用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)及TIL和TNFRSF激动剂的治疗组合制造技术

技术编号:22569517 阅读:117 留言:0更新日期:2019-11-17 10:01
本发明专利技术提供了用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂(例如,4‑1BB激动剂、CD27激动剂、糖皮质激素诱导的TNF受体相关激动剂、OX40激动剂、HVEM激动剂或CD95激动剂)扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的方法,并且本文公开了此类扩增的TIL在治疗疾病(如癌症)中的用途。另外,在一些实施方式中,本文公开了可用于治疗疾病(如癌症)的TIL和TNFRSF激动剂的治疗组合,包括它们的组合物、用途和施用方案。

Amplification of tumor infiltrating lymphocytes (TIL) with tumor necrosis factor receptor superfamily (tnfrsf) agonists and treatment combination of TIL and tnfrsf agonists

The invention provides a method for amplifying tumor infiltrating lymphocytes (TILs) with tumor necrosis factor receptor superfamily (tnfrsf) agonists (e.g., 4 \u2011 1BB agonists, CD27 agonists, glucocorticoid induced TNF receptor related agonists, OX40 agonists, HVEM agonists or CD95 agonists), and discloses the use of such expanded TILs in the treatment of diseases (e.g. cancer). In addition, in some embodiments, a treatment combination of TIL and tnfrsf agonists that can be used to treat diseases (such as cancer) is disclosed, including their composition, use and application scheme.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)及TIL和TNFRSF激动剂的治疗组合相关申请的交叉引用本国际申请要求2017年1月6日提交的美国临时申请号62/443,556、2017年2月17日提交的美国临时申请号62/460,477、2017年7月14日提交的美国临时申请号62/532,807和2017年10月2日提交的美国临时申请号62/567,151的优先权,其全部内容通过引用并入本文。
本文公开了使用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF,tumornecrosisfactorreceptorsuperfamily)激动剂(例如,4-1BB激动剂、CD27激动剂、糖皮质激素诱导的TNF受体相关激动剂、OX40激动剂、HVEM激动剂或CD95激动剂)扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL,tumorinfi1tratinglymphocyte)的方法,还涉及扩增的TIL在治疗疾病(如癌症)中的应用。此外,本文公开了TIL和TNFRSF激动剂的治疗组合(包括它们的组合物)及其在治疗疾病(如癌症)中的应用。
技术介绍
使用过继性自体转移肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)治疗大体积、难治性的癌症代表了一种治疗预后不良患者的有效方法。参见Gattinoni等,Nat.Rev.Immunol.,2006,6,383-393。TIL以T细胞为主,基于IL-2的TIL扩增(随后是“快速扩增过程”(REP,rapidexpansionprocess)),由于其速度和效率,已成为TIL扩增的优选方法。参见Dudley等,Science,2002,298,850-54;Dudley等,J.Clin.Oncol.,2005,23,2346-57;Dudley等,J.Clin.Oncol.,2008,26,5233-39;Riddell等,Science1992,257,238-41;Dudley等,J.Immunother.,2003,26,332-42。为了改善TIL治疗黑色素瘤的临床反应并将TIL疗法扩展到其他肿瘤类型,已对许多方法进行了探索,但取得的成功有限,并且该领域仍具有挑战性。Goff等,J.Clin.Oncol.,2016,34,2389-97;Dudley等,J.Clin.Oncol.,2008,26,5233-39;Rosenberg等,Clin.CancerRes.,2011,17,4550-57。许多研究重点被放在扩增期间TIL的选择上以选择特定亚群(例如CD8+T细胞)或者靶向驱动突变(drivermutation),例如突变的ERBB2IP表位,或者KRAS原癌基因中的驱动突变。Tran等,N.Engl.J.Med.,2016,375,2255-62;Tran等,Science,2014,344,641-45。然而,即使此种选择方法可以被发展用于在更大型的临床试验中显示效力,但是它们显著增加了进行TIL治疗的持续时间、复杂性和成本,并且限制了在不同癌症类型中广泛应用TIL疗法的可能性。4-lBB(也称为CD137和TNFRSF9)最初被鉴定为在激活的T细胞上表达的诱导型共刺激受体,它是TNFRSF的跨膜糖蛋白成员。Watts,Annu.Rev.Immunol.2005,23,23–68。4-1BB是II型跨膜糖蛋白,它在激活的T淋巴细胞上表达,并且它在CD8+T细胞上的表达程度高于CD4+T细胞。