基于流式细胞仪同时检测12种细胞因子的试剂盒及方法技术

本发明专利技术提供了一种基于流式细胞仪同时检测12种细胞因子的试剂盒及方法，针对12种细胞因子，分别筛选和优化12种细胞因子的抗体1序列和抗体2序列，经真核细胞表达系统表达制备人源化的重组抗体；其中抗体1用于制备偶联微球的抗体溶液，抗体2用于制备荧光标记的抗体溶液；并针对其中最难检测的IL‑17A抗体序列进行多次突变筛选和重链轻链组合配对筛选，获得最优选的IL‑17A抗体1和IL‑17A抗体2序列。制备的试剂盒经流式细胞仪实现同时检测12种细胞因子，检测过程只需一次孵育一次洗涤，且能提高检测的准确性和灵敏度，控制批间差，对血清样品和血浆样品都实现精确检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及流式细胞，具体涉及一种基于流式细胞仪同时检测12种细胞因子的试剂盒及方法。

技术介绍

1、细胞因子由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等。细胞因子的分泌在病理条件下会发生改变，如各种感染性疾病等。细胞因子的检测为临床上预防、诊断、治疗疾病提供了科学辅助依据。

2、辅助性t细胞（th）是t细胞的亚群之一，通常指一类具有协助体液免疫和细胞免疫应答能力的t细胞亚群。根据所分泌细胞因子的不同，th细胞可分为th1、th2等细胞亚群。目前，研究较多的分泌细胞因子的细胞为th1和th2细胞。th1细胞主要分泌促炎细胞因子ifn-γ、il-2和tnf-α，它们有利于b细胞产生有调理作用的抗体（il-2、il-4、il-6、il-10、tnf-α、ifn-γ、iga）和与补体相结合的抗体（igm、il-2、il-4、il-6、il-10、tnf-α、ifn-γ），能够刺激巨噬细胞、nk细胞、cd8+细胞毒性t细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于流式细胞仪检测12种细胞因子的试剂盒，其特征在于，包括：偶联微球的抗体溶液，荧光标记的抗体溶液，微球缓冲液、样品稀释液和洗涤缓冲液；所述偶联微球的抗体溶液中的抗体为抗体1，荧光标记的抗体溶液中的抗体为抗体2；所述抗体1包括IL-1β抗体1、IL-2抗体1、IL-4抗体1、IL-5抗体1、IL-6抗体1、IL-8抗体1、IL-10抗体1、IL-12p70抗体1、IL-17A抗体1、IFN-γ抗体1、TNF-α抗体1和IFN-α抗体1；抗体2包括IL-1β抗体2、IL-2抗体2、IL-4抗体2、IL-5抗体2、IL-6抗体2、IL-8抗体2、IL-10抗体2、IL-12p70抗体...

【技术特征摘要】

1.一种基于流式细胞仪检测12种细胞因子的试剂盒，其特征在于，包括：偶联微球的抗体溶液，荧光标记的抗体溶液，微球缓冲液、样品稀释液和洗涤缓冲液；所述偶联微球的抗体溶液中的抗体为抗体1，荧光标记的抗体溶液中的抗体为抗体2；所述抗体1包括il-1β抗体1、il-2抗体1、il-4抗体1、il-5抗体1、il-6抗体1、il-8抗体1、il-10抗体1、il-12p70抗体1、il-17a抗体1、ifn-γ抗体1、tnf-α抗体1和ifn-α抗体1；抗体2包括il-1β抗体2、il-2抗体2、il-4抗体2、il-5抗体2、il-6抗体2、il-8抗体2、il-10抗体2、il-12p70抗体2、il-17a抗体2、ifn-γ抗体2、tnf-α抗体2和ifn-α抗体2；所述il-17a抗体1的重链的cdr3区的氨基酸序列如seq id no:193所示，轻链的cdr3区的氨基酸序列如seq id no:223所示；il-17a抗体2的重链的cdr3区的氨基酸序列如seq id no:263所示，轻链的cdr3区的氨基酸序列如seqid no:279所示。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述il-17a抗体1的重链的氨基酸序列如seq id no:116所示，轻链的氨基酸序列如seq id no:117所示，il-17a抗体2的重链的氨基酸序列如seq id no:118所示，轻链的氨基酸序列如seq id no:119所示。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，用于编码所述抗体1和抗体2的重链与轻链的核苷酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈善问，徐陈槐，周延庆，沈承昊，杨明，
申请(专利权)人：江西赛基生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：