一种海葡萄多糖的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种海葡萄多糖的提取方法，该方法包括以下步骤：(1)取海葡萄干品，除杂并打成粗粉，加入15倍体积的水，浸泡30min，在85℃的条件下，水浴浸提3次，每次120min；(2)合并提取液，12000r/min离心，抽滤，取滤液，减压浓缩，收集浓缩液；(3)在搅拌的过程中，往所述浓缩液中缓缓加入体积浓度为95％的乙醇中，并使得乙醇的终浓度为75％，然后密封静置12h，12000r/min离心，取沉淀物冷冻干燥，即得所述的海葡萄多糖。本方法不仅可处理海葡萄干品，而且多糖提取率高，适合大规模产业化生产。

A Method for Extracting Polysaccharide from Sea Grape

【技术实现步骤摘要】
一种海葡萄多糖的提取方法
本专利技术涉及有机高分子化合物的制备，具体涉及多糖的制备，特别是涉及绿藻门蕨藻科蔓生植物多糖的分离方法。技术背景海葡萄来源于蕨藻科蕨藻属植物长茎葡萄蕨藻CaulerpalentilliferaJ.Agardh.的藻体。目前，国内外大部分学者对长茎葡萄蕨藻的研究集中在其生物学特性、人工养殖技术和用于净化水质等方面，缺乏对其化学成分及其提取工艺的研究。海葡萄含有多糖、多酚、萜类等化学成分。其中多糖能够提高机体免疫力，具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、降血糖、降血脂、防辐射、抗菌、抗寄生虫等作用。但是，海葡萄不宜低温保存，常温下只能保存3～4天，大量叠放储存会加快样品的脱水腐烂，少量分批包装则需要庞大的空间而不利于运输，增加了样品从产区运输至加工场地的成本。另外，目前海域水污染严重，虽然采用人工栽培长茎葡萄蕨藻是一种较为可行的海水富营养化生物治理技术，但用于污染治理的海藻经济价值较低，自然灾害造成的损失较大，许多养殖业者和企业不愿涉及，故而海葡萄的产区较少，其利用价值的研究也依然停留在养殖和简单的食用方面。学者王小兵等报导了使用ASE150快速溶剂萃取仪分离新鲜成熟海葡萄中多糖的方法，该方法采用正交试验L9(33)对海葡萄多糖的提取时间、提取温度和静态提取次数进行了优化，所得到的海葡萄多糖的最佳工艺为温度120℃、静态提取2次、每次35min。但是，上述方法不仅海葡萄多糖得率仅为51.03(±0.62)％，而且实用性欠佳，既要使用不宜长时间存放的新鲜海葡萄，还要使用处理能力低的ASE150快速溶剂萃取仪。因此，寻找一种多糖得率高且可处理海葡萄干品的海葡萄多糖提取方法具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种海葡萄多糖的提取方法，该方法不仅可处理海葡萄干品，而且多糖提取率高。一种海葡萄多糖的提取方法，该方法包括以下步骤：(1)取海葡萄干品，除杂并打成粗粉，加入15倍体积的水，浸泡30min，在85℃的条件下，水浴浸提3次，每次120min；(2)合并提取液，12000r/min离心，抽滤，取滤液，减压浓缩，收集浓缩液；(3)在搅拌的过程中，将所述浓缩液缓缓加入体积浓度为95％的乙醇中，并使得乙醇的终浓度为75％，然后密封静置12h，12000r/min离心，取沉淀物冷冻干燥，即得所述的海葡萄多糖。由于水浴浸提液中含有大量的药渣，为了便于离心分离并提高离心分离速度，上述提取方法步骤(2)的离心前可增设初分离步骤，该初分离步骤可以是纱布过滤或3000r/min低速离心，去除药渣。由于温度越高乙醇的挥发速度越快，因此密封静置时对容器的密封性能的要求也就越高。为了解决上述技术问题，上述提取方法步骤(3)所述密封静置的温度条件为4℃。上述提取方法步骤(2)所述浓缩液在25℃下的相对密度为1.05～1.10。本专利技术所述方法的有益效果如下：(1)以海葡萄干品为原料，长期存放不变质，解决了鲜品易腐烂的问题，同时还可节约存放空间，降低运输成本。(2)总多糖的提取率高达60％以上。(3)无需借助快速溶剂萃取仪，既节约了设备投资，又扩大处理能力，可满足大规模产业化生产的要求。(4)水浴浸提，无须压力容器，既节约设备投资，又相对安全。附图说明图1为本专利技术所述提取方法的工艺流程图。图2为葡萄糖标准曲线图。图3为提取温度对海葡萄多糖得率影响的曲线图。图4为提取时间对海葡萄多糖得率影响的曲线图。图5为提取次数对海葡萄中多糖得率影响的曲线图。具体实施方式例1(海葡萄多糖的提取及其提取率的测定)一、提取海葡萄多糖如图1所示，本实施例所述方法由如下步骤组成：1、预处理：将深圳大鹏产海葡萄干品过筛掉筛盐及沙石，再捡出附着在海葡萄上的贝壳类，然后打成粗粉。2、提取称取10kg海葡萄干品的粗粉，置于提取罐中，加入150kg纯化水，浸泡30min，在85℃的条件下，水浴浸提3次，每次120min。