4-1BB也在树突状细胞、滤泡树突状细胞、自然杀伤(NK)细胞、粒细胞、炎症部位的血管壁细胞、肿瘤血管和动脉粥样硬化内皮上表达。刺激4-1BB的配体(4-1BBL)在激活的抗原呈递细胞(APC)、骨髓祖细胞和造血干细胞上表达。4-1BB是激活诱导的T细胞共刺激分子。在T细胞中,经由4-lBB的信号传导上调生存基因(survivalgene)、增强细胞分裂、诱导细胞因子产生,并防止激活诱导的细胞死亡。目前对4-1BB的理解表明:表达通常依赖于激活,并且包括广泛的免疫细胞亚群,包括激活的NK细胞和NKT细胞(NKT细胞);调节性T细胞;树突状细胞(DC),包括滤泡DC;被刺激的肥大细胞、分化骨髓细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和激活的B细胞。4-1BB强烈增强CD8+T细胞的增殖和效应子(effector)功能。4-lBB的交联增强T细胞的增殖、IL-2分泌的生存和细胞溶解的活性。此外,抗4-1BB单克隆抗体具有强抗肿瘤特性,这反过来又是其强大的激活CD8+T细胞、产生IFN-g和诱导细胞溶解标志物的能力的结果。Vinay和Kwon,Mol.CancerTherapeutics2012,11,1062-70;Lee等,PLoSOne,2013,8,e69677,1-11。在B细胞受体结合时,激活的正常人B细胞上的4-1BB与它的配体的相互作用刺激增殖并增强生存。在至少两项已发表研究中,已研究了4-1BB的参与在B细胞淋巴瘤中的潜在影响。对几种类型的人原发性NHL样品的评估表明,4-1BB主要在浸润性T细胞而非淋巴瘤细胞上表达。Houot等,Blood,2009,114,3431-38。将4-1BB激动剂与利妥昔单抗和NK细胞一起添加至B淋巴瘤细胞的体外培养物中,结果淋巴瘤杀伤增加。Kohrt等,Blood,2011,117,2423-32。此外,如国际专利申请公开号WO2015/119923中所描述的,在两个实验中使用PF-05082566(剂量为0.001mg/kg至100mg/kg)在食蟹猴中进行B细胞免疫表型分析;在这些实验中,外周血B细胞数不变或减少。在幼稚T细胞表面检测不到4-1BB,但激活后表达增加。4-1BB激活后,TNFR相关因子(TRAF)家族的两个促生存成员(TRAF1和TRAF2)被募集到4-1BB细胞质尾部,导致NFkB和丝裂原激活蛋白(MAP)激酶(包括Erk、Jnk和p38MAP激酶)级联反应的下游激活。NFkB激活导致Bcl-2家族的促生存成员(Bfl-1和Bel-XL)的上调。促凋亡蛋白Bim以依赖于TRAF1和Erk的方式下调。Sabbagh等,J.Immunol.,2008,180,8093-8101。报道显示,4-1BB激动剂单克隆抗体(mAb)增加共刺激分子表达并显著增强细胞溶解性T淋巴细胞应答,从而在各种模型中产生抗肿瘤功效。4-1BB激动剂mAb在预防和治疗方案以及单一疗法和联合疗法肿瘤模型中均已显示出功效,并且已建立了持久的抗肿瘤保护性T细胞记忆应答。Lynch等,Immunol.Rev.,2008,222,277-286。4-1BB激动剂还抑制各种自身免疫模型中的自身免疫反应。Vinay等,J.Mol.Med.,2006,84,726-36。OX40受体(OX40)(也称为TNFRSF4、CD134、ACT-4和ACT35)是TNF受体家族的成员,它在激活的CD4+T细胞上表达(参见WO95/12673)。通过存在于激活的B细胞和树突状细胞上的OX40配体(名为OX40L、gp34或ACT-4配体)触发该受体会增强免疫应答期本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用肿瘤浸润淋巴细胞TIL群治疗癌症的方法,其中,所述方法包括以下步骤:/n(a)从患者切除肿瘤;/n(b)从肿瘤中获得第一TIL群;/n(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增,获得第二TIL群,其中,第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍,第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族TNFRSF激动剂,以及初始扩增进行21天或更短的时间;/n(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增,获得第三TIL群,其中,快速扩增开始7天后,第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍;第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞PBMC和可选的TNFRSF激动剂和第二种TNFRSF激动剂,以及快速扩增进行14天或更短的时间;/n(e)收获第三TIL群;以及/n(f)向患者施用治疗有效份的第三TIL群。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170106 US 62/443,556;20170217 US 62/460,477;20171.一种用肿瘤浸润淋巴细胞TIL群治疗癌症的方法,其中,所述方法包括以下步骤:
(a)从患者切除肿瘤;
(b)从肿瘤中获得第一TIL群;
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增,获得第二TIL群,其中,第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍,第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族TNFRSF激动剂,以及初始扩增进行21天或更短的时间;
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增,获得第三TIL群,其中,快速扩增开始7天后,第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍;第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞PBMC和可选的TNFRSF激动剂和第二种TNFRSF激动剂,以及快速扩增进行14天或更短的时间;
(e)收获第三TIL群;以及
(f)向患者施用治疗有效份的第三TIL群。


