利技术实施例2的以携带有PE的PD-1的细胞数目为X轴，侧向散射光强度为Y轴的细胞群散点图；图12为本专利技术实施例3的以携带APC的CD3细胞数目为X轴，侧向散射光强度为Y轴得到的细胞群散点图；图13为本专利技术实施例3的以携带AP本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体检测试剂盒，其特征在于，包括程序性死亡受体1的抗体以及至少三种簇分化抗原的抗体，所述至少三种簇分化抗原包括成熟T细胞表面标记物、辅助T细胞表面标记物和细胞毒T细胞表面标记物；/n所述程序性死亡受体1的抗体以及每种簇分化抗原的抗体携带的荧光素各不相同。/n
【技术特征摘要】
1.一种抗体检测试剂盒，其特征在于，包括程序性死亡受体1的抗体以及至少三种簇分化抗原的抗体，所述至少三种簇分化抗原包括成熟T细胞表面标记物、辅助T细胞表面标记物和细胞毒T细胞表面标记物；
所述程序性死亡受体1的抗体以及每种簇分化抗原的抗体携带的荧光素各不相同。
2.根据权利要求1所述的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述成熟T细胞表面标记物包括CD3，所述辅助T细胞表面标记物包括CD4，所述细胞毒T细胞表面标记物包括CD8。
3.根据权利要求2所述的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述至少三种簇分化抗原还包括CD45。
4.根据权利要求1所述的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述程序性死亡受体1的抗体以及所述至少三种簇分化抗原的抗体均为单克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述程序性死亡受体1的抗体以及所述至少三种簇分化抗原的抗体均为鼠抗人抗体。
6.根据权利要求3所述的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述程序性死亡受体1的抗体所携带的荧光素的染色指数高于所述每种簇分化抗原的抗体所携带的荧光素的染色指数。
7.根据权利要求6所述的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述程序性死亡受体1的抗体所携带的荧光素为藻红蛋白。
8.根据权利要求6所述的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述成熟T细胞表面标记物的抗体和所述辅助T细胞表面标记物的抗体中的任意一种所携带的荧光素为异硫氰酸，另一种所携带的荧光素为别藻蓝蛋白，所述细胞毒T细胞表面标记物的抗体所携带的荧光素为PerCP-Cy5.5和PE-Cy7中的任意一种，所述CD45的抗体所携带的荧光素为PerCP-Cy5.5和PE-Cy7中的任意一种。
【专利技术属性】
技术研发人员：熊霞，熊顺强，
申请(专利权)人：江西赛基生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36
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