3、离心和过滤合并提取液，3000r/min离心5分钟，抽滤除去粒径较大的药渣，滤液再12000r/min离心5分钟，真空抽滤除去细药渣，得滤液。4、浓缩将滤液60℃下减压浓缩至25℃下相对密度为1.05～1.10的浓缩液。5、醇沉将冷却后的浓缩液缓缓倒入95％乙醇中，并监测乙醇体积分数为75％(即终浓度)，然后，于4℃条件下密封静置12h。6、离心并冷冻干燥醇沉后，在转速为12000r/min条件下离心，取沉淀置于冷冻干燥机中干燥，即得海葡萄多糖782g。二、多糖提取率的测算1、海葡萄干品中海葡萄多糖含量的测定称取上述预处理步骤所得的海葡萄干品的粗粉5g，按学者杨仙凌报导的方法(杨仙凌.浙江象山产海藻多糖的提取及含量测定[J].浙江中医学院学报，2004年1月第28卷第1期)，测得深圳大鹏产海葡萄干品多糖的含量为10.82％，那么算得10kg深圳大鹏产海葡萄干品含海葡萄多糖1082g。具体测定方法参见上述文献《浙江象山产海藻多糖的提取及含量测定》第2.3节海藻多糖的含量测定的所述方法。2、海葡萄多糖样品纯度的测定(2.1)对照品溶液的制备精密称取105℃下干燥至恒重的葡萄糖适量，置于100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含葡萄糖1mg的对照品溶液。(2.2)标准曲线的制备取葡萄糖0.01g，精密称定，置于100mL容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，得1mg·mL-1对照品母液。分别取母液适量，稀释成浓度分别为0.01、0.03、0.05、0.07、0.10mg·mL-1的对照品溶液，分别取上述一系列浓度的溶液各1mL，分别置于10mL容量瓶中，各精密加入5％苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速加入浓硫酸溶液5.0mL，摇匀，放置5min，置40℃水浴中保温30min，取出，冷却至室温。以试剂空白为参比溶液，在487nm处测定各溶液的吸光度。得到5种浓度的标准液及空白试剂所对应的吸光度，以标准液溶液浓度(μg·mL-1)为横坐标(X)，吸光度为纵坐标(Y)，对上述结果进行线性回归。得到回归方程为y＝0.078x+0.093，相关系数为0.9995。方程中的y为吸光度，x为标准液的浓度。所述线性方程对应的标准曲线如附图2所示。(2.3)测定方法精密称取上述离心并冷冻干燥步骤得到的海葡萄多糖0.001g，置于10mL容量瓶中，加水溶解并定容，取1mL于10mL的具塞比色管中，再加入1.0mL5％苯酚溶液，摇匀，迅速加入浓硫酸5mL，摇匀，40℃水浴30min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在487nm波长处测定吸光度，将吸光度值代入上述线性方程计算出样品液的浓度，然后再根据样品液的体积算得本实例中所制得的海葡萄多糖的纯度为83.13％，从而计算出782g海葡萄多糖样品中纯多糖的含量为：782g×83.13％＝650g。3、计算提取率提取率＝650g÷1082g×100％＝60.10％。为了考察本方法的稳定性，本专利技术人分别以海南琼海龙湾港和山东青岛产海葡萄干品为原料，采用上述同样的方法提取海葡萄多糖并测算提取率，结果十分满意，提取率分别为61.31％和60.50％。例2(主要工艺参数对多糖提取率影响的研究)一、提取温度对多糖提取率的影响取实施例1预处理步骤所得的海葡萄干品的粗粉(深本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海葡萄多糖的提取方法，该方法包括以下步骤：(1)取海葡萄干品，除杂并打成粗粉，加入15倍体积的水，浸泡30min，在85℃的条件下，水浴浸提3次，每次120min；(2)合并提取液，12000r/min离心，抽滤，取滤液，减压浓缩，收集浓缩液；(3)在搅拌的过程中，将所述浓缩液缓缓加入体积浓度为95％的乙醇中，并使得乙醇的终浓度为75％，然后密封静置12h，12000r/min离心，取沉淀物冷冻干燥，即得所述的海葡萄多糖。

【技术特征摘要】
1.一种海葡萄多糖的提取方法，该方法包括以下步骤：(1)取海葡萄干品，除杂并打成粗粉，加入15倍体积的水，浸泡30min，在85℃的条件下，水浴浸提3次，每次120min；(2)合并提取液，12000r/min离心，抽滤，取滤液，减压浓缩，收集浓缩液；(3)在搅拌的过程中，将所述浓缩液缓缓加入体积浓度为95％的乙醇中，并使得乙醇的终浓度为75％，然后密封静置12h，12000r/min离心，取沉淀物冷冻干燥，...

【专利技术属性】
技术研发人员：石书江，李耿，曹跃明，谭彩军，罗纳川，
申请(专利权)人：深圳市蓝汀鼎执生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44