2.如权利要求1所述的方法,其中,TNFRSF激动剂选自:4-1BB激动剂、OX40激动剂、CD27激动剂、GITR激动剂、HVEM激动剂、CD95激动剂及它们的组合。


3.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂,所述4-1BB激动剂选自:乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、融合蛋白,及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


4.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是OX40激动剂或它的片段、衍生物、变体、生物仿制药以及它们的组合。


5.如权利要求4所述的方法,其中,4-1BB激动剂融合蛋白包含:(i)第一可溶性4-1BB结合结构域,(ii)第一肽接头,(iii)第二可溶性4-1BB结合结构域,(iv)第二肽接头,和(v)第三可溶性4-1BB结合结构域,4-1BB激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域,所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域,所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。


6.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是OX40激动剂,所述OX40激动剂选自:他利昔珠单抗、GSK3174998、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、PF-04518600、CreativeBiolabsMOM-18455,及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


7.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是OX40激动剂,所述OX40激动剂是OX40激动剂融合蛋白。


8.如权利要求7所述的方法,其中,OX40激动剂融合蛋白包含:(i)第一可溶性OX40结合结构域,(ii)第一肽接头,(iii)第二可溶性OX40结合结构域,(iv)第二肽接头,和(v)第三可溶性OX40结合结构域,OX40激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域,所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域,所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。


9.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是CD27激动剂,所述CD27激动剂是伐立鲁单抗或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。


10.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是CD27激动剂,所述CD27激动剂是CD27激动剂融合蛋白。


11.如权利要求10所述的方法,其中,CD27激动剂融合蛋白包含:(i)第一可溶性CD27结合结构域,(ii)第一肽接头,(iii)第二可溶性CD27结合结构域,(iv)第二肽接头,和(v)第三可溶性CD27结合结构域,CD27激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域,所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域,所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。


12.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是GITR激动剂,所述GITR激动剂选自:TRX518、6C8、36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5,31H6、2155、698、706、827、1649、1718、1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10、9H6,以及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


13.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是GITR激动剂,所述GITR激动剂是GITR激动剂融合蛋白。


14.如权利要求13所述的方法,其中,GITR激动剂融合蛋白包含:(i)第一可溶性GITR结合结构域,(ii)第一肽接头,(iii)第二可溶性GITR结合结构域,(iv)第二肽接头,和(v)第三可溶性GITR结合结构域,GITR激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域,所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域,所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。


