人先天性淋巴细胞前体：鉴定、表征、应用制造技术

先天性淋巴细胞(ILC)代表先天形式的T辅助细胞和细胞毒性T细胞，其分化自定型的ILC前体(ILCP)。尽管如此，ILCP与成熟的组织驻留的ILC如何相关仍不清楚。鉴定了存在于血液和所有测试的淋巴和非淋巴人组织中的ILCP。人ILCP未能表达成熟NK细胞和ILC的特征性转录因子(TF)和细胞因子输出，但是在表观遗传上已经做好准备。人ILCP在体外和体内稳健地产生所有ILC亚组。虽然人ILCP表达RAR相关孤儿受体C(RORC)，但循环ILCP可见于RORC缺陷患者，其保留EOMES

Identification, characterization and application of human innate lymphocyte precursor

The innate lymphocyte (ILC) represents the innate form of T helper cells and cytotoxic T cells, which differentiate into a self-defined ILC precursor (ILCP). However, it is not clear how ILCP is related to the ILC where mature organizations reside. ILCP was identified in the blood and in all tested lymphoid and non lymphoid human tissues. Human ILCP can not express the characteristic transcription factor (TF) and cytokine output of mature NK cells and ILC, but it is ready for epigenetics. Human ILCP stably produced all ILC subgroups in vitro and in vivo. Although human ILCP expresses rar related orphan receptor C (RORC), circulating ILCP can be seen in RORC deficient patients, who retain eomes