15.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是HVEM激动剂。


16.如权利要求15所述的方法,其中,HVEM激动剂是HVEM激动剂融合蛋白。


17.如权利要求16所述的方法,其中,HVEM激动剂融合蛋白包含:(i)第一可溶性HVEM结合结构域,(ii)第一肽接头,(iii)第二可溶性HVEM结合结构域,(iv)第二肽接头,和(v)第三可溶性HVEM结合结构域,HVEM激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域,所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域,所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。


18.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是CD95激动剂。


19.如权利要求1至2中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是CD95激动剂,所述CD95激动剂是CD95激动剂融合蛋白。


20.如权利要求19所述的方法,其中,CD95激动剂是一种融合蛋白,所述融合蛋白包含:(i)第一可溶性CD95结合结构域,(ii)第一肽接头,(iii)第二可溶性CD95结合结构域,(iv)第二肽接头,和(v)第三可溶性CD95结合结构域,所述融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域,所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域,所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。


21.如权利要求1至20中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用TNFRSF激动剂治疗患者,其中,TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用,每4周一次,持续至多8个周期。


22.如权利要求1至21中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在从患者切除肿瘤的步骤之前,用TNFRSF激动剂治疗患者,其中,TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用,每4周一次,持续至多8个周期。


23.如权利要求1至22中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂选自:乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、他利昔珠单抗、CreativeBiolabsMOM-18455,及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


24.如权利要求1至23中任一项所述的方法,其中,第一细胞培养基包含第二种TNFRSF激动剂。


25.如权利要求1至23中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂,第二种TNFRSF激动剂是OX40激动剂。


26.如权利要求1至25中任一项所述的方法,其中,在初始扩增期间,以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第一细胞培养基中:每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。


27.如权利要求1至26中任一项所述的方法,其中,在快速扩增期间,以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第二细胞培养基中:每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。


28.如权利要求24至27中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为0.1μg/mL至100μg/mL的浓度来添加。


29.如权利要求28所述的方法,其中,TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为20μg/mL至40μg/mL的浓度来添加。


30.如权利要求1至30中任一项所述的方法,其中,IL-2在第一细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。


31.如权利要求31所述的方法,其中,IL-2在第一细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。


32.如权利要求31所述的方法,其中,IL-2在第一细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。


33.如权利要求33所述的方法,其中,IL-2在第一细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。


34.如权利要求1至30中任一项所述的方法,其中,IL-2在第二细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。


35.如权利要求35所述的方法,其中,IL-2在第二细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。


36.如权利要求35所述的方法,其中,IL-2在第二细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。


37.如权利要求35所述的方法,其中,IL-2在第二细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。


38.如权利要求1至37中任一项所述的方法,其中,IL-15存在于第一细胞培养基中。


39.如权利要求38所述的方法,其中,IL-15在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。


40.如权利要求1至39中任一项所述的方法,其中,IL-15存在于第二细胞培养基中。


41.如权利要求40所述的方法,其中,IL-15在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。


42.如权利要求1至41中任一项所述的方法,其中,IL-21存在于第一细胞培养基中。


43.如权利要求42所述的方法,其中,IL-21在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。


44.如权利要求1至43中任一项所述的方法,其中,IL-21存在于第二细胞培养基中。


45.如权利要求44所述的方法,其中,IL-21在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。


46.如权利要求1至45中任一项所述的方法,其中,OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约10ng/mL至约60ng/mL的初始浓度存在。


47.如权利要求46所述的方法,其中,OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约30ng/mL的初始浓度存在。


48.如权利要求1至47中任一项所述的方法,其特征在于,初始扩增使用透气性容器进行。


49.如权利要求1至48中任一项所述的方法,其中,快速扩增使用透气性容器进行。


50.如权利要求1至49中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在向患者施用第三TIL群之前,用非清髓性淋巴细胞清除方案治疗患者。


51.如权利要求50所述的方法,其中,非清髓性淋巴细胞清除方案包括如下步骤:以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺2天,然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨5天。


52.如权利要求1至51中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用递减型IL-2方案治疗患者,其中,所述递减型IL-2方案包括:在第1天以18,000,000IU/m2的剂量、在第2天以9,000,000IU/m2的剂量以及在第3天和第4天以4,500,000IU/m2的剂量静脉内施用阿地白介素。


53.如权利要求1至51中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在向患者施用第三TIL群后,用聚乙二醇化的IL-2以0.10mg/天至50mg/天的剂量治疗患者。


54.如权利要求1至51中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用高剂量IL-2方案治疗患者。


55.如权利要求54所述的方法,其中,高剂量IL-2方案包括:每8小时静脉滴注输注15分钟来施用600,000IU/kg或720,000IU/kg的阿地白介素或它的生物仿制药或变体,直至耐受。


56.如权利要求1至55中任一项所述的方法,其中,所述癌症选自:黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌和肉瘤。


57.如权利要求1至56中任一项所述的方法,其中,所述癌症选自:非小细胞肺癌NSCLC、三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和葡萄膜(眼)黑色素瘤。


58.如权利要求1至57中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在从患者切除肿瘤之前,用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。


59.如权利要求58所述的方法,其中,PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自:尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗,及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


60.如权利要求1至59中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在从患者切除肿瘤之后,用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。


61.如权利要求60所述的方法,其中,PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自:尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗,及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


62.如权利要求1至61中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括如下步骤:在向患者施用第三TIL群之后,用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。


63.如权利要求62所述的方法,其中,PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自:尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗,及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


64.如权利要求1至63中任一项所述的方法,其中,第一细胞培养基还包含IL-4、IL-7或它们的组合。


65.如权利要求1至64中任一项所述的方法,其中,第二细胞培养基还包含IL-4、IL-7或它们的组合。


66.如权利要求1至65中任一项所述的方法,其中,初始扩增进行11天或更短的时间。


67.如权利要求1至65中任一项所述的方法,其中,快速扩增进行11天或更短的时间。


68.一种制备肿瘤浸润淋巴细胞TIL群的方法,其中,所述方法包括以下步骤:
(b)获得第一TIL群;
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增,获得第二TIL群,其中,第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍,第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族TNFRSF激动剂,初始扩增进行21天或更短的时间;
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增,获得第三TIL群,其中,快速扩增开始7天后,第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍;其中,第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞PBMC和可选的TNFRSF激动剂,快速扩增进行14天或更短的时间;
(e)收获第三TIL群。


69.如权利要求68所述的方法,其中,第一TIL群由肿瘤获得,所述肿瘤为从患者切除的肿瘤。


70.如权利要求68至69中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂选自:4-1BB激动剂、OX40激动剂、CD27激动剂、GITR激动剂、HVEM激动剂、CD95激动剂和它们的组合。


71.如权利要求68至70中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂。


72.如权利要求68至71中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂,所述4-lBB激动剂选自:乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101,及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


73.如权利要求68至72中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂,所述4-1BB激动剂是4-1BB激动剂融合蛋白。


74.如权利要求68至73中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂融合蛋白,所述4-lBB激动剂融合蛋白包含:(i)第一可溶性4-1BB结合结构域,(ii)第一肽接头,(iii)第二可溶性4-1BB结合结构域,(iv)第二肽接头,和(v)第三可溶性4-1BB结合结构域,所述4-lBB激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域,所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域,所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。


75.如权利要求68至74中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是OX40激动剂。


76.如权利要求68至75中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是OX40激动剂,所述OX40激动剂选自:他利昔珠单抗、GSK3174998、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、PF-04518600、CreativeBiolabsMOM-18455,及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。


77.如权利要求68至76中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是OX40激动剂,所述OX40激动剂是OX40激动剂融合蛋白。


78.如权利要求68至77中任一项所述的方法,其中,TNFRSF激动剂是OX40激动剂融合蛋白,所述OX40激动...

【专利技术属性】
技术研发人员:M·T·洛策K·皮特披猜
申请(专利权)人:艾欧凡斯生物治疗公司
类型:发明
国别省市:美国;US

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