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人先天性淋巴细胞前体：鉴定、表征、应用
技术介绍
先天性淋巴细胞(ILC)是在早期免疫应答中发挥重要作用的淋巴效应细胞的新家族，由细胞毒性细胞(NK细胞)和‘辅助样’ILC组成。后者的特征在于表达白细胞介素-7受体(IL-7Rα/CD127)，并基于它们的转录因子(TF)和特征性的与T辅助(TH)细胞类似的细胞因子产生而分成三个不同的组。第1组ILC(ILC1)表达T-BET/TBX21，并产生TH1相关细胞因子IFN-γ和TNF-α。第2组ILC(ILC2)通过GATA-3和RORα依赖性途径分泌TH2相关的细胞因子IL-5和IL-13。第3组ILC(ILC3)利用相关的孤儿受体C(编码RORγt的RORC)来驱动TH17相关的细胞因子IL-17和/或IL-22的产生(Serafini等，2015；Spits等，2013)。这些不同的ILC亚组存在于不同的淋巴组织和非淋巴组织中，并且在粘膜位点富集，它们在所述粘膜位点的屏障功能和先天免疫防御中发挥重要作用(Artis和Spits，2015；Eberl等，2015)。首先在次级淋巴组织中鉴定出多个人ILC亚组，随后在几个非淋巴组织位点(肠、肺、肝、皮肤)也有报道(综述于(Juelke和Romagnani，2016))。第1组ILC可以产生1型细胞因子(例如，IFNγ和TNF)，并且包含自然杀伤(NK)细胞和ILC1(维基百科)。ILC1是与ILC3密切相关的弱细胞毒性细胞(同上)。NK细胞是细胞毒性先天效应细胞(同上)。它们遍及血液、器官和淋巴组织分布，占外周血淋巴细胞的15％左右(同上)。NK细胞在肿瘤监测和病毒感染细胞的快速消除中发挥作用(同上)。已经描述了两种不同的产生IFN-γ的ILC1群。已经在扁桃体和发炎的肠道中鉴定了表达高水平CD127(称为CD127+ILC1)和CD161，但缺乏其他特异性表面标志物的T-BET+细胞(Bernink等，2013)。相反，表达NKp44和CD103但不表达CD127的上皮内ILC1存在于粘膜位点(Fuchs等，2013)。这两种ILC1均响应IL-12产生IFN-γ，并且可通过最小的Eomesodermin(EOMES)表达由NK细胞分化。第2组ILC可产生2型细胞因子(例如IL-4、IL-5、IL-9、IL-13)(维基百科)。ILC2(也称为天然辅助细胞、核细胞或先天辅助细胞2)在响应蠕虫感染时发挥分泌2型细胞因子的关键作用(同上)。它们还与过敏性肺部炎症的发展有关(同上)。它们表达趋化因子的特征性表面标志物和受体，其参与淋巴细胞在特定器官位点的分布(同上)。它们需要IL-7用于其发育，所述IL-7激活两种转录因子(这些细胞都需要)-RORα和GATA3。ILC2对于肺中局部Th2抗原的初级应答是至关重要的，但对于全身递送的Th2抗原的应答是不必要的(同上)。人GATA-3+ILC2表达化学引诱物受体CRTh2、IL-25R和IL-33R(等，2011)，其分布广泛(Montaldo等，2015)(肺、皮肤、肠、鼻息肉、脂肪组织)，并且在各种生理和病理情况下产生2型细胞因子IL-5和IL-13(综述于(Kim和Artis，2015))。第3组ILC通过它们产生细胞因子IL-17A和/或IL-22的能力来定义(维基百科)。它们包含ILC3和淋巴组织诱导(LTi)细胞(同上)。ILC3是淋巴细胞群，其可以产生IL-22并表达NKp46(NK细胞活化受体)(同上)。然而，ILC3与NK细胞不同，因为它们依赖于转录因子RORγt，它们缺乏细胞毒性效应物(穿孔素、颗粒酶和死亡受体)并且它们不产生IFNγ或TNF(同上)。它们主要存在于粘膜组织中，特别是在肠道中(同上)。淋巴组织诱导(‘LTi’)细胞是表达淋巴组织发育所需分子的ILC亚组(同上)。它们对于胚胎发育期间淋巴器官的发育至关重要，并在出生后调节淋巴组织的结构(同上)。它们还与T细胞记忆的维持有关(同上)。第3组ILC包括胎儿淋巴组织诱导(LTi)细胞以及表达转录因子RORγt并产生细胞因子IL-17A和/或IL-22的成年谱系-CD127+CD117+细胞(综述于(Montaldo等，2015)。已经在胎儿肠系膜淋巴结和脾(Cupedo等，2009)和成人扁桃体、肠、脾、皮肤、肺、子宫内膜和蜕膜中鉴定了ILC3。ILC3的一个亚组表达天然细胞毒性受体(NCR，包括NKp30、NKp44和NKp46)，并在产生IL-22的细胞中富集(Cella等，2009)。小鼠成熟ILC通过共同的淋巴祖细胞(CLP)从造血干细胞(HSC)分化，在胎儿的肝(FL)和成人的骨髓(BM)中产生不同的ID2+TCF-1+PLZF+ILC前体(ILCP)(Constantinides等，2014；Yang等，2015)。在小鼠中，不同的TF和信号转导通路调节这一过程(Serafini等，2015)；相比之下，人ILC的发育尚未很好地表征(在(Juelke和Romagnani，2016)中综述)。已经在FL、BM、脐带血(CB)和成人扁桃体中鉴定了产生细胞毒性CD56+NK细胞的NK前体(NKP)(Renoux等，2015)，而定型ILC3前体(ILC3P)则在扁桃体和肠固有层中发现，但在外周血(PB)、胸腺或BM中未发现，所述ILC3P前体在体外产生生产IL22的NCR+ILC3(Montaldo等，2014)。最近的一项研究鉴定了表达RORγt的扁桃体人ILCP，其可以发育为成熟的细胞毒性和辅助性ILC(Scoville等，2016)。有趣的是，这些人NKP、ILC3P和ILCP是CD34+，并且在次级淋巴组织中富集，但是在循环中很少或不存在。尚不清楚这种ILCP是否与组织中发现的成熟ILC亚组在发育上相关。先天性淋巴细胞在先天免疫反应的发展中非常重要，并且在保护性免疫以及调节体内平衡和炎症中起重要作用(维基百科)。因此，它们的失调可导致免疫病理学，例如过敏、支气管哮喘和自身免疫疾病(同上)。为了提供ILC的来源，本领域需要开发用于分离ILC的前体细胞的组合物和方法。本专利技术满足了这种需要。专利技术简述本专利技术涵盖包含先天性淋巴细胞前体(ILCP)的组合物、该组合物的用途、以及制备和使用这些组合物的方法。在各种实施方案中，组合物包含纯化的先天性淋巴细胞前体(ILCP)群，其中所述群中至少75％，优选至少90％的细胞具有表型CD127+CD117+CD3-CRTh2-，并且任选地具有表型CD7+、NKp44-、CD94-和/或Lin-，和/或任选的CD26+和/或CD62L+。在一些实施方案中，所述群中至少75％，优选至少90％的细胞具有表型CD127+CD117+Lin-CRTh2-(其中Lin-包含CD3-)，并且任选地具有表型CD7+、NKp44-和/或CD94-，和/或任选的CD26+和/或CD62L+。优选地，所述群中至少90％的细胞具有表型CD127+CD117+Lin-CRTh2-CD7+或CD127+CD117+Lin-CRTh2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.纯化的先天性淋巴细胞前体(ILCP)群，其中所述群中至少75％的细胞具有表型CD127+CD117+CD3-CRTh2-，和任选的CD7+、NKp44-、CD94-、Lin-、CD26+和/或CD62L+。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161130 US 62/428310;20170308 US 62/4685501.纯化的先天性淋巴细胞前体(ILCP)群，其中所述群中至少75％的细胞具有表型CD127+CD117+CD3-CRTh2-，和任选的CD7+、NKp44-、CD94-、Lin-、CD26+和/或CD62L+。


2.权利要求1所述的纯化的ILCP群，其中所述群中至少90％的细胞具有表型CD127+CD117+CD3-CRTh2-，并且任选地具有表型CD7+、NKp44-、CD94-、Lin-、CD26+和/或CD62L+。


3.用于制备纯化的先天性淋巴细胞前体(ILCP)群的方法，包括：
提供人细胞样品，和
在细胞样品中选择具有表型CD127+CD117+CD3-CRTh2-，和任选的CD7+、NKp44-、CD94-、Lin-、CD26+和/或CD62L+的细胞以提供细胞群，其中所述群中至少75％的细胞具有表型CD127+CD117+CD3-CRTh2-，和任选的CD7+、NKp44-、CD94-、Lin-、CD26+和/或CD62L+。


4.用于制备选自ILC1、ILC2、ILC3和NK细胞的细胞类型的方法，包括
提供先天性淋巴细胞前体(ILCP)群，
使所述细胞群经受外部刺激，和
检测选自ILC1、ILC2、ILC3和NK细胞的细胞类型的增加。


5.权利要求4所述的方法，其中所述群中至少90％的细胞具有表型CD127+CD117+CD3-CRTh2-，和任选的CD7+、NKp44-、CD94-、Lin-、CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·迪桑托，A·I·林，
申请(专利权)人：巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：法